安煥霞+王占林+侯憲寬

摘要：以枸杞品種青杞1號(hào)葉片為外植體，比較不同激素濃度和配比對(duì)葉片愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，誘導(dǎo)葉片產(chǎn)生愈傷組織最佳的激素濃度與配比是0.7mg/L NAA+0.7mg/L 6-BA;對(duì)愈傷組織增殖效果最好的激素濃度與配比是1.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA;對(duì)愈傷組織分化效果最好的激素濃度與配比是1.3 mg/L KT+0.02 mg/L NAA。

關(guān)鍵詞：青杞1號(hào);枸杞;葉片;激素;愈傷組織誘導(dǎo)

中圖分類號(hào)： S567.1+90.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）04-0059-03

收稿日期：2014-12-17

基金項(xiàng)目：國(guó)家星火計(jì)劃重大項(xiàng)目（編號(hào)：2012GA870001）。

作者簡(jiǎn)介：安煥霞（1988—），女，河北邯鄲人，碩士研究生，研究方向?yàn)樯峙嘤-mail：m13086272187@163.com。

通信作者：王占林，研究員，研究方向?yàn)樯峙嘤-mail：1735105720@qq.com。

枸杞（Lycium barbarum L.） 在植物學(xué)分類學(xué)上屬被子植物門雙子葉植物綱茄科枸杞亞屬。既具有防風(fēng)固沙、保持水土的作用，又是名貴的中藥材，應(yīng)用前景十分廣闊[1-5]。 青海省柴達(dá)木地區(qū)平均海拔2 600～3 000 m，日照時(shí)間長(zhǎng)，晝夜溫差大，空氣濕度低，獨(dú)特的氣候條件使得枸杞具有粒大飽滿、肉質(zhì)肥厚、色澤鮮艷且味甘等特性，但枸杞產(chǎn)區(qū)存在品種混亂，高產(chǎn)高抗大果型品種匱乏現(xiàn)象，針對(duì)此問(wèn)題，青海省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)輻射育種培育出枸杞品種青杞1號(hào)。在栽培繁殖過(guò)程中，須保持枸杞木本優(yōu)良性狀，受繁殖材料限制，采用植物組織培養(yǎng)的方式進(jìn)行快速繁育，是一種極為經(jīng)濟(jì)有效的途徑。

植物組織培養(yǎng)建立在植物細(xì)胞的全能性、植物的再生作用的基礎(chǔ)上[6]，而植物再生主要是離體的細(xì)胞、組織或器官恢復(fù)分生狀態(tài)，形成愈傷組織，進(jìn)而再分化的過(guò)程[7]。一般認(rèn)為，培養(yǎng)環(huán)境是能否成功誘導(dǎo)出愈傷組織的重要因素，而在誘導(dǎo)愈傷組織、分化過(guò)程中激素是關(guān)鍵[8-9]。

目前，眾多學(xué)者對(duì)枸杞組織培養(yǎng)和快速繁殖進(jìn)行了研究[10-12]，但還不夠系統(tǒng)和完善，本研究以青杞1號(hào)枸杞葉片為試驗(yàn)材料，通過(guò)設(shè)置不同激素濃度和配比，統(tǒng)計(jì)分析愈傷組織生長(zhǎng)情況，篩選出最佳的激素配比，為青杞1號(hào)快速擴(kuò)繁提供可靠的依據(jù)，也可為其他木本植物的相關(guān)研究提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

為防止材料污染現(xiàn)象發(fā)生而影響試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)從無(wú)菌組培苗（由柴達(dá)木枸杞產(chǎn)業(yè)升級(jí)關(guān)鍵技術(shù)開發(fā)與示范項(xiàng)目提供）上采集葉片。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)條件 主要是溫度和照度，溫度均為 （23±1） ℃，光照時(shí)間16 h/d，照度1 000～1 600 lx。另外MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加蔗糖30 g/L、瓊脂6.0 g/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，在容量為 150 mL的三角瓶中裝入 50 mL，在手提式高壓滅菌鍋中，于121 ℃滅菌23 min。

1.2.2 激素配制 1 mg/mL NAA、IBA、6-BA的配制：稱取 0.1 g 藥粉，加 1 mL蒸餾水，滴入0.1 mol/L NaOH 反復(fù)搖晃，再滴入NaOH，一直到藥物全部溶解，然后用100 mL容量瓶加水定容，蓋塞后搖勻。

1 mg/mL KT 的配制：稱取 0.1 g 藥粉，加 2～3 mL蒸餾水，滴入0.1 mol/L NaOH 反復(fù)搖晃，再滴入NaOH，一直到藥物全部溶解，然后用100 mL容量瓶加水定容，蓋塞后搖勻。

1.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.1 葉片愈傷組織誘導(dǎo) 將處理好的葉片切成長(zhǎng) 1.5 cm、寬0.5 cm左右的小塊，置于不同愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，定期觀察其生長(zhǎng)情況，葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基溶配比見表1。每瓶接種3塊葉片，每處理接種3瓶，重復(fù)3次。

表1 葉片愈傷組織誘導(dǎo)

處理

培養(yǎng)基（mg/L）

NAA 6-BA

1 0.2 0.2

2 0.5 0.5

3 0.7 0.7

4 1.0 1.0

1.2.3.2 愈傷組織增殖 將葉片誘導(dǎo)健康的愈傷組織接入到增殖培養(yǎng)基中，愈傷組織增殖培養(yǎng)基溶液配比見表2。每瓶接種3個(gè)愈傷組織，每處理接種3瓶，重復(fù)3次。

表2 愈傷組織增殖試驗(yàn)設(shè)計(jì)

處理

增殖培養(yǎng)基（mg/L）

6-BA IBA NAA

1 0.5 0.5 0

2 0.5 0.3 0.2

3 1.0 0.5 0.5

4 1.0 0.8 0.2

5 1.5 1.0 0.5

6 1.5 0.5 1.0

1.2.3.3 愈傷組織分化 溶液配比將大量增殖的愈傷組織接入到愈傷組織分化培養(yǎng)基中，進(jìn)行愈傷組織分化試驗(yàn)，愈傷組織分化培養(yǎng)基溶液配比見表3。每瓶接種3塊愈傷組織，每處理接種3瓶，重復(fù)3次。

表3 愈傷組織分化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

處理

愈傷組織分化培養(yǎng)基（mg/L）

KT NAA 6-BA

1 1.0 0 0

2 1.3 0.02 0

3 1.3 0.05 0

4 1.6 0.02 0

5 0 0 1.0

6 0 0.02 1.0