李智，謝興亮，王婷，韓玉佩，韓永彬

(1.成都第一骨科醫(yī)院藥劑科，成都 610031；2.成都醫(yī)學院藥學院，成都 610083)

不同廠家香連丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定*

李智1，謝興亮2，王婷2，韓玉佩2，韓永彬2

(1.成都第一骨科醫(yī)院藥劑科，成都 610031；2.成都醫(yī)學院藥學院，成都 610083)

目的 建立同時測定香連丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的方法，分析不同廠家香連丸中兩成分含量。方法 采用高效液相色譜法，色譜條件：Chromsil C18色譜柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，以甲醇-水(65：35)為流動相，流速1 mL·min-1，檢測波長225 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果 木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯分別在0.009 4～0.023 6 μg和0.021 8～0.108 8 μg 進樣量范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 6，0.999 2)，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的回收率均在95%～105%。不同廠家香連丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量范圍分別為0.16～0.83 mg·g-1和1.45～7.40 mg·g-1。結(jié)論 該方法可準確測定香連丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，市售香連丸中兩成分含量差別較大，需要加強其質(zhì)量控制。

香連丸；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；色譜法，高效液相

香連丸為始載于唐·李絳《兵部手集方》的經(jīng)典方劑[1]，是由萸黃連和木香兩味中藥組成的復方制劑，主要用于治療腸炎、細菌性痢疾、胃脘痛等胃腸疾病[2-3]。該方具有抗菌抗炎、解痙止痛、止瀉、抗消化性潰瘍等作用[4-7]，其中生物堿和內(nèi)酯類成分為主要藥效成分[8-9]，《中華人民共和國藥典》2010年版一部只對該制劑中鹽酸小檗堿含量進行測定，而未控制內(nèi)酯類成分的含量[2]。為了進一步完善質(zhì)量標準，在參考木香含量測定方法[10]的基礎上，筆者擬考察建立高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)法測定香連丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量，并對收集到不同廠家香連丸樣品中的兩成分含量進行測定，以了解不同廠家產(chǎn)品的質(zhì)量差異，為進一步提高其質(zhì)量控制水平提供實驗基礎。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 香連丸(水丸，湖北A廠，批號：100301；湖北B廠，批號：100815；湖北C廠，批號：100901，100902，100101)，木香烴內(nèi)酯對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：A0301，含量≥99.0%)，去氫木香內(nèi)酯對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：A0302，含量≥99.0%)。甲醇(色譜純)、純凈水，磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉等試劑均為分析純。

1.2 儀器 高效液相色譜儀(戴安-Mltimate3000)，電子天平(德國Sartorius BP211D，感量：0.01 mg)，AS5150A超聲儀(奧特賽恩斯儀器有限公司)，RC-6型溶出測定儀(天津市國銘醫(yī)藥設備有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 參照2010年《中華人民共和國藥典》一部木香含量測定項條件，色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相：甲醇-水(65：35)，檢測波長225 nm，流速1.00 mL·min-1，柱溫：30 ℃，理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計算應均不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備 取木香烴內(nèi)酯對照品、去氫木香內(nèi)酯對照品，精密稱定，加甲醇溶解定容，配制成濃度分別約為1，10 μg·mL-1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取香連丸(批號：100901)研細混勻，再取該粉末約0.8 g，精密稱定，分別加入25 mL量瓶中，用甲醇定容，稱定質(zhì)量，放置過夜，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加甲醇補足減失質(zhì)量，搖勻，用內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液備用。

2.4 木香陰性樣品溶液的制備 取黃連粉末約0.6 g，精密稱定，按“2.3”項下方法同法操作，得木香陰性樣品溶液。

2.5 系統(tǒng)適應性實驗 分別精密吸取木香烴內(nèi)酯對照品溶液、去氫木香內(nèi)酯對照品溶液、供試品溶液及木香陰性樣品溶液各10 μL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下檢測各樣品色譜圖，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，香連丸供試品色譜圖中在木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品色譜峰相應位置均有對稱色譜峰，分離度良好，而木香陰性樣品色譜圖在上述位置無干擾，滿足測定要求。

2.6 精密度實驗 分別精密吸取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，分別測定峰面積，計算峰面積RSD。結(jié)果木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.75%，0.48%，表明精密度良好。

2.7 線性關(guān)系考察 分別精密吸取1.178 μg·mL-1木香烴內(nèi)酯對照品溶液8，14，16，18，20 μL和10.88 μg·mL-1去氫木香內(nèi)酯對照品溶液2，4，6，8，10 μL進樣，測定其峰面積，以進樣量為橫坐標(A)，峰面積為縱坐標(Y)繪制標準曲線，木香烴內(nèi)酯的回歸方程為：Y=125.73A-0.505 2，r=0.999 6，去氫木香內(nèi)酯的回歸方程為：Y= 62.422A-0.118 9，r=0.999 2，結(jié)果表明，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯分別在0.009 4～0.023 6 μg和0.021 8～0.108 8 μg峰面積與進樣量線性關(guān)系良好。

2.8 供試品溶液提取方法考察 取香連丸粉末4份，每份約0.8 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇定容，稱定質(zhì)量，放置過夜，其中兩份超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加甲醇補足減失質(zhì)量，搖勻，用內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液加甲醇稀釋10倍后備用。另兩份水浴回流提取30 min，冷卻，再稱定質(zhì)量，加甲醇補足減失質(zhì)量，搖勻，用內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液加甲醇稀釋10倍后備用。精密吸取上述供試品溶液各5～10 μL進樣測定峰面積，計算含量，結(jié)果回流法和超聲法木香烴內(nèi)酯提取率分別為0.75，0.80 mg·g-1，去氫木香內(nèi)酯分別為2.48，2.64 mg·g-1。結(jié)果表明，超聲法對兩成分的提取率均高于回流法，且操作更為簡便。

A.木香陰性樣品；B.木香烴內(nèi)酯對照品；C.去氫木香內(nèi)酯對照品；D.香連丸樣品；1.木香烴內(nèi)酯；2.去氫木香內(nèi)酯

A. negative reference of Costustoot; B.costunolide reference; C.Dehydrocostus lactone reference; D.Xianglianpallet sample; 1.costunolide; 2.dehydrocostus lactone

Fig.1 HPLC chromatogram of negative reference,reference and samples

2.9 供試品溶液提取時間考察 取香連丸粉末6份，每份約0.8 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇定容，稱定質(zhì)量，放置過夜，分別各取兩份，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30，60，90 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加甲醇補足減失質(zhì)量，搖勻，用內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液加甲醇稀釋10倍后備用。精密吸取上述供試品溶液各5 μL進樣測定峰面積，計算含量，結(jié)果處理30，60，90 min，木香烴內(nèi)酯提取率分別為0.77，0.77，0.76 mg·g-1，去氫木香內(nèi)酯分別為2.64，2.53，2.48 mg·g-1。結(jié)果表明，提取30 min即可將樣品中兩成分提取完全，且提取時間過長兩成分含量均有下降的趨勢。因此，擬定供試品溶液制備方法采取超聲提取30 min。

2.10 穩(wěn)定性實驗 分別于制備后0，2，4，8，12，24 h精密吸取香連丸供試品溶液(批號：100901)10 μL，進樣，測定其峰面積，結(jié)果24 h內(nèi)，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD分別為1.98%，1.22%，供試品溶液中兩成分穩(wěn)定性良好。

2.11 重復性實驗 取香連丸樣品(批號：100901)6份，按擬定方法制備供試品溶液，進樣測定峰面積，計算其木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，結(jié)果顯示，木香烴內(nèi)酯含量的RSD 為1.02%，去氫木香內(nèi)酯含量的RSD 為1.26%，表明該方重復性良好。

2.12 加樣回收率實驗 取已知含量香連丸樣品(批號：100901，木香烴內(nèi)酯0.789 5 mg·g-1，去氫木香內(nèi)酯2.636 5 mg·g-1)6份，每份約0.4 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，分別精密加入0.117 8 mg·mL-1木香烴內(nèi)酯對照品溶液和0.108 8 mg·mL-1去氫木香內(nèi)酯對照品溶液，加甲醇溶液定容至25 mL，按擬定方法制備供試品溶液，精密吸取5 μL注入液相色譜儀測定峰面積，計算含量。結(jié)果表明，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯平均回收率分別為98.7%，102.1%，RSD分別為2.96%，3.15%(n=6)，符合含量測定要求。見表1。

2.13 香連丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量測定 取不同廠家的5批香連丸樣品按擬定方法分別制備供試品溶液，并測定峰面積，計算各批次中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量，測定結(jié)果見表2。

3 討論

筆者在本研究建立同時測定香連丸(水丸)中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的方法，研究表明在擬定色譜條件下，香連丸中兩成分色譜峰可與其他成分實現(xiàn)基線分離，且方法學考察表明符合含量測定要求。以該方法對5批不同廠家香連丸中兩成分含量進行測定，結(jié)果表明，不同批次香連丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量分別在0.16～0.83 mg·g-1和1.45～7.40 mg·g-1范圍內(nèi)變化，相差可達5倍，提示目前市售香連丸中兩成分含量的較大差異。由于木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯為香連丸解痙止痛的主要藥效成分[11]，極有必要增加對香連丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量控制，以進一步完善香連丸的質(zhì)量控制標準，確保其臨床療效。

表1 木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯加樣回收測定結(jié)果

Tab.1 Result of recovery of costunolide and dehydrocostus lactone

序號樣品量加入量測得量mg回收率/%木香烴內(nèi)酯 10．31620．31810．620395．6 20．31670．31810．626697．4 30．31720．31810．634499．7 40．31990．31810．6495103．6 50．31640．31810．623196．4 60．32120．31810．638399．7去氫木香內(nèi)酯 11．05591．05542．1810106．6 21．05781．05542．1417102．7 31．05931．05542．1622104．5 41．06831．05542．118499．5 51．05671．05542．088997．8 61．07251．05542．1459101．7

表2 香連丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定結(jié)果

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Determination of Costunolide and Dehydrocostus Lactone inXianglianPellet from Different Manufacturers

LI Zhi1, XIE Xingliang2, WANG Ting2, HAN Yupei2, HAN Yongbin2

(1.DepartmentofPharmacy,theFirstOrthopedicsHospitalofChengdu，Chengdu610031,China; 2.SchoolofPharmacy,ChengduMedicalCollege,Chengdu610083,China)

Objective To establish a method to determine the costunolide and dehydrocostus lactone content ofxianglianpellet simultaneously, and analyze the content of the two components inxianglianpallets from different manufacturers. Methods The column was Chromstar C18(4.6 mm×200 mm, 5 μm), the mobile phase was methanol-water (65：35), the flow rate was l mL·min-1, the detection wavelength was 225 nm, and the column temperature was 30 ℃. Results Costunolide and dehydrocostus lactone contents had good linear relationships with their peak area in the ranges of 0.009 4-0.023 6 μg and 0.021 8-0.108 8 μg (r=0.999 6 and 0.999 2), respectively.The recovery rates of costunolide and dehydrocostus lactone were both among the range of 95%-105%.The content range of costunolide and dehydrocostus lactone in xianglian pellet from different manufacturers was 0.16-0.83 mg·g-1and 1.45-7.40 mg·g-1, respectively. Conclusion The established method can exactly determine the content of costunolide and dehydrocostus lactone inxianglianpellet simultaneously.There is a large difference in the content of the two components inxianglianpellet from different manufacturers; therefore it is necessary to control its quality.

Xianglianpallet; Costunolide; Dehydrocostus lactone; Chromatography, high performance liquid

2014-01-29

2014-03-10

*四川省教學質(zhì)量工程建設項目(傳統(tǒng)香連丸“直至下焦”的藥劑學原理研究)；成都醫(yī)學院校基金項目(CYZ11-011)，四川省教育廳青年基金項目(10Z030)

李智(1971-)，女，四川瀘州人，主管藥師，碩士，研究方向：中藥質(zhì)量分析。電話：(0)13881903494，E-mail：lzlhk@qq.com。

謝興亮(1979-)，男，四川樂山人，副教授，博士，研究方向：中藥學及中藥制劑。電話： 028-62308652，E-mail：xiexingliang1@sina.com。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)02-0249-04

DOI 10.3870/yydb.2015.02.029