張曉琍，王金龍，林光華，曹穎平，周建林

免疫人群乙肝抗體陽(yáng)性率調(diào)查及乙肝核心抗體檢測(cè)方法探討

張曉琍1，王金龍1，林光華1，曹穎平1，周建林2

目的 調(diào)查我院檢測(cè)人群乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)及乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)陽(yáng)性率，并探討檢測(cè)方法選擇及檢測(cè)操作模式對(duì)免疫人群乙肝核心抗體結(jié)果的影響。方法 統(tǒng)計(jì)2012—2013年用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法(CMIA)和酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)抑制一步法(ELISA)檢測(cè)乙肝人群的HBsAb及HBcAb陽(yáng)性率，并按≤2歲、2～20歲、>20歲3個(gè)年齡分段比較；收集92例免疫人群樣本用CMIA和3種ELISA法檢測(cè)HBcAb；用同種ELISA法試劑，改變操作模式進(jìn)行HBcAb檢測(cè)。結(jié)果 3組年齡段檢測(cè)人群HBsAb兩種檢測(cè)方法統(tǒng)計(jì)的陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，≤2歲組陽(yáng)性率最高；HBcAb用CMIA法統(tǒng)計(jì)的陽(yáng)性率在≤2歲組和2～20歲組的免疫人群組低于ELISA法。 92例樣本用CMIA法檢測(cè)HBcAb陽(yáng)性率為2.2%；用3種ELISA法試劑檢測(cè)陽(yáng)性率分別為79.3%、82.6%及94.6%；3種ELISA法試劑檢測(cè)陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。92例樣本改變操作模式，用同種ELISA法檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果有19例為陰性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 檢測(cè)人群HBsAb檢出率在2歲及以下人群最高，隨年齡增長(zhǎng)抗體下降。 HBcAb用CMIA法檢測(cè)在免疫人群中檢出陽(yáng)性率明顯低于EIISA法。ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制一步法檢測(cè)HBcAb易造成假陽(yáng)性，如改用HBcAb單項(xiàng)加樣操作或選用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法(CMIA)檢測(cè)，可明顯減少假陽(yáng)性。

乙型肝炎病毒表面抗體；乙型肝炎病毒核心抗體；抗體檢測(cè)；酶聯(lián)免疫吸附法；化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法

乙肝核心抗體(HBcAb)是感染乙肝病毒的標(biāo)志，具有流行病學(xué)意義，在人群中可長(zhǎng)期存在，陽(yáng)性率高達(dá)70%以上。我國(guó)已于1981年實(shí)行血源性乙肝疫苗接種，1989年改用重組基因疫苗，1992年全國(guó)推行乙肝疫苗接種，因此疫苗人群HBcAb抗體陽(yáng)性率理論上應(yīng)顯著減小。在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)由于選擇的檢測(cè)方法及檢測(cè)時(shí)加樣模式的差異,結(jié)果差別較大。本文調(diào)查人群HBsAb、 HBcAb陽(yáng)性檢出率，并對(duì)HBcAb檢測(cè)試劑及檢測(cè)方法進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 調(diào)查我院2012年1月—2013年7月，用CMIA法檢測(cè)的樣本共35 927例，其中男19 401例，女16 526 例。用ELISA法檢測(cè)的8 094例樣本，其中男4 998例，女3 039例。依據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)，1.5歲以下幼兒可能存在來(lái)自母體的抗體，1992年推行乙肝疫苗接種,20歲以下人群均可能是免疫人群,故人群按≤2歲；2～20歲；>20歲3個(gè)年齡段統(tǒng)計(jì)兩種檢測(cè)方法的的HBsAb、 HBcAb陽(yáng)性檢出率。并從中選取年齡在2～20歲的92例 ELISA檢測(cè)HBcAb陽(yáng)性，HBsAg陰性的樣本,其中男性52例,女性56例，平均年齡11歲，進(jìn)行HBcAb檢測(cè)方法及試劑的分析。

1.2 試劑和儀器 (1)北京拓普公司DEM-Ⅲ型自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)；美國(guó)BIO-RAD 680 酶標(biāo)儀；Abbott I2000SR全自動(dòng)免疫分析儀。(2)試劑和方法：試劑1：化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法(CMIA)，AbbottI2000SR全自動(dòng)免疫分析儀配套試劑，結(jié)果值≥1 S/C.O為陽(yáng)性；試劑2 ：英科新創(chuàng)廈門科技有限公司ELISA法；試劑3：北京萬(wàn)泰生物有限公司ELISA法；試劑4：上海科華生物有限公司ELISA法；EIA結(jié)果值≤1 S/C.O為陽(yáng)性。所有試劑盒嚴(yán)格按說(shuō)明書操作。

1.3 方法 試劑2檢測(cè)陽(yáng)性的92例HBsAg陰性樣本用試劑1檢測(cè)、試劑3和試劑4平行檢測(cè)HBcAb。并用試劑2進(jìn)行乙肝5項(xiàng)操作檢測(cè)HBcAb(模式1)和單項(xiàng)HBcAb操作(模式2)兩種操作模式結(jié)果比較分析。所有試劑盒嚴(yán)格按說(shuō)明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 四種試劑檢測(cè)結(jié)果計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。ELISA法兩種操作模式數(shù)據(jù)S/CO值采用配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 人群HBsAb、 HBcAb陽(yáng)性率分別見(jiàn)表1、2。

2.2 四種不同HBcAb試劑檢測(cè)結(jié)果表3。

表1 檢測(cè)人群HBsAb陽(yáng)性率

表2 檢測(cè)人群HBcAb陽(yáng)性率

表3 四種不同HBcAb試劑檢測(cè)結(jié)果

2.3 92例HBcAb陽(yáng)性樣本3種ELISA法檢測(cè)結(jié)果分析，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 三種ELISA法檢測(cè)結(jié)果分析

2.4 92例樣本HBcAb用ELISA法試劑1兩種操作模式測(cè)定結(jié)果分析。見(jiàn)表5。

表5 兩種操作模式測(cè)定結(jié)果分析

3 討 論

本文調(diào)查我院35 927例的3組年齡段人群HBsAb陽(yáng)性檢出率，現(xiàn)用的CMIA法和ELISA兩種檢測(cè)方法檢測(cè)HBsAb的陽(yáng)性率相近，2歲以下兒童因普及免疫接種或有來(lái)自母體的抗體,陽(yáng)性率最高,但隨年齡增長(zhǎng),免疫接種人群抗體濃度會(huì)下降，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[1-3]；因此按《中國(guó)慢性乙肝防治指南》(2010版)[4]，免疫接種后12年左右，或高危人群可進(jìn)行HBsAb定量檢測(cè)，對(duì)HBsAb小于10 mIU/mL的免疫人群，應(yīng)給予免疫加強(qiáng)。HBcAb陽(yáng)性檢出率在≤2歲組和2～20歲組檢測(cè)CMIA法陽(yáng)性率為35.1%和16.9%，明顯低于ELISA法的88.3%和78.9%, 結(jié)果表明免疫人群HBcAb檢測(cè)陽(yáng)性率因所選用的檢測(cè)方法與試劑結(jié)果差別顯著。

本實(shí)驗(yàn)中選取的92例樣本皆為1992年后出生HBsAg陰性的免疫人群的樣本，該人群大部分是重組基因疫苗接種人群，免疫后HBcAb陽(yáng)性率理論值應(yīng)較小。本研究的結(jié)果表明，ELISA法試劑2檢測(cè)收集的92例樣本3種ELISA試劑的陽(yáng)性率分別為79.3%、82.6%及94.6%，明顯高于CMIA法檢測(cè)結(jié)果, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。證實(shí)由于檢測(cè)方法學(xué)差異，ELISA法造成HBcAb在乙肝免疫人群中有很高的假陽(yáng)性率。免疫人群HBcAb 陽(yáng)性結(jié)果會(huì)對(duì)免疫加強(qiáng)或疫苗免疫效果產(chǎn)生誤導(dǎo)，應(yīng)該引起重視。

HBcAb是臨床乙肝抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)項(xiàng)目之一，ELISA檢測(cè)中大多實(shí)驗(yàn)室采用平行加樣，即一次操作多個(gè)項(xiàng)目。但HBcAb所使用的競(jìng)爭(zhēng)一步法ELISA檢測(cè)，由于方法學(xué)限制，若操作同一批次時(shí)檢測(cè)樣本量較大， HBcAb加樣時(shí)間差無(wú)論手工或全自動(dòng)酶免工作站，都明顯高于單項(xiàng)HBcAb檢測(cè)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性率增高，并隨時(shí)間差增大影響明顯[5-6]。本研究中92例5項(xiàng)檢測(cè)中HBcAb陽(yáng)性樣本，經(jīng)同一廠家同批號(hào)HBcAb單項(xiàng)重復(fù)檢測(cè)，可檢出19例陰性，結(jié)果表明操作模式的不同可造成假陽(yáng)性結(jié)果。成軍等[7]采用酶和樣本先混合再加入微孔中，可明顯減少時(shí)間差造成的假陽(yáng)性，但在實(shí)際操作中受限于試劑盒中酶試劑量以及操作麻煩，不易被采用。HBcAb單項(xiàng)操作，明顯縮短加樣的時(shí)間，臨床操作可行性較大，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)改變操作模式，盡可能縮小時(shí)間差，減少檢測(cè)假陽(yáng)性。

HBcAb檢測(cè)用競(jìng)爭(zhēng)一步ELISA法，操作和方法學(xué)均容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，在臨床上亦有相關(guān)在乙肝人群中有假陰性報(bào)告[8]，此項(xiàng)目的檢測(cè)缺陷容易給臨床造成困擾，研究結(jié)果表明如改用HBcAb單項(xiàng)加樣操作，或選用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法(CMIA)檢測(cè)，可明顯減少假陽(yáng)性。

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Prevalence of anti-HBV antibody among immunized population and evaluation of different detection methods of anti-HBc antibody

ZHANG Xiao-li1,WANG Jin-long1,LIN Guang-hua1,CAO Ying-ping1,ZHOU Jian-lin2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,FujianMedicalUniversityUnionHospital,Fuzhou350001,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,theThirdAffiliatedHospitalofFujianMedicalUniversity,Fuzhou350005,China)

In this study, we detected the positive rate of anti-HBs and anti-HBc antibody among the subject population in Fujian Medical University Union Hospital, and to evaluate different detection methods of anti-HBc antibody. The positive rate of anti-HBs and anti-HBc antibody were detected by chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) and one-step competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) from the year 2012 to 2013. The subject population was divided into three groups: group 1 with the age of less than 2 years old, group 2 with the age of 2-20 years old, and group 3 with the age of more than 20 years old. The positive rates of anti-HBV antibody in the different groups were analyzed. Furthermore, anti-HBc antibody of 92 samples selected from the immunized population was detected by CMIA and three kinds of ELISA reagents. Meanwhile, the detection of anti-HBc antibody by the same ELISA reagent but different operating modes were performed in these samples. The highest positive rate of anti-HBs antibody was detected in group 1, and there was no significance difference of positive rate between two detection methods of anti-HBs antibody among three groups. The positive rate of anti-HBc antibody using CMIA was significantly lower than those with ELISA among group 1 and 2. Among the 92 samples, the positive rate of anti-HBc antibody was 2.2% using CMIA. With three kinds of method of ELISA reagent, the positive rate of anti-HBc antibody were 79.3%, 82.6% and 94.6%, respectively, and there was no statistical significance among the results of three ELISA reagents. Anti-HBc was not detected from 19 samples using ELISA methods with different operating modes. It's concluded that the anti-HBs antibody declined with the increase of age, and it is necessary to discriminate the specific population to strengthen immune system. The obviously higher positive rate of anti-HBc antibody was found by ELISA in immunized population than that by CMIA. Concerning on the false positive of ELISA, specimen sampling with one specific test item or the CMIA method was recommended to detect the anti-HBc antibody.

anti-HBs antibody; anti-HBc antibody; antibody detection; enzyme-linked immunosorbent assay; chemiluminescent microparticle immunoassay

Cao Ying-ping, Email: caoyingping@aliyun.com

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.022

國(guó)家自然基金項(xiàng)目資助項(xiàng)目(81171656)資助

曹穎平，caoyingping@aliyun.com

1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科，福州 350001; 2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院 ,福州 350000

R446.61

B

1002-2694(2015)03-0289-04

Supported by the National Natural Science Foundation of China (Grant No. 8117656)

2013-08-28；

2014-09-16