劉紅

哈藥集團(tuán)生物工程有限公司

高效液相色譜法測(cè)定吉西他濱含量

劉紅

哈藥集團(tuán)生物工程有限公司

目的建立吉西他濱含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為KromasilC8（250mm*4.6mm,5mm），以甲醇：0.075mol/L的醋酸銨溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。結(jié)果耐用性試驗(yàn)符合規(guī)定，溶液溶度在一定范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，重復(fù)性及中間精密度符合規(guī)定，溶液穩(wěn)定性研究結(jié)果表明溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論所建立的含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，與滴定法測(cè)定無(wú)差別，所建立方法可用于本品含量測(cè)定。

鹽酸吉西他濱；方法學(xué)；高效液相色譜法；滴定法

鹽酸吉西他濱是一種破壞細(xì)胞復(fù)制的二氟核苷類(lèi)抗代謝物抗癌藥，是去氧胞苷的水溶性類(lèi)似物，對(duì)核糖核苷酸還原酶是一種抑制性的酶作用物的替代物，這種酶在DNA合成和修復(fù)過(guò)程中，對(duì)所需要的脫氧核苷酸的生成是至關(guān)重要的。我們采用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸吉西他濱含量，建立本品含量測(cè)定方法。

1.儀器與試藥

Agilent 1260 Series高效液相色譜儀，甲醇為色譜純，色譜柱KromasilC8（250mm*4.6mm,5mm）鹽酸吉西他濱對(duì)照品（批號(hào)：100622-201202，50mg/支，含量：99.8%），鹽酸吉西他濱由哈藥集團(tuán)生物工程公司提供，其它試劑均為分析純。

2.方法與結(jié)果

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇：0.075mol/L的醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)pH至5.0）（80：20）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按鹽酸吉西他濱峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。

測(cè)定法取本品，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并制成每1m l含20μg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另精密稱(chēng)取對(duì)照品，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.1 耐用性試驗(yàn)

更換色譜柱（相同品牌不同批號(hào)的色譜柱）、流動(dòng)相比例、柱溫及流速，考察樣品含量測(cè)定結(jié)果的差異，結(jié)果表明各項(xiàng)指標(biāo)變化對(duì)含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響，耐用性試驗(yàn)符合規(guī)定。

2.2 線(xiàn)性范圍

精密稱(chēng)取鹽酸吉西他濱對(duì)照品51.6mg，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成濃度約為5mg/m l的溶液，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5ml、1ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，置10ml容量瓶中，分別加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。制成系列溶度溶液，分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算線(xiàn)性回歸方程，結(jié)果當(dāng)進(jìn)樣量為20μl時(shí)鹽酸吉西他濱在0.25mg/m l～1.5mg/m l濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取鹽酸吉西他濱對(duì)照品2份，加流動(dòng)相并稀釋制成1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。另精密稱(chēng)取鹽酸吉西他濱原料9份，制成濃度為0.8mg/m l的鹽酸吉西他濱溶液三份，制成濃度為1.0mg/m l的鹽酸吉西他濱溶液三份，制成濃度為1.2mg/m l的鹽酸吉西他濱溶液三份，作為供試品溶液的80%、100%、120%組。精密量取對(duì)照品溶液及各供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算鹽酸吉西他濱的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果吉西他濱的平均回收率為99.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%，準(zhǔn)確度試驗(yàn)符合要求。

2.4 重復(fù)性及中間精密度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取鹽酸吉西他濱原料適量，分別加流動(dòng)相使溶解并稀釋制成供試品溶液，共制備6份供試品溶液。按照擬定的含量測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明本品平均含量為99.7%，RSD為0.6%，重復(fù)性較好。

取供試品鹽酸吉西他濱供試品，照含量測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)，變動(dòng)因素為人員、時(shí)間及實(shí)驗(yàn)儀器，考察含量測(cè)定結(jié)果變化情況。結(jié)果12次測(cè)定吉西他濱原料的平均含量為99.8%，RSD為0.7%，中間精密度符合規(guī)定。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取鹽酸吉西他濱原料及鹽酸吉西他濱對(duì)照品各供適量，按照含量測(cè)定方法制備鹽酸吉西他濱供試品溶液及對(duì)照品溶液，在25℃及5℃條件下分別放置24小時(shí)，分別于0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)及8小時(shí)、12小時(shí)計(jì)24小時(shí)進(jìn)樣?？疾旃┰嚻芳皩?duì)照品溶液主峰峰面積變化，結(jié)果供試品及對(duì)照品溶液主峰峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.16%及0.24%，含量變化在±1%以?xún)?nèi)，表明供試品溶液及對(duì)照品溶液在25℃及5℃條件下放置24小時(shí)穩(wěn)定。

2.6 定量限

取鹽酸吉西他濱對(duì)照品，加流動(dòng)相使溶解，作為定量限測(cè)定的對(duì)照品溶液，根據(jù)吉西他濱主峰與基線(xiàn)的信噪比，不斷稀釋對(duì)照品溶液進(jìn)樣，當(dāng)信噪比約為10：1時(shí)溶液濃度為定量限溶液溶度，結(jié)果在溶度為0.1ug/m l時(shí)信噪比約為10：1。取此時(shí)對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.51%，符合規(guī)定。

2.7 樣品含量測(cè)定

取鹽酸吉西他濱原料，采用擬確定的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果三批樣品含量分別為100.6%，99.8%，99.6%。為評(píng)價(jià)含量測(cè)定方法準(zhǔn)確定，采用滴定法[5-6]對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果三批樣品含量分別為99.9%，99.4%及99.6%，高效液相色譜法與滴定法測(cè)定結(jié)果一致。

3.討論

所建立含量測(cè)定方法可行，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，專(zhuān)屬性強(qiáng)，與滴定法相比含量測(cè)定結(jié)果一致?？捎名}酸吉西他濱原料的含量測(cè)定。

[1]李益振,李臣貴,胡育筑.HPLC法測(cè)定鹽酸吉西他濱含量及有關(guān)物質(zhì),海峽藥學(xué)，2010年第6期:67-70.

[2]王廣明,王清,秦麗麗.高效液相色譜法測(cè)定注射用鹽酸吉西他濱中主藥的含量.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2013年第23期:6-7.

劉紅（1978-），女，黑龍江哈爾濱市人，哈藥集團(tuán)生物工程有限公司，質(zhì)量檢測(cè)中心，化驗(yàn)員，工程師。