吳俊偉等

摘要：采用急性致死試驗(yàn)方法，評(píng)估了尼羅羅非魚(yú)鹽堿選育二代幼魚(yú)的半致死鹽度、半致死（碳酸鹽）堿度與半致死鹽堿度。結(jié)果表明，選育二代幼魚(yú)96 h半致死鹽度為21.809 g/L；96 h半致死堿度為8.514 g/L。10 g/L鹽度條件下，96 h半致死堿度為5.925 g/L；15 g/L鹽度條件下，96 h半致死堿度為4.583 g/L；20 g/L鹽度條件下，96 h半致死堿度為1.897 g/L。該結(jié)果為羅非魚(yú)耐鹽堿選育研究與養(yǎng)殖利用提供了基礎(chǔ)資料。

關(guān)鍵詞：尼羅羅非魚(yú)；選育二代；鹽堿度；半致死濃度；急性致死試驗(yàn)

隨著我國(guó)對(duì)內(nèi)陸淡水生態(tài)環(huán)境的重視與保護(hù)加強(qiáng)，淡水養(yǎng)殖利用水域?qū)⒚媾R短缺。另一方面，我國(guó)尚存在著大量未被利用的鹽堿水域，這類鹽堿水域具有高鹽、高堿、高pH和復(fù)雜離子組成等特點(diǎn)，常規(guī)魚(yú)類品種基本無(wú)法進(jìn)行養(yǎng)殖[1]。因此，培育出耐鹽堿能力強(qiáng)的新品種，對(duì)開(kāi)發(fā)利用鹽堿水域及發(fā)展水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)具有重要現(xiàn)實(shí)意義。尼羅羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）生長(zhǎng)快速、極易繁殖、耐受能力強(qiáng)，是羅非魚(yú)養(yǎng)殖中的最大品種[2]。研究表明，未經(jīng)過(guò)馴化尼羅羅非魚(yú)的最適生長(zhǎng)鹽度為5‰～10‰[3]，直接轉(zhuǎn)入的鹽度上限為18‰[4]，緩慢轉(zhuǎn)入的鹽度上限為36‰[5]。堿性毒性試驗(yàn)表明，尼羅羅非魚(yú)幼魚(yú)在pH為9.44、總堿度為41.6 mmol/L條件下96 h內(nèi)全部存活，對(duì)堿度的耐受能力高于常規(guī)淡水養(yǎng)殖種類[6]，因此，尼羅羅非魚(yú)可以作為耐鹽堿養(yǎng)殖品種的培育對(duì)象。本課題組自2012年始開(kāi)展了尼羅羅非魚(yú)鹽堿馴化與選育試驗(yàn)，2013年、2014年分別得到了選育一代、選育二代。本研究以尼羅羅非魚(yú)選育二代幼魚(yú)為研究對(duì)象，通過(guò)急性致死試驗(yàn)，評(píng)估選育二代幼魚(yú)的鹽堿耐受能力。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

選育基礎(chǔ)群體分別取自上海海洋大學(xué)羅非魚(yú)種質(zhì)資源試驗(yàn)站的新吉富羅非魚(yú)選育后代（F16）、山東省淡水水產(chǎn)研究所轉(zhuǎn)引2006年由馬來(lái)西亞引進(jìn)的吉富羅非魚(yú)后代和河北中捷國(guó)家級(jí)羅非魚(yú)良種場(chǎng)于2001年轉(zhuǎn)引國(guó)內(nèi)1994年從菲律賓直接引進(jìn)的吉富品系后代（F13）。2012年6月，將當(dāng)年繁育魚(yú)苗（基礎(chǔ)群體）運(yùn)至河北中捷國(guó)家級(jí)羅非魚(yú)良種場(chǎng)，開(kāi)展鹽堿耐受性與馴化選育試驗(yàn)；2013年6月，由基礎(chǔ)群體繁殖獲得了選育一代，重復(fù)馴化選育試驗(yàn)；2014年6月，由選育一代繁殖獲得了選育二代。

1.2試驗(yàn)用水

單鹽組是通過(guò)良種場(chǎng)內(nèi)的鹽鹵水和地下水一定比例配制而成。單堿組是由NaHCO3分析純和良種場(chǎng)內(nèi)地下深井水配制而成。鹽堿混合組是先通過(guò)鹽鹵水和深井水配制成不同的鹽度，再加入一定比例的NaHCO3分析純，配制成各鹽堿梯度。配好的試驗(yàn)水體沉淀2 d后，取出上層清水用于試驗(yàn)。試驗(yàn)水鹽度值用WYY-I型光學(xué)折射鹽度計(jì)測(cè)量，堿度值用 HI83200型多參數(shù)水質(zhì)檢測(cè)儀測(cè)量。

1.3急性致死試驗(yàn)

試驗(yàn)在室內(nèi)玻璃水族缸（0.3 m×0.7 m×05 m）中進(jìn)行。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，各實(shí)驗(yàn)組濃度梯度設(shè)置如下：（1）單鹽組 設(shè)5個(gè)濃度梯度（18、20、22、24、26 g/L）；（2）單堿組 設(shè)6個(gè)濃度梯度（2、4、6、8、10、12 g/L）；（3）鹽堿混合組 設(shè)9個(gè)濃度梯度（鹽度10、15、20 g/L，堿度2、4、6 g/L組合）。試驗(yàn)開(kāi)始前一天停止喂食，挑選體質(zhì)健康、規(guī)格相近的幼魚(yú)（0.6～0.7 g），直接放入各試驗(yàn)組中，每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)放置50尾幼魚(yú)，設(shè)置3個(gè)重復(fù)組。采取微充氧方式保證水體中溶氧充足，試驗(yàn)期間不換水，注意觀察，及時(shí)撈出死魚(yú)。記錄放養(yǎng)后24 h、48 h、72 h、96 h幼魚(yú)死亡尾數(shù)。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

整理數(shù)據(jù)，并用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算在不同鹽度、堿度及鹽堿混合濃度下特定時(shí)間（24 h，48 h，72 h，96 h）的半致死濃度。不同處理間用單因素方差分析和Duncans多重比較進(jìn)行分析。

2結(jié)果與分析

2.1鹽度試驗(yàn)

由表1可知，尼羅羅非魚(yú)選育二代幼魚(yú)在18 g/L鹽度下96 h內(nèi)全部存活；在20 g/L鹽度下48 h開(kāi)始死亡，96 h死亡率約1/6；在22 g/L鹽度下，24 h內(nèi)開(kāi)始死亡，96 h時(shí)死亡率超過(guò)一半；在24 g/L鹽度下，24 h內(nèi)就有大量幼魚(yú)死亡；在26 g/L鹽度下，幼魚(yú)基本無(wú)法適應(yīng)。根據(jù)幼魚(yú)的致死情況，計(jì)算出選育二代24 h，48 h，72 h，96 h的半致死鹽度分別為23.078 g/L，22.618 g/L，22.203 g/L，21.809 g/L。

表1不同鹽度下尼羅羅非魚(yú)選育二代幼魚(yú)致死情況

鹽度/g·L-1死亡數(shù)/尾24 h48 h72 h96 h1800002003102322435673902411312313014326136143150150

2.2堿度試驗(yàn)

由表2可見(jiàn)，尼羅羅非魚(yú)選育二代幼魚(yú)在2、4、6 g/L 堿度下96 h 內(nèi)全部存活；在8 g/L 堿度下，24 h內(nèi)有近1/3死亡，96 h死亡率為2/5；在10 g/L 堿度下，24 h內(nèi)已有近半數(shù)死亡，到96 h死亡率為4/5；在12 g/L 堿度下，幼魚(yú)基本無(wú)法適應(yīng)。選育二代24 h，48 h，72 h，96 h的半致死堿度分別是9.541 g/L，9.112 g/L，8.824 g/L，8.514 g/L。

表2不同堿度下尼羅羅非魚(yú)選育二代的致死情況

NaHCO3濃度

/g·L-1不同處理時(shí)間下的死亡數(shù)/尾24 h48 h72 h96 h2000040000600008475656601073809712012130143150150

2.3鹽堿混合試驗(yàn)

2.3.110 g/L鹽度下的鹽堿混合組由表3可見(jiàn)，在10 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚(yú)在堿度為2，4 g/L時(shí)96 h內(nèi)都不死亡；當(dāng)堿度為6 g/L時(shí)，24 h開(kāi)始死亡，96 h死亡數(shù)目已超過(guò)試驗(yàn)魚(yú)總數(shù)的1/2。10 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚(yú)的96 h半致死堿度為5.925 g/L。

2.3.215 g/L鹽度下的鹽堿混合組在15 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚(yú)在堿度為2 g/L時(shí)96 h內(nèi)都不死亡；當(dāng)堿度為4 g/L時(shí)，幼魚(yú)24 h后開(kāi)始死亡，96 h死亡一半；堿度為6 g/L時(shí)，12 h內(nèi)就有死亡，96 h死亡率約為4/5。15 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚(yú)的96 h半致死堿度為4.583 g/L。

表3不同鹽堿度下尼羅羅非魚(yú)選育二代的致死情況

鹽度NaHCO3

濃度/g·L-1不同處理時(shí)間下的死亡數(shù)/尾12 h24 h48 h72 h96 h101520200000400000601633508020000040275063836235080931132105370779049014315015015061271501501501502.3.320 g/L鹽度下的鹽堿混合組在20 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚(yú)在堿度2 g/L時(shí)12 h內(nèi)就有死亡，96 h死亡數(shù)目達(dá)到總數(shù)的3/5；在堿度4 g/L時(shí)，12 h內(nèi)就有大量幼魚(yú)死亡，24 h幾乎全部死亡；堿度6 g/L時(shí)，幼魚(yú)基本無(wú)法適應(yīng)。20 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚(yú)的96 h半致死堿濃度為1.897 g/L。

3結(jié)論與討論

鹽度急性致死試驗(yàn)表明，隨著鹽度升高，選育二代幼魚(yú)耐受性能表現(xiàn)下降，96 h半致死鹽度為21.809 g/L。與基礎(chǔ)群體幼魚(yú)和選育一代幼魚(yú)相比，選育二代幼魚(yú)比基礎(chǔ)群體（18.584 g/L）、選育一代（21.691 g/L）都有一定提高[7-9]，選育二代幼魚(yú)與選育一代半致死鹽度間差異不顯著，但與基礎(chǔ)群體幼魚(yú)的半致死鹽度間差異顯著。表明經(jīng)鹽堿馴化選育，尼羅羅非魚(yú)選育世代鹽度耐受性能有所提高。

堿度急性致死試驗(yàn)中，當(dāng)堿度達(dá)到8 g/L時(shí)，選育二代幼魚(yú)才會(huì)開(kāi)始死亡，隨著堿度的升高，耐受值也在不斷下降。選育二代幼魚(yú)96 h半致死堿度（8.514 g/L）明顯高于基礎(chǔ)群體幼魚(yú)的半致死堿度（7.705 g/L），略高于選育一代幼魚(yú)的半致死堿度（8.238 g/L）[8-9]。選育二代幼魚(yú)和選育一代幼魚(yú)的堿度耐受性能間差異不顯著，與基礎(chǔ)群體幼魚(yú)的堿度耐受性能間差異顯著。

在鹽堿混合試驗(yàn)中，幼魚(yú)死亡率隨鹽堿度的升高而增大。當(dāng)鹽度從10 g/L提高到15、20 g/L時(shí)，選育二代幼魚(yú)96 h半致死堿度分別為5925 g/L，4.583 g/L，1.897 g/L，堿度耐受值會(huì)隨鹽度的升高而迅速下降。相較于選育一代幼魚(yú)的96 h半致死堿度（5.766 g/L，4.311 g/L，1872 g/L）有一定的提高，較基礎(chǔ)群體幼魚(yú)的96 h半致死堿度（鹽度為10、15 g/L時(shí)，半致死堿度為4.435 g/L，2.930 g/L）則有較大的提高[9]。有研究認(rèn)為，鹽堿混合對(duì)魚(yú)類的毒理作用并不是單個(gè)因子的作用，而是幾個(gè)方面共同作用的結(jié)果[10-13]。在本試驗(yàn)中，同一鹽度下，幼魚(yú)死亡率隨堿度升高增加；同一堿度下，鹽度越高，幼魚(yú)死亡尾數(shù)越多，這也說(shuō)明了鹽度和堿度之間對(duì)尼羅羅非魚(yú)存活率存在著協(xié)同作用。

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（收稿日期：2015-04-27）