紅花注射液對(duì)人肺癌A549細(xì)胞體外抑制的實(shí)驗(yàn)研究

范林林等

【摘 要】 目的：探討紅花注射液對(duì)人肺癌A549細(xì)胞體外增殖的影響。方法：采用MTT法測(cè)定了不同劑量的紅花注射液對(duì)A549細(xì)胞體外增殖的抑制作用。結(jié)果：紅花注射液對(duì)A549細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用；呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系。結(jié)論：紅花注射液對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的增殖有較強(qiáng)的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】 紅花注射液；肺癌；細(xì)胞株A549；抑制作用

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）12-0011-02

紅花在祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)中的應(yīng)用已有悠久的歷史，主要活性成分為紅花黃色素、黃酮類(lèi)、脂肪酸、多糖，臨床主要用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、跌打損傷、冠心病、血管栓塞性疾病、傳染性肝炎等的治療[1-3]。本試驗(yàn)測(cè)定了不同劑量的紅花注射液對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的外體抑制作用，為紅花抗腫瘤的深入研究及今后的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料 ①紅花注射液（山西安特生物制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z14020734，批號(hào) 20090614）；②人肺癌細(xì)胞株A549，由河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供。

1.2 試劑與儀器 ①試劑：RPMI 1640培養(yǎng)基和胰蛋白酶（GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；二甲亞砜（美國(guó)SIGMA公司）；青霉素、鏈霉素（華北制藥股份有限公司）。②儀器：CO2培養(yǎng)箱（MCO-20AIC，日本三洋公司）；生物安全柜（BHC-1300IIA2，蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司）；倒置顯微鏡（IX83，日本奧林巴斯公司）；酶標(biāo)儀（HT2，美國(guó)BIO-RED公司）。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞復(fù)蘇后，貼壁生長(zhǎng)于含10% 胎牛血清、青霉素和鏈霉素各100U/ml 的RPMI 1640完全培養(yǎng)液中，并置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3.2 紅花注射液對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響 采用MTT法，將A549細(xì)胞按照5×104個(gè)/ml的密度接種到96孔培養(yǎng)板中，試驗(yàn)分為以下幾組：紅花注射液組（10μl、20μl、40μl、80μl）、陰性對(duì)照組（加相同劑量的生理鹽水終體積為200μl/孔）。分別培養(yǎng)24h、48h和72h后加入5μg/μl的MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，加入二甲亞砜（DMSO），磁力震蕩15min，用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度A值，測(cè)定波長(zhǎng)λ=570 nm，計(jì)算細(xì)胞增殖的抑制率：抑制率（%）=（陰性對(duì)照組A值-紅花注射液組A值）/ 陰性對(duì)照組A值×100%[4]。

1.3.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的A549細(xì)胞接種于48 孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h，紅花注射液組加入40μl/孔的紅花注射液，陰性對(duì)照組加入生理鹽水，培養(yǎng)24h后在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 16.0進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紅花注射液對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制作用 紅花注射液（10μl/孔、20μl/孔、40μl/孔和80μl/孔）分別作用A549細(xì)胞24、48、72 h后，與陰性對(duì)照組比較，各劑量的紅花注射液在12、48、72 h對(duì)A549細(xì)胞增殖均有抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。且隨著藥物劑量的提高和刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，紅花注射液對(duì)A549細(xì)胞的抑制作用也逐漸增強(qiáng)，即具有劑量和時(shí)間依賴(lài)性（表1）。

2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 陰性對(duì)照組A549細(xì)胞貼壁良好，呈多角形或長(zhǎng)梭形，邊界清晰，排列無(wú)方向性。紅花注射液組細(xì)胞多呈圓形，邊界胞膜起皺，可見(jiàn)大量懸浮細(xì)胞和碎片（圖1）。

3 討論

紅花注射液是從野生紅花藥材中經(jīng)過(guò)精制而成的中藥注射液，主要含有紅花黃色素、紅花醌苷、紅花素、新紅花苷等成份[5-6]。據(jù)報(bào)道，紅花注射液對(duì)體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞、HepG-2 細(xì)胞的增殖有較強(qiáng)的抑制作用，并能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與抑制細(xì)胞中Survivin、Bcl-2蛋白的表達(dá)有關(guān)[7-8]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，紅花注射液對(duì)體外培養(yǎng)的人肺癌A549細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用，并呈現(xiàn)良好的量效和時(shí)效關(guān)系，隨著藥物劑量和作用時(shí)間的增加，抑制作用明顯增強(qiáng)，但是其抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2015.04.21）