劉嘉坤，王　磊，王　媛，張淑鳳，陳俊榮

（滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北　滄州061001）

綜述

大黃中微量鋅的5- Br- PADAP-乳化劑OP分光光度法測(cè)定*

劉嘉坤，王磊，王媛，張淑鳳，陳俊榮

（滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北滄州061001）

摘要：建立5- Br- PADAP-乳化劑OP分光光度法測(cè)定鋅元素的新方法。方法：弱堿性介質(zhì)中，利用鋅- 5- Br- PADAP-乳化劑OP形成絡(luò)合物體系，該體系在一定波長(zhǎng)下有吸收，從而進(jìn)行測(cè)定微量鋅的研究。在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)定了大黃中鋅元素的含量為3.24μg·g-1。結(jié)論：該法用于中草藥中含微量鋅的測(cè)定，達(dá)到比較滿意的結(jié)果。

關(guān)鍵詞：光度法；鋅；中藥

“大黃”指的往往是馬蹄大黃，是多種蓼科大黃屬的多年生植物的合稱，大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒等功效[1]。近年來，隨著對(duì)中藥成分的深入分析，對(duì)無機(jī)成分尤其是微量元素的研究日益受到人們的重視[2]。但是，中藥中金屬含量的測(cè)定往往采用原子吸收光度法[3]，儀器昂貴，方法繁瑣。

5- Br- PADAP-乳化劑OP分光光度法是指在pH值7.5～10.0酸度條件下，5- Br- PADAP在非表面活性劑乳化劑OP存在下，與鋅反應(yīng)能生成可溶于水的紫紅色絡(luò)合物，根據(jù)其最大吸光值與鋅含量的關(guān)系，建立測(cè)定鋅的方法，該方法廣泛用在化工及食品行業(yè)測(cè)定中，有較多文獻(xiàn)報(bào)道，但在中藥中的應(yīng)用報(bào)道較少。

本實(shí)驗(yàn)的中藥樣品采進(jìn)行酸消化前處理后[4]，再用5- Br- PADAP-乳化劑OP分光光度法光進(jìn)行金屬痕量組分的測(cè)定，使用儀器價(jià)格低廉，方法簡(jiǎn)單，便于普及。這對(duì)大黃藥理作用和機(jī)制的研究具有重要意義[5]。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

722型分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：鋅（Ⅱ）標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0mg·mL-1的貯備液（北京國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心），使用時(shí)用水稀釋至工作溶液；5×10-3mol·l-1的5- Br- PADAP（2-（5-溴-吡啶偶氮）- 5-二乙氨基苯酚）乙醇溶液，稀釋至工作液；10%的乳化劑OP；pH值為7.5～10.0硼酸-硼酸鈉緩沖溶液。所用試劑均為分析純以上，實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

取兩只25mL比色管中，其中一只依次加入2. 0mL，pH值為8的硼酸-硼酸鈉緩沖溶液，5×10-2mol·l-15- Br- PADAP的乙醇溶液3.0mL，10%的乳化劑OP溶液4.0mL，加入一定量的鋅（Ⅱ），另一只不加，用水稀釋至刻度，搖勻。在室溫下放置15min后，用1cm比色皿，在波長(zhǎng)532nm處，以試劑空白為參比，測(cè)量吸光度值。

2　結(jié)果與分析

2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

按實(shí)驗(yàn)方法，在不同的波長(zhǎng)下，以試劑空白為參比，測(cè)定鋅- 5- Br- PADAP-乳化劑OP絡(luò)合物體系的吸光度，并繪制吸收曲線，結(jié)果見圖1。

圖1　吸收光譜Fig1 Absortion spectra

2.2酸度的影響

按照實(shí)驗(yàn)方法，試驗(yàn)了硼酸-硼酸鈉緩沖溶液、NH·3H2O- NH4Cl、兩種介質(zhì)對(duì)反應(yīng)體系的影響，發(fā)現(xiàn)以硼酸-硼酸鈉緩沖溶液介質(zhì)最好，通過實(shí)驗(yàn)表明，pH值在7.5～10.0之間，溶液的吸光度值最大且基本不變。本實(shí)驗(yàn)采用pH值為8的硼酸-硼酸鈉緩沖溶液，并試驗(yàn)其用量對(duì)溶液的吸光度的影響，結(jié)果表明在1.5～3.0mL范圍內(nèi)吸光度值基本變化不大，本實(shí)驗(yàn)選擇緩沖溶液的用量為2.0mL。

2.3顯色劑用量的影響

按實(shí)驗(yàn)方法選擇不同量的5×10-3mol·L-15- Br-PADAP的乙醇溶液，試驗(yàn)結(jié)果表明5- Br- PADAP的用量在2.0～3.0mL范圍內(nèi)吸光度值最大且穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)選擇顯色劑5- Br- PADAP的用量為3.0mL。

2.4表面活性劑乳化劑OP的影響

表面活性劑OP作為一種乳化劑，對(duì)顯色反應(yīng)有增溶作用。按實(shí)驗(yàn)方法選擇不同量的乳化劑OP溶液，其用量在3.0～6.0mL吸光度值最大且基本穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)選擇10%的乳化劑OP溶液的用量為4.0mL。

2.5反應(yīng)的終止及體系穩(wěn)定性

按照實(shí)驗(yàn)方法，混合均勻的溶液，分別放置時(shí)間3，5，10，15，20，25，30，40，50，60min后測(cè)定溶液吸光度值。試驗(yàn)結(jié)果表明體系顯色時(shí)間在10min以上時(shí)吸光度基本穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)選擇反應(yīng)時(shí)間為15min。

2.6共存離子的影響

按實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定10μg鋅（Ⅱ）/25mL，相對(duì)誤差在±5%的情況下，共存離子的允許量（以μg計(jì)）為：Na+、K+、NO-3（3000μg），Al3+、SO24-（300μg），Ca2+（200μg），Mg2+（50μg），F(xiàn)e3+、Ni2+、Co2+（20μg），Ag+（10μg）。當(dāng)樣品中共存離子超過允許量時(shí)，需采用適宜的掩蔽或分離方法消除干擾。

2.7標(biāo)準(zhǔn)曲線

在最佳條件下，取一系列不同量的鋅（Ⅱ）標(biāo)準(zhǔn)溶液，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)量吸光度值，繪制工作曲線，結(jié)果表明，鋅的濃度在0.2～2.0μg·mL-1范圍內(nèi)符合線性規(guī)律，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為：A=0.095+0.010C （μg·25mL-1），相關(guān)系數(shù)r= 0.9991。

2.8方法的精密度

在最佳條件下，取一定量的鋅（Ⅱ）標(biāo)準(zhǔn)溶液，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)量吸光度值，平行測(cè)定11次。計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0044，RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）是2.2%。

2.9絡(luò)合物組成的測(cè)定

在最佳條件下，用摩爾比法測(cè)定絡(luò)合物的組成。先固定一定量的鋅（Ⅱ）的濃度CM，改變不同量的顯色劑5- Br- PADAP的濃度CR，令n=CR/CM，取n=0.5，1.0，1.5，1.75，2.0，2.25，2.5，配置一系列的溶液，試劑空白作參比，測(cè)定吸光度值。以n為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)。

圖2　絡(luò)合物的組成Fig.2　 The constitution of complex

3　樣品的測(cè)定

3.1樣品的處理

取樣品去雜，洗凈，陰干，粉碎后保存于干燥陰涼處備用。實(shí)驗(yàn)時(shí)先用蒸餾水洗凈后，置于烘箱中70℃烘72h，取出降至室溫后置于干燥器中恒質(zhì)量備用。稱取經(jīng)預(yù)處理的樣品置于三角燒瓶中，加入10mL濃HNO3泡浸24h，在電熱板上加熱，消化完全，搖勻放冷，滴加HClO42mL，微火加熱，消化至終點(diǎn)，過濾后移至100mL容量瓶中定容以供測(cè)試。同時(shí)做試劑空白。

3.2樣品的測(cè)定

準(zhǔn)確移取一定量樣品溶液和空白溶液于25mL比色管中，按2項(xiàng)目下方法測(cè)定溶液吸收度，同時(shí)做工作曲線，測(cè)定結(jié)果。見表1。

表1　樣品中鋅的分析結(jié)果（n=5）Tab.1　 Determination results of zinc in samples

3.3回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收法。分別取上述樣品溶液9份，分別加入低、中、高3種濃度的鋅標(biāo)準(zhǔn)工作液，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2　樣品中鋅（Ⅱ）的回收率實(shí)驗(yàn)Tab.2　 Recovery of formaldehyde in samples

3.4重復(fù)性試驗(yàn)

分別準(zhǔn)確稱取樣品5份，按4項(xiàng)目的方法進(jìn)行前處理，再按2項(xiàng)目方法進(jìn)行光度法測(cè)定，計(jì)算平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見表1。

3.5對(duì)照試驗(yàn)

取上述樣品進(jìn)行原子吸收光譜法測(cè)定，計(jì)算鋅的含量（μg/g）、回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），兩結(jié)果進(jìn)行比較見表3，由測(cè)定結(jié)果可知兩種分析方法吻合度較好。

表3　樣品中鋅的兩種測(cè)定結(jié)果（n=3）Tab.3　 Analytical results of samples

4　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)是在弱堿性介質(zhì)中，利用鋅- 5- Br-PADAP-乳化劑OP形成絡(luò)合物體系，進(jìn)行光度測(cè)定，從而計(jì)算微量鋅含量的研究，該方法用于測(cè)定中藥中鋅的含量，與傳統(tǒng)的原子吸收光譜法進(jìn)行了對(duì)比，測(cè)定值差別不大。而且操作簡(jiǎn)單，方便，靈敏度高，所用儀器很普及，便于操作，用于中草藥中含微量鋅的測(cè)定，達(dá)到比較滿意的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

［1］呂繼紅.中藥炮制中大黃不同炮制品的功效研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2011，22（4）：123- 124.

［2］張樹煥，劉嘉坤，張淑鳳.大黃中鐵銅金屬元素的測(cè)定［J］.臨床合理用藥雜志，2011，12（34）：99- 101.

［3］李偉，吳峰，王文清.原子吸收分光光度法測(cè)定自制營(yíng)養(yǎng)液中鉀鈉鎂的含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30（7）：929- 931.

［4］狄之光，宋薇，梁霞.微波消解ICP- AES法測(cè)定中藥中銅（Ⅱ）鉻鉛砷的方法研究［J］.現(xiàn)代科學(xué)儀器，2004，15（4）：43- 45.

［5］陳俊榮，陳俊紅，王國(guó)明.大黃抗動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)制研究概況［J］.中國(guó)藥房，2008，18（19）：1420.

中圖分類號(hào)：R917.7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tg 20150125

收稿日期：2014- 10- 20

基金項(xiàng)目：河北省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（No.07276423）

作者簡(jiǎn)介：劉嘉坤（1980-），女，碩士，講師，主要研究食品和藥品中微量元素含量測(cè)定。

通訊作者：陳俊榮（1963-），女，教授。

Determining trace zinc in dahuang by 5-Br-PADAP-emulser op spectrophotomitry*

LIU Jia-kun，WANG Lei，WANG Yuan，ZHANG Shu-feng，CHEN Jun-rong

（Cangzhou Medical College，Cangzhou 061001，China）

Abstract：The trace zinc was determined by 5-Br-PADAP-Emulser OP Spectrophotomitry. A new spectrophotometric method has been developed for the determination of zinc. The exprimental results shown in the best condition the apparent molar absorptivity of zinc in Dahuang was 3.24μg·g-1. The method is applied to the direct determination of zinc in Chinese traditional medicine of Dahuang with satisfactory results.

Key words：spectrophotomitry；zinc；chinese traditional medicine