幾種柑橘果實(shí)中 β-隱黃質(zhì)等類胡蘿卜素含量初探

姚周麟 劉新艷 張延國(guó) 林媚 王天玉 馮先橘

（1.浙江省柑橘研究所 臺(tái)州 3188026；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所/農(nóng)業(yè)部蔬菜品質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心）

幾種柑橘果實(shí)中 β-隱黃質(zhì)等類胡蘿卜素含量初探

姚周麟1劉新艷2張延國(guó)2林媚1王天玉1馮先橘1

（1.浙江省柑橘研究所 臺(tái)州 3188026；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所/農(nóng)業(yè)部蔬菜品質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心）

柑橘包括有橘、柚、枳、柑、橙、櫞等，因汁多、味美，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥理功效而廣受人們喜愛。一些研究表明，柑橘富含類黃酮類、類萜、香豆素類、胡蘿卜素類等功能性物質(zhì)，具有抗癌活性、防止心血管疾病、抗病毒、鎮(zhèn)痛等生理活性功能。類胡蘿卜素就是其中重要的一類生物活性物質(zhì)，由于主要存在于新鮮蔬菜和水果中，而動(dòng)物及人體自身不能合成[1]，因此，從自然界中尋找富含天然類胡蘿卜素的植物資源日益受到人們的重視。

柑橘是類胡蘿卜素含量最為豐富的水果之一，我國(guó)又是柑橘的原產(chǎn)地，蘊(yùn)藏著豐富的柑橘資源，本文運(yùn)用液相色譜分析技術(shù)測(cè)定不同柑橘品種的 β-隱黃質(zhì)等主要類胡蘿卜素成分的含量，對(duì)于合理開發(fā)和利用我國(guó)柑橘資源具有重要的理論價(jià)值和應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料和試劑

胡柚、高橙、椪柑、科塔葡萄柚、甜橘柚、甌柑等六種柑橘，均采自浙江省柑橘研究所種質(zhì)資源圃。取成熟果實(shí)，-18℃冰凍保存?zhèn)溆谩?/p>

2,6-二叔丁基- 4-甲基苯酚，丙酮，石油醚，無水硫酸鈉，石英砂等為分析純，丙酮，乙腈，二氯甲烷，乙醇等為色譜純。分析中使用GB/T6682-2008中規(guī)定的一級(jí)水，試驗(yàn)中所有有機(jī)試劑含 0.1% 2,6-二叔丁基- 4-甲基苯酚。

類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品：辣椒紅素、葉黃素、玉米黃素、β-隱黃質(zhì)、 β-胡蘿卜素、番茄紅素，均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，純度≥95%。

類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取0.0010 g類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品，辣椒紅素、 β-胡蘿卜素、番茄紅素用二氯甲烷溶解；葉黃素、玉米黃素、隱黃質(zhì)用乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為100mg/L的類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)貯備液。應(yīng)避免光照和高溫，貯于-70℃冰柜中備用。

1.2 儀器條件

色譜柱：C30不銹鋼柱( 4.6mmi.d.× 250mm,5μm)。島津ΜF(xiàn)LC20ADvp液相色譜儀，配紫外檢測(cè)器。柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm；流速：1.5mL/min；進(jìn)樣體積：10 μ L。流動(dòng)相：丙酮-乙腈梯度洗脫,洗脫程序見表1。以保留時(shí)間定性，以待測(cè)液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。

1.3 類胡蘿卜素的提取方法

分別稱取柑橘果肉5 g或果皮 1 g（精確至0.01 g），置于研缽中，加入石英砂后再加入適量丙酮-石油醚混合溶液直至完全淹沒試樣，用研棒充分研磨，然后移入砂心漏斗中真空抽濾，濾液收集于試管中，重復(fù)上述步驟直至將試樣洗至無色。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

將全部濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，靜置分層，上層有機(jī)相通過裝有無水硫酸鈉的玻璃漏斗后收集至圓底燒瓶中，下層水相繼續(xù)用20mL石油醚萃取，繼續(xù)收集有機(jī)相，無水硫酸鈉用石油醚洗至無色并收集濾液。全部有機(jī)相在水浴溫度35℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，再經(jīng)氮?dú)獯蹈桑?.00mL丙酮復(fù)溶，加入乙腈5.00mL，渦旋混勻，過0.45 μ m微孔濾膜，待測(cè)。

1.4 結(jié)果計(jì)算

試樣中各類胡蘿卜素含量用質(zhì)量分?jǐn)?shù) w表示，單位為mg/kg，按下述公式計(jì)算：

Ps：標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（mg/L）；Vs：標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積（μ L）；V0：試樣溶液最終定容體積（mL）；Vx：待測(cè)液進(jìn)樣體積（μ L）；As：標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；Ax：待測(cè)液的峰面積；m：試樣質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法確認(rèn)

按 1.2所描述的色譜條件，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)定，六種類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。該檢測(cè)方法在線性范圍0.5～50mg/ L 的相關(guān)系數(shù)R= 0.9980；在添加水平為1.0, 5.0,20.0mg/L的回收率（n= 3）為83.1%～113.5%，相應(yīng)的RSD為7.3%～12.2%，重現(xiàn)性良好。

2.2 柑橘果皮和果肉中 β-隱黃質(zhì)等六種類胡蘿卜素含量

圖1 六種類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

柑橘果皮和果肉中含有多種類胡蘿卜素，但由于條件所限，不能獲得所有色素的標(biāo)樣。本研究通過液相檢測(cè)，根據(jù)色素保留時(shí)間和標(biāo)樣特征峰對(duì)每個(gè)峰進(jìn)行鑒別。用外標(biāo)法計(jì)算柑橘果皮和果肉中 β-隱黃質(zhì)等六種類胡蘿卜素的含量，結(jié)果見表 2和表 3。供試的六個(gè)品種間 β-隱黃質(zhì)等類胡蘿卜素成分及其含量有較大差別，其中胡柚果皮中β-隱黃素、番茄紅素和 β-胡蘿卜素含量最高，分別為2.92、 6.80、10.42 μg/g；甜橘柚其次，β-隱黃素、番茄紅素和 β-胡蘿卜素含量，分別為2.42、2.29、 9.44 μg/g。果肉中椪柑β-隱黃素含量最高為0.51 μg/g；科塔葡萄柚其次，為0.23 μg/g。結(jié)果表明，不同品種柑橘及其不同部位類胡蘿卜素成分及其含量是不相同的，橘皮中類胡蘿卜素含量要高于橘肉中的含量。

表2 柑橘果皮中 β-隱黃質(zhì)等六種類胡蘿卜素含量

表3 柑橘果肉中 β-隱黃質(zhì)等六種類胡蘿卜素含量

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了一種較好的分離和測(cè)定柑橘果皮和果肉中 β-隱黃質(zhì)等六種類胡蘿卜素含量的HPLC方法。和其他檢測(cè)類胡蘿卜素的方法[2-4]相比，前處理簡(jiǎn)單，更適用于柑橘中 β-隱黃質(zhì)等的檢測(cè)，各物質(zhì)的分離效果好，方法快速、簡(jiǎn)便。

[1]陶俊，張上隆，徐建國(guó)等.柑橘果實(shí)主要類胡蘿卜素成分及含量分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，36（10）：1202～1208

[2]袁冰,徐華龍,冷平.柿果類胡蘿卜素化學(xué)成份及其含量研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006,22（10）：277～280

[3]李艷杰，康保珊，趙文恩等.西瓜中類胡蘿卜素的高效液相色譜法分析[J].中國(guó)瓜菜，2005,4:12～15

[4]李赫，陳敏，朱蕾等.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定保健品中的四種類胡蘿卜素[J].色譜，2006,24（5）：475～478

10.139906/j.cnki.zjgj.10099-0584.2015.04.251

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