何　蛟，賈治林

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 圖書(shū)館,遼寧 大連 116011； 2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 血液內(nèi)科，遼寧 大連 116011)

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清HMGB1及TGF-β1的表達(dá)及意義

何蛟1，賈治林2

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 圖書(shū)館,遼寧 大連 116011； 2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 血液內(nèi)科，遼寧 大連 116011)

目的探討類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)血清中的HMGB1和TGF-β1的表達(dá)及臨床意義。方法112例經(jīng)確診的RA患者作為病例組，其中活動(dòng)期RA患者67例，非活動(dòng)期RA患者45例，選取健康體檢者80人作為對(duì)照組。ELISA法測(cè)定3組血清中HMGB1及TGF-β1含量。結(jié)果活動(dòng)期RA患者的血清HMGB1水平(59.40±18.74)高于非活動(dòng)期患者(16.58±6.02)和對(duì)照組(13.97±2.43)，差異均有顯著性意義(P<0.05)。非活動(dòng)期RA患者和對(duì)照組相比，血清HMGB1水平差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)?；顒?dòng)期RA患者(17.13±11.26)和非活動(dòng)期患者(22.42±13.70)的血清TGF-β1水平均低于對(duì)照組(28.35±8.14)，活動(dòng)期RA患者血清TGF-β1水平低于非活動(dòng)期患者，差異有顯著性意義(P<0.05)。結(jié)論血清中HMGB1及TGF-β1含量與RA的疾病活動(dòng)有關(guān)，但兩者的作用機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；HMGB1；TGF-β1

[引用本文]何蛟，賈治林. 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清HMGB1及TGF-β1的表達(dá)研究[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015,37(2)：148-150.

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為特點(diǎn)的慢性自身免疫性疾病,可導(dǎo)致骨的侵蝕和關(guān)節(jié)的破壞，造成關(guān)節(jié)畸形，目前臨床上缺乏根治方法，預(yù)后較差[1]。新近研究顯示，高遷移率族蛋白-1(high mobility group box chromosomal protein 1，HMGB1)可能在其發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，但其在外周血中的表達(dá)存在爭(zhēng)議[2]。而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在RA中具有導(dǎo)致RA曲型滑膜改變、加的多重作用[3]，但其究竟是以致病作用為主還是保護(hù)作用為主仍需要進(jìn)一步探索。本實(shí)驗(yàn)采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)，雙抗體夾心(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)法測(cè)定RA患者及對(duì)照組血清中的HMGB1和TGF-β1，旨在探索兩者在RA中的作用，為發(fā)掘RA治療的新方法提供依據(jù)。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象

以2012年1月1日—2014年6月30日大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診的112例類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作為病例組，所有病例均采用美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)1987分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，且排除4周內(nèi)使用過(guò)激素、非甾體鎮(zhèn)痛藥的患者及患有感染、腫瘤、嚴(yán)重心腦血管疾病及其它免疫性疾病的患者。病例組中活動(dòng)期RA患者67例，其中男性19例，平均年齡(55.1±15.4)歲，女性48例，平均年齡(54.3±13.6)歲；非活動(dòng)期RA患者45例，其中男性14例，平均年齡(52.9±14.3)歲，女性31例，平均年齡(55.4±14.7)歲。選取同地區(qū)性別及年齡相近的健康人80人作為對(duì)照組，對(duì)照組選取的是2013年6月—2014年3月的健康體檢者，年齡性別根據(jù)文獻(xiàn)及前期研究基礎(chǔ)確定，其中男性25例，平均年齡(54.6±16.8)歲；女性55例，平均年齡(53.0±17.2)歲。各組之間性別及年齡差異無(wú)顯著性意義。

1.2研究方法

3組受試對(duì)象均于清晨空腹采集新鮮靜脈血2 mL,離心分離血清并于-20 ℃保存。

HMGB1及TGF-β1含量的測(cè)定采用均ELISA法，嚴(yán)格按照試劑盒提供的方法和流程操作。TMB顯色，HMGB1含量的測(cè)定用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)OD值，TGF-β1含量的測(cè)定在490 nm處檢測(cè)OD值。用CurveExpert 1.4軟件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將OD值帶入方程式，求得血清中HMGB1及的TGF-β1實(shí)際濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)　果

活動(dòng)期RA患者的血清HMGB1水平顯著高于非活動(dòng)期患者和正常對(duì)照組，差異有顯著性意義(P<0.05)。非活動(dòng)期RA患者和正常對(duì)照組相比，血清HMGB1水平差異無(wú)顯著性意義 (P>0.05)。見(jiàn)表1。

活動(dòng)期RA患者和非活動(dòng)期患者的血清TGF-β1水平均低于正常對(duì)照組，差異有顯著性意義(P<0.05)。活動(dòng)期RA患者血清TGF-β1水平低于非活動(dòng)期患者，差異有顯著性意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　3組對(duì)象血清中HMGB1和TGF-β1含量Tab 1 HMGB1 and TGF-β1 of three groups

3　討　論

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為特征的慢性自身免疫性疾病。RA的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，但普遍認(rèn)為其與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)有關(guān)，如TGF-β1、HMGB1、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1(interleukin-1，IL-1)等均被認(rèn)為可能與引起機(jī)體炎癥反應(yīng)及組織損傷、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)、成纖維細(xì)胞增生等有密切關(guān)系[4]。

HMGB1作為一種新型的炎性細(xì)胞因子，與膿毒癥、肺炎、敗血癥、內(nèi)毒素血癥等多種炎性和自身免疫性疾病的發(fā)病有關(guān)。研究顯示，HMGB1在實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎大鼠的滑膜巨噬細(xì)胞及間質(zhì)內(nèi)均存在異常表達(dá)[5]，在RA患者關(guān)節(jié)液中的含量也明顯增高[6]，但其在外周血中的表達(dá)存在爭(zhēng)議。Goldstein等[7]的研究顯示，RA患者血清HMGB1含量明顯高于正常人(71 ng/ mL vs. 18 ng/mL，P<0.001)；但也有學(xué)者持不同意見(jiàn)[8]。本研究結(jié)果顯示活動(dòng)期RA患者的血清HMGB1水平顯著高于非活動(dòng)期患者和正常對(duì)照組，與Goldstein等的研究一致。說(shuō)明HMGB1可能與RA的發(fā)病具有重要關(guān)系，同時(shí)也提示HMGB1可用于評(píng)價(jià)RA的病情活動(dòng)情況。有研究證明血清中的HMGB1可能是從細(xì)胞核內(nèi)分泌而來(lái),通過(guò)非典型的、囊介導(dǎo)的分泌通路,由溶血磷脂膽堿激發(fā)溶酶體的胞吐作用而產(chǎn)生[9]。也有研究認(rèn)為其可能來(lái)自于巨噬樣滑膜細(xì)胞的主動(dòng)分泌或壞死、損傷的細(xì)胞[10]，但其確切來(lái)源目前仍不清楚，作用機(jī)制也仍有待于更深入研究。

TGF-β1是一種多功能的細(xì)胞因子，可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)及分化，對(duì)RA具有雙重作用。一方面其可以抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、調(diào)控成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和拮抗炎性細(xì)胞因子，從而維護(hù)關(guān)節(jié)軟組織完整性、進(jìn)行免疫抑制，對(duì)RA的治療和恢復(fù)產(chǎn)生積極的作用[11]。有研究顯示，全身性應(yīng)用TGF-β1可能有助于預(yù)防和治療RA，連續(xù)腹腔注射7～14 d，可起到防止膠原誘發(fā)小鼠關(guān)節(jié)炎癥的作用，顯著降低關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)生。將TGF-β1注射入鏈球菌壁導(dǎo)致的變態(tài)反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎鼠模型關(guān)節(jié)腔后，也可顯著減輕關(guān)節(jié)腫脹,單核/巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),血管翳形成,骨和軟骨破壞[12]。其抗炎癥機(jī)制可能與TGF-β1作用于內(nèi)皮細(xì)胞,通過(guò)抑制E-選擇素表達(dá),繼而阻斷白細(xì)胞向炎癥部位的粘附和定位有關(guān)。另一方面，TGF-β1作為一種強(qiáng)力的單核細(xì)胞趨化因子，在炎癥早期局部聚集，即可趨化和激活單核細(xì)胞,將T細(xì)胞吸引至炎癥部位,從而加重滑膜炎癥，使組織呈現(xiàn)免疫亢進(jìn)狀態(tài)，加速RA的發(fā)生和發(fā)展[13]。研究顯示，局部應(yīng)用TGF-β1會(huì)啟動(dòng)并加速炎癥反應(yīng)，將TGF-β1注射入健康大鼠關(guān)節(jié)腔后，可迅速引起炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，導(dǎo)致滑膜炎，該作用與TGF-β1上調(diào)白細(xì)胞粘附分子的表達(dá)，促進(jìn)其粘附和浸潤(rùn)有關(guān)。本研究結(jié)果顯示活動(dòng)期RA患者和非活動(dòng)期患者的血清TGF-β1水平均低于正常對(duì)照組，且活動(dòng)期RA患者血清TGF-β1水平低于非活動(dòng)期患者，這與Valle等[14]的研究一致。這說(shuō)明TGF-β1主要起免疫抑制作用，其水平下降導(dǎo)致RA患者調(diào)節(jié)免疫活動(dòng)的能力下降，可考慮應(yīng)用TGF-β1進(jìn)行RA治療，但其使用方式、用法用量、確切的作用機(jī)制等仍需要更多的實(shí)驗(yàn)證明。

總之，RA患者血清中HMGB1呈高表達(dá)，提示其與RA的發(fā)病和病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，其確切的作用機(jī)制仍有待于更深入研究。RA患者血清中TGF-β1含量較少，其主要發(fā)揮免疫抑制作用，仍需要更多的研究來(lái)證明其治療作用。

[1] Schneider M,Krüger K. Rheumatoid arthritisq-early diagnosis and disease management[J].Dtsch Arztebl Int,2013,110(27):477-484.

[2] Harris HE,Andersson U,Pisetsky DS. HMGB1:a multifunctional alarmin driving autoimmune and inflammatory disease[J].Nat Rev Rheumatol,2012,8(4):195-202.

[3] Hussein YM,Mohamed RH,El-Shahawy EE,et al. Interaction between TGF-β1 (869C/T) polymorphism and biochemical risk factor for prediction of disease progression in rheumatoid arthritis[J].Gene,2014,536(2):393-397.

[4] 謝慶云,魏萌,張波,等. 外周血炎性細(xì)胞因子與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[J].中國(guó)組織工程研究,2012,16(42):7945-7950.

[5] Chen Y,Sun W,Gao R,et al. The role of high mobility group box chromosomal protein 1 in rheumatoid arthritis[J].Rheumatology (Oxford),2013,52(10):1739-1747.

[6] He Z,Shotorbani SS,Jiao Z,et al. HMGB1 promotes the differentiation of Th17 via up-regulating TLR2 and IL-23 of CD14+monocytes from patients with rheumatoid arthritis[J].Scand J Immunol,2012,76(5):483-490.

[7] Goldstein RS1,Bruchfeld A,Yang L,et al. Cholinergic anti-inflammatory pathway activity and High Mobility Group Box-1 (HMGB1) serum levels in patients with rheumatoid arthritis[J].Mol Med,2007,13(3-4):210-215.

[8] Pullerits R,Urbonaviciute V,Voll RE,et al. Serum levels of HMGB1 in postmenopausal patients with rheumatoid arthritis:associations with proinflammatory cytokines,acute-phase reactants,and clinical disease characteristics[J].J Rheumatol,2011,38(7):1523-1525.

[9] Kaur PP,Derk CT,Chatter Ji M,et al. Septic arthritis caused by Actinobacillus nreae in a patient with rheumatoid arthritis receiving anti-tumor necrosis factor-alpha therapy[J].J Rheumatol,2004,31(8):1663-1665.

[10] Kokkola R,Sundberg E,Ulfgren AK,et al.High mobility group box chromosomal protein 1:a novel proinflammatory mediator in synovitis[J].Arthritis Rheum,2002,46(10):2598-2603.

[11] 高澤斌,馬悅,張萍,等. 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2002，24(2):144-145.

[12] Li DY,Sorensen LK,Brooke BS,et al.Defective angiogenesis in mice lacking endoglin[J].Science,1999,284(8):1534.

[13] Chang WW,Su H,He L,et al. Association between transforming growth factor-beta1 T869C polymorphism and rheumatoid arthritis:a meta-analysis[J].Rheumatology (Oxford),2010,49(4):652-656.

[14] Muoz-Valle JF,Torres-Carrillo NM,Guzmn-Guzmán IP,et al. The functional class evaluated in rheumatoid arthritis is associated with soluble TGF-β1 serum levels but not with G915C (Arg25Pro) TGF-β1 polymorphism[J].Rheumatol Int,2012,32(2):367-372.

Expression of HMGB1 and TGF-β1 in rheumatoid arthritis

HE Jiao1,JIA Zhi-Lin2

(1.Library，theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity，Dalian116011,China；2.DepartmentofHematology，theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity，Dalian116011,China)

Objective To study the expression of HMGB1 and TGF-β1 in rheumatoid arthritis. Methods Included were 112 rheumatoid arthritis patients(active RA group=67，inactive RA group=45) and 80 healthy persons (control group). Serum HMGB1 and TGF-β1 were measured by ELISA. Results The expression of HMGB1 in active RA group (59.40±18.74)was higher than inactive RA group (16.58±6.02，P<0.05)and control group(13.97±2.43,P<0.05).But no statistical significance was detected between inactive RA group and control group(P>0.05).The expression of TGF-β1 in active RA group (17.13±11.26)was lower than inactive RA group (22.42±13.70)and control group(28.35±8.14). The differences between groups had statistical significance(P<0.05).Conclusion RA is closely related to HMGB1 and TGF-β1.The mechanisms need further study.

rheumatoid arthritis； HMGB1； TGF-β1

論著10.11724/jdmu.2015.02.11

遼寧省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013225002)；大連市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012E15SF166)

何 蛟(1981-)，男，遼寧撫順人，館員。E-mail:hejiao_barton@163.com

賈治林，副主任醫(yī)師。E-mail:jiazl126@163.com

R593.22

A

1671-7295(2015)02-0148-03

2014-12-26；

2015-03-23)