單會嬌，王冰，張建逵，許亮

(1.葫蘆島市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 中藥室，遼寧 葫蘆島 125000； 2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

·中藥農(nóng)業(yè)·

龍葵中澳洲茄堿含量的動(dòng)態(tài)規(guī)律△

單會嬌1，王冰2*，張建逵2，許亮2

(1.葫蘆島市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 中藥室，遼寧 葫蘆島 125000； 2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

目的：通過研究龍葵不同產(chǎn)地、生長周期及藥用部位中澳洲茄堿的動(dòng)態(tài)規(guī)律，為進(jìn)一步優(yōu)化龍葵的采收期、藥用部位及栽培提供依據(jù)。方法：采用HPLC，AgilentTC-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm)；以乙腈-0.5%磷酸水溶液作為流動(dòng)相，梯度洗脫；檢測波長為203 nm；體積流量：0.9 mL·min-1；柱溫為30 ℃。結(jié)果：龍葵藥材中澳洲茄堿含量因產(chǎn)地不同差異很大。龍葵地上部分澳洲茄堿含量的高低主要取決于所結(jié)果實(shí)的多少，以盛果期含量最高；不同成熟程度果實(shí)中澳洲茄堿含量的規(guī)律為：成熟果實(shí)<青果<幼果。結(jié)論：在龍葵的生長過程中，龍葵中澳洲茄堿的含量隨著其生長發(fā)育進(jìn)程而發(fā)生變化。根據(jù)龍葵不同生長階段所含澳洲茄堿在各器官中的含量變化，龍葵的最佳采收期為盛果期，最佳藥用部位為幼果和青果。

龍葵；澳洲茄堿；HPLC；藥用部位；生長周期；成熟程度

龍葵是茄科植物龍葵SolanumnigrumL.的干燥地上部分，曾被1977年版《中華人民共和國藥典》收載。龍葵性寒、味苦、微甘、有小毒，有清熱解毒、消腫散結(jié)、消炎利尿等功效[1]。龍葵不僅在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)上有著廣泛應(yīng)用，在現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)上也有很多新用途。龍葵具有很好的抗腫瘤活性，其藥理活性物質(zhì)是甾體生物堿類成分，主要包括澳洲茄堿(solasonine)、澳洲茄邊堿(solamargine)等，研究表明澳洲茄堿在體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出很好的抗腫瘤活性[2]。但目前對于澳洲茄堿含量測定方面的文獻(xiàn)較少[3-4]，且尚未見龍葵中澳洲茄堿含量動(dòng)態(tài)規(guī)律的報(bào)道。本研究旨在通過對龍葵不同產(chǎn)地、生長周期及藥用部位中澳洲茄堿的含量研究，了解澳洲茄堿在龍葵的不同生長周期及各器官中的轉(zhuǎn)化及發(fā)展過程，在優(yōu)化龍葵藥用部位及最佳采收期的同時(shí)，采取合理的肥水和栽培管理措施，為龍葵的合理栽培提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，包括四元泵，柱溫箱，紫外檢測器及chemstation 色譜工作站，KQ3200B型超聲波清洗儀(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 材料

10批龍葵采自不同產(chǎn)地，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室王冰教授鑒定為茄科茄屬龍葵SolanumnigrumL.的干燥地上部分及果實(shí)。樣品產(chǎn)地信息見表1。

1.3 試劑

澳洲茄堿對照品(安徽蕪湖甙爾塔醫(yī)藥科技有限公司，純度>99%)，乙腈(TEDIA公司，HPLC)，磷酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，HPLC)，超級純水系統(tǒng)(密理博中國有限公司)，乙醇(沈陽市華東試劑廠，AR)。

表1 龍葵產(chǎn)地信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

AgilentTC-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相：乙腈(A)，0.5%磷酸溶液(B)，梯度洗脫條件為：0～7 min，A：22%，B：78%；7～20 min；A：22%～25%，B：78%～75%；體積流量：0.9 mL·min-1；柱溫：30 ℃；地上部分進(jìn)樣量為：20 μL，果實(shí)進(jìn)樣量為10 μL；檢測波長：203 nm[5]。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取澳洲茄堿對照品10.46 mg，置于10 mL量瓶中，用色譜甲醇溶解至刻度，搖勻，制成1.046 mg·mL-1的對照品溶液作為儲備液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取龍葵藥材2.0 g置于50 mL具塞錐形瓶中，加入10倍體積的60%乙醇溶液，60 ℃下超聲提取2次，每次30 min，濾過，合并濾液，濾液水浴加熱，濃縮至近干，用60%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品液[6]。

2.4 測定結(jié)果與分析

精密稱取不同產(chǎn)地、生境及不同生長期的龍葵地上部分及果實(shí)粉末(過60目篩)2.0 g，按供試品制備項(xiàng)下的方法制備，地上部分進(jìn)樣20 μL，果實(shí)進(jìn)樣10 μL，測定色譜峰面積，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算龍葵中澳洲茄堿的含量，結(jié)果見表2、3。

表2 龍葵不同生長期地上部分澳洲茄堿含量測定結(jié)果 /mg·g-1

表3 龍葵果實(shí)中澳洲茄堿含量測定結(jié)果 /mg·g-1

3 討論與結(jié)論

藥材質(zhì)量除了遺傳因素外，最為關(guān)鍵的問題是藥材生長的地點(diǎn)、環(huán)境，以及藥材采收的時(shí)間。不同的生態(tài)環(huán)境、生理周期對藥材的有效成分含量有著直接的關(guān)系，同一物種表現(xiàn)出不同形態(tài)生態(tài)型的同時(shí)，也表現(xiàn)出不同的化學(xué)生態(tài)型，這是物種多樣性的體現(xiàn)。物種多樣性直接影響著中藥材的質(zhì)量，導(dǎo)致中藥質(zhì)量的不均一、不穩(wěn)定，使中藥質(zhì)量難以控制，是目前中藥現(xiàn)代化最難解決和迫切要解決的問題之一。

本實(shí)驗(yàn)對不同產(chǎn)地、不同藥用部位及不同生長期的龍葵地上部分及果實(shí)中澳洲茄堿的含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明龍葵藥材中澳洲茄堿含量因產(chǎn)地、藥用部位及生長期不同差異很大。實(shí)驗(yàn)證明遼西地區(qū)所產(chǎn)龍葵中的澳洲茄堿含量較高，可能是因?yàn)楫?dāng)?shù)乇容^干旱，龍葵的結(jié)實(shí)率較高。龍葵地上部分澳洲茄堿含量的高低主要取決于所結(jié)果實(shí)的多少，苗期、花期、成熟后期以及摘除龍葵果實(shí)的龍葵地上部分澳洲茄堿的含量極低，甚至未檢出，而以盛果期的龍葵地上部分澳洲茄堿含量最高。而在龍葵的果實(shí)中澳洲茄堿含量基本滿足如下規(guī)律：成熟果實(shí)<青果<幼果，尤以幼果和青果中含量最高。

在龍葵的生長過程中，龍葵中澳洲茄堿的含量隨著其生長發(fā)育進(jìn)程而發(fā)生變化。根據(jù)龍葵不同生長階段所含澳洲茄堿在各器官中的含量變化，在優(yōu)化龍葵藥用部位及最佳采收期的同時(shí)，可以采取合理的肥水措施，以促進(jìn)龍葵的優(yōu)質(zhì)。由于所采樣本有限，本實(shí)驗(yàn)的不足之處在于未對同一產(chǎn)地摘除果實(shí)前后的龍葵地上部分進(jìn)行比較。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S]，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1977：154.

[2] 羅文娟，王光輝，周新蘭，等.螺甾皂苷類化合物的體外抗人肝細(xì)胞增殖作用[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2007，15(3)：307-308.

[3] 袁海建，安益強(qiáng)，陳彥，等.高效液相色譜法測定龍葵中澳洲茄堿的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24(1)：96-97.

[4] 李明慧，丁岡，孟兆青，等.龍葵藥材中澳洲茄堿、澳洲茄邊堿的含量測定[J].中國天然藥物，2007，5(5)：360-362.

[5] 單會嬌，張建逵，許亮，等.24個(gè)產(chǎn)地龍葵中澳洲茄堿的含量測定[J].中成藥，2011，33(3)：483-485.

[6] 湯丹靈，林朝仙，楊快兒，等.龍葵有效成分的提取方法及定量[J].中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，6(5)：573-574.

Dynamic Change of Solasonine Content inSolanumnigrum

SHAN Huijiao1，WANG Bing2*，ZHANG Jiankui2，XU Liang2

(1.Huludao Institute for drug and food control Traditional Chinese Medicine Laboratory Liaoning Huludao 125000；2.The Liaoning University of Traditional Chinese Medicine College of medicine Liaoning，Dalian 116600)

Objective：To the dynamic accumulation of solasonine inSolanumnigrumfrom different origin growth cycle and medicinal parts，and provide scientific basis for harvest time，standardized cultivation and medicinal parts ofS.nigrum.Methods：The content of solasonine was determined by using HPLC，Agilent TC-C18column (250 mm×4.6 mm) with acetonitrile-0.5% phosphoric acid solution as mobile phase，detection wavelength was 203 nm；flow rate was 0.9 mL·min-1；column temperature was 30 ℃.Results：Solasonine content ofS.nigrumin great difference by different origin.The content of solasonine inS.nigrumdepended on the number of the fruits.The highest content was in full fruit period.The solasonine content in fruits of different maturity was following：mature fruit

Solanumnigrum；solasonine；HPLC；medicinal parts；growth cycle；maturity

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.9.012

2014-12-29)

*

王冰，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向；藥用植物種質(zhì)資源及質(zhì)量評價(jià)；Tel：(0411-87586003)，E-mail：wangbing1616@163.com