李帥鋒，鄭傳柱，張麗，姚衛(wèi)峰，蘭才武，賀定翔，丁安偉*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇 南京 210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州 凱里 556000)

·中藥農(nóng)業(yè)·

不同采收期對(duì)何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分含量的影響△

李帥鋒1，鄭傳柱1，張麗1，姚衛(wèi)峰1，蘭才武2，賀定翔2，丁安偉1*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇 南京 210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州 凱里 556000)

目的：研究不同采收期對(duì)何首烏藥材中二苯乙烯苷以及蒽醌類成分含量的影響，為何首烏適宜采收期的確定提供科學(xué)依據(jù)。方法：通過(guò)HPLC測(cè)定來(lái)自貴州施秉縣不同采收期樣品中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的含量，同時(shí)采用主成分分析法對(duì)不同采收期何首烏樣品質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果：不同采收期何首烏樣品中二苯乙烯苷含量由高到低依次為：9月份>10月份>8月份>11月份>12月份>1月份。結(jié)合型蒽醌含量在9月份達(dá)到峰值，隨后隨時(shí)間推移而降低。主成分分析結(jié)果顯示：不同采收期何首烏樣品綜合評(píng)價(jià)指數(shù)9、10月份較高。結(jié)論：9、10月份為何首烏較為適宜的采收期。

何首烏；不同采收期；二苯乙烯苷；蒽醌

何首烏為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb.的干燥塊根，其性微溫，味苦，甘，澀。有生首烏與制首烏之分，生首烏具有解毒、消癰、截瘧、潤(rùn)腸通便的功效，用于瘡癰，瘰疬，風(fēng)疹瘙癢，久瘧體虛，腸燥便秘；制首烏具有補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨，化濁降脂的作用，用于血虛萎黃，眩暈耳嗚，須發(fā)早白，腰膝酸軟，肢體麻木，崩漏帶下，高脂血癥[1]。何首烏在全國(guó)范圍分布廣泛，主產(chǎn)于貴州、四川、湖北、廣西、廣東、河南等地[2-4]

《中華人民共和國(guó)藥典》2010版中規(guī)定何首烏“秋、冬二季葉枯萎時(shí)采挖，削去兩端，洗凈，個(gè)大的切成塊，干燥”，但并未對(duì)采收期做出具體規(guī)定，從而造成藥材質(zhì)量不一，不利于何首烏藥材質(zhì)量控制。目前關(guān)于何首烏適宜采收期的報(bào)道尚不多見，故本實(shí)驗(yàn)在收集貴州省施秉縣GAP生產(chǎn)基地兩年生不同采收期何首烏藥材的基礎(chǔ)上，利用HPLC法，以二苯乙烯苷與蒽醌類成分含量為指標(biāo)，采用主成分分析綜合評(píng)價(jià)法分析采收期對(duì)何首烏藥材質(zhì)量的影響，以期為確立何首烏的最佳采收期提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2998檢測(cè)器；Empower色譜工作站。分析天平(SARTORIUS AG；BP211D；d=0.01 mg)；高速離心機(jī)(Anke TGL-16B)；精密鼓風(fēng)恒溫干燥箱(DGT-G250)，超聲清洗器(250W；50Hz)。乙腈為色譜純(購(gòu)自德國(guó)merck公司)，超純水自制。二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品購(gòu)自成都瑞芬思生物科技有限公司(批號(hào)：F-022-130512、D-029-130401、D-004-130315，純度均大于98%)，無(wú)水乙醇購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司(批號(hào)：1502253310)。

何首烏由貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司提供，藥材來(lái)源見表1。經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)段金廒教授鑒定為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb.的干燥塊根。潤(rùn)濕切厚片，置于恒溫干燥箱中50 ℃，16 h烘干，粉碎，過(guò)四號(hào)篩，備用。

表1 何首烏藥材來(lái)源

2 方法與結(jié)果

2.1 二苯乙烯苷含量測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取二苯乙烯苷對(duì)照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1 mL含0.186 mg的二苯乙烯苷溶液，即得[1]。

2.1.2 樣品測(cè)定 取不同采收期何首烏樣品粉末，按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版何首烏含量測(cè)定二苯乙烯苷項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，每個(gè)樣品平行2份，并按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版何首烏含量測(cè)定二苯乙烯苷項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每份測(cè)定2次。計(jì)算各樣品中二苯乙烯苷的含量，結(jié)果見表2。

圖1 二苯乙烯苷對(duì)照品(A)和何首烏樣品(B)HPLC圖

2.2 結(jié)合蒽醌含量測(cè)定[1]

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含大黃素54.2 μg，大黃素甲醚18.8 μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品測(cè)定 取不同采收期何首烏樣品粉末，按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版何首烏含量測(cè)定結(jié)合蒽醌項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，每個(gè)樣品平行2份，并按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版何首烏含量測(cè)定結(jié)合蒽醌項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每份測(cè)定2次。計(jì)算各樣品中結(jié)合蒽醌的含量(結(jié)合蒽醌含量=總蒽醌-游離蒽醌)，結(jié)果見表2。

由表2 可知，樣品中二苯乙烯苷含量由高到低依次為：S2>S3>S1>S5>S4>S6，即9月份采收何首烏含量較高。結(jié)合蒽醌的含量呈先升高后降低趨勢(shì)。

表2 不同采收期何首烏樣品測(cè)定結(jié)果 (%)

1-大黃素；2-大黃素甲醚。圖2 對(duì)照品(A)和何首烏樣品(B)HPLC圖

2.3 不同采收期的綜合評(píng)價(jià)

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，以二苯乙烯苷和蒽醌類含量和對(duì)應(yīng)的樣品組成矩陣，對(duì)不同采收期樣品中各成分含量進(jìn)行主成分分析，以其因子得分與方差貢獻(xiàn)率成績(jī)之和相加，得出各類成分總因子得分值，以得分值F大小評(píng)價(jià)采收期對(duì)何首烏藥材質(zhì)量的影響。由各因子載荷矩陣(表3)可知，二苯乙烯苷成分在主成分1上有較高載荷，蒽醌類在主成分2上有較高載荷，且兩個(gè)主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)到96.44%，能夠客觀地反應(yīng)何首烏藥材的質(zhì)量。故選用前兩個(gè)主成分對(duì)不同采收期的何首烏藥材進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，其綜合評(píng)價(jià)函數(shù)為F=0.739 46f1+0.224 95f2，其中F為綜合得分，f1為主成分1，f2為主成分2。綜合得分結(jié)果見表4。

表3 何首烏中各活性成分因子載荷矩陣

表4 不同采收期藥材主成分因子及品質(zhì)綜合評(píng)價(jià)

由表3可知樣品綜合評(píng)分有較大差異，其中9、10月份明顯高于其他采收期。故以二苯乙烯苷和蒽醌類成分來(lái)看，9、10月份采收何首烏較為適宜。

3 討論

3.1 不同采收期對(duì)二苯乙烯苷含量的影響

二苯乙烯苷類成分是何首烏藥材中含有的一大類具有多種生物活性成分，其中以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(簡(jiǎn)稱二苯乙烯苷)的量較高，《中華人民共和國(guó)藥典》2010版規(guī)定其含量不低于1%[1]。二苯乙烯苷具有抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、降低膽固醇、抑制動(dòng)脈粥樣狀硬化和保護(hù)肝臟等作用[5]，故選擇該化合物作為考察不同采收期對(duì)何首烏藥材中二苯乙烯苷類化合物的影響的指標(biāo)性成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明貴州省施秉縣樣品二苯乙烯苷含量在9月份達(dá)到一個(gè)峰值，隨后含量略有降低。

3.2 不同采收期對(duì)蒽醌類含量的影響

何首烏藥材中蒽醌類成分包括游離型蒽醌和結(jié)合型蒽醌，蒽醌類成分多具有抗菌、消炎、瀉下等生物活性。目前認(rèn)為是何首烏藥材發(fā)揮解毒、消癰、潤(rùn)腸通便功效的主要活性成分，且認(rèn)為結(jié)合型蒽醌瀉下通便作用強(qiáng)于游離型蒽醌[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示貴州施秉縣何首烏樣品中結(jié)合蒽醌含量同樣在9月份達(dá)到峰值，隨后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。同時(shí)游離蒽醌含量總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，其結(jié)果符合結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)化為游離蒽醌的論述[7]。

3.3 不同采收期對(duì)何首烏質(zhì)量影響的綜合評(píng)價(jià)

由于不同采收期何首烏樣品中各化學(xué)成分的含量變化不盡相同，所以可以用主成分分析綜合評(píng)價(jià)法對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以確定何首烏的適宜采收期[8]。以二苯乙烯苷和蒽醌類成分為指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，9、10月份采收何首烏較為適宜，與二苯乙烯苷和結(jié)合蒽醌含量顯示適宜采收期結(jié)果具有一致性。分析其原因可能是在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，養(yǎng)分不斷積累，11月份進(jìn)入果熟期消耗大量養(yǎng)料所致[9]。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部 [S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.2010，164-165.

[2] 中國(guó)藥材集團(tuán)公司.中國(guó)中藥資源[M].北京：北京：科學(xué)出版社，1995：2231.

[3] 徐國(guó)鈞，徐珞珊，王崢濤.常用中藥材品種整理隔和質(zhì)量研究：第3冊(cè)[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1999：431.

[4] 易思榮，黃婭，肖中，等.何首烏的高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008，10(3)：41-43.

[5] 謝嵐.何首烏及二苯乙烯苷的研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2010，22(03)：70-73.

[6] 羅瑞芝，賈偉，趙利斌，等.何首烏研究進(jìn)展[J].中草藥，2005，36(7)：1097-1100.

[7] 郭盛，段金廒，吳達(dá)維，等.干燥方法對(duì)何首烏塊根中多元功效物質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[J].中草藥，2014，45(04)：498-503.

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EffectofHarvestSeasonsonMainBioactiveConstituentsinPolygoniMultifloriRadix

LiShuaifeng1，2，ZhengChuanzhu1，2，ZhangLi1，2，YaoWeifeng1，2，LanCaiwu3，HeDingxiang3，DingAnwei1，2*

(1.JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization，andNationalandLocalCollaborativeEngineeringCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrializationandFormulaeInnovativeMedicine，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023，China； 2.GuizhouChanghaoChineseMedicineDevelopmentCo.，Ltd.，Kaili556000，China)

Objective：To explore the effect of different harvest seasons on main bioactive constituents inPolygoniMultifloriRadix(PMR)，and provide scientific evidence for the suitable harvest season for PMR.Methods：HPLC was used to determine the contents of stilbene glycosides，free and conjugated anthraquinones of samples of different harvest seasons from Shibing county of Guizhou province.Component analysis(PCA)was used through the software of SPSS 20.0 to assess the effect of different harvest seasons on main bioactive constituents.Results：The contents of stilbene glycosides in the samples of different harvest seasons were as follows in descending order：September>October > August>November>December>January.The contents of conjugated anthraquinonesreached the peak onSeptemberand then descended over time.The results of PCA also showed that the comprehensive scores of samples of September and October were higher.Conclusion：Appropriate collecting-times of PMR were in September and October.

Polygoni Multiflori Radix；different harvest seasons；stilbene glycoside；anthraquinone

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.015

2015-01-13)

國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI13B04)；貴州省中藥現(xiàn)代化專項(xiàng)(黔科合中藥字[2013]5059號(hào))；江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心重點(diǎn)項(xiàng)目(ZDXM-1-3)；江辦高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(ysxk-2014)；江蘇高校品牌專業(yè)建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PPZY2015A070)

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丁安偉，教授，研究方向：中藥炮制與質(zhì)量控制研究；Tel：(025)85811523，E-mail：awding105@163.com