朱國雪，張超，王淑美

(1.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.康美(北京)藥物研究院有限公司，北京 102629)

·中藥工業(yè)·

麻杏石甘湯煮散工藝研究△

朱國雪1，2，張超2，王淑美1*

(1.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.康美(北京)藥物研究院有限公司，北京 102629)

目的：優(yōu)選麻杏石甘湯煮散的煎煮工藝。方法：以麻杏石甘湯中麻黃、苦杏仁、生石膏的最佳煎煮粒度為研究對(duì)象，采用HPLC測(cè)定麻杏石甘湯中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸銨的含量，以浸膏得率和指標(biāo)性成分的含量為指標(biāo)，同時(shí)采用單因素試驗(yàn)進(jìn)行加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)的考察，優(yōu)選最佳煎煮工藝，為臨床合理使用提供依據(jù)。結(jié)果：最佳煎煮工藝是加16倍水，煎煮1次，煎煮20 min。結(jié)論：優(yōu)選的煎煮工藝簡(jiǎn)單快速，穩(wěn)定可行，適合臨床上使用，且為煮散的后續(xù)研究提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。

煮散；麻杏石甘湯；浸膏得率；指標(biāo)性成分；煎煮工藝

中藥煮散是指將中藥飲片粉碎成顆粒與水共同煎煮后去渣取汁制成的液體劑型。其不僅具有湯劑吸收快、療效高的特征，還能夠很好地適應(yīng)病情的需要，隨癥加減，提高療效，節(jié)省藥材[1]。

麻杏石甘湯出自漢代張仲景的《傷寒論》，由麻黃、苦杏仁、甘草和生石膏4味中藥組成，具有辛涼宣肺、止咳平喘的功能[2]。用于外感風(fēng)邪，肺熱咳喘癥[3]。麻杏石甘湯含量測(cè)定方面已經(jīng)有一些報(bào)道[4]，但對(duì)其工藝方面的研究較少，本文從其浸膏得率和指標(biāo)性成分入手，對(duì)麻杏石甘湯的煎煮工藝進(jìn)行優(yōu)化，且對(duì)其煮散與飲片的指標(biāo)性成分的含量進(jìn)行對(duì)比。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 型高效液相色譜儀(安捷倫公司)；KQ-50B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TL80-2型醫(yī)用離心機(jī)(中國姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司)；CPA224s型電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司]；98-I-B型電子恒溫電熱套、WGL-2308型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特有限公司)；SF-B型包封機(jī)(上海三聯(lián)包裝機(jī)械有限公司)。

1.2 試藥

炙甘草(批號(hào)：140481891)、麻黃(批號(hào)：130403461)、苦杏仁(批號(hào)：130407681)、生石膏(批號(hào)：130401891)均購自康美藥業(yè)股份有限公司，且經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)中藥鑒定教研室馬驥教授鑒定均為正品；鹽酸麻黃堿對(duì)照品、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品、苦杏仁苷對(duì)照品、甘草酸銨對(duì)照品、甘草苷對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為171241-201007，171237-201208，110820-200403，110731-200409，111610-201106)；乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑為分析純；水為液相水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Synergi 4μ Polar-R P80A(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷為210 nm，甘草酸銨為250 nm，甘草苷為270 nm；流動(dòng)相：以0.1%磷酸水溶液(含0.01 mol·L-1磷酸二氫鈉)為流動(dòng)性A，以乙腈為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。

表1 指標(biāo)性成分測(cè)定梯度洗脫程序

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱取甘草苷對(duì)照品7.58 mg、甘草酸銨對(duì)照品9.82 mg、苦杏仁苷對(duì)照品7.64 mg、鹽酸麻黃堿對(duì)照品4.87 mg、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品3.20 mg，于25 mL的容量瓶中，加水定容至刻度，即得。

2.3 供試品溶液的制備

稱取麻杏石甘湯煮散：麻黃6 g、苦杏仁9 g、炙甘草6 g、生石膏24 g，加20倍水，煎煮20 min，煎煮1次，濃縮定容至50 mL，取2 mL于5 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，超聲處理20 min，離心，過0.45 μm的濾膜，得供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL于5 mL的容量瓶中，加水定容至刻度，用2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得回歸方程，鹽酸麻黃堿：Y=2111X+14.138(r=1.000 0)；鹽酸偽麻黃堿：Y=1986X+17.709(r=1.000 0)；甘草苷：Y=659.82X+14.888(r=0.999 6)；甘草酸銨：Y=883.32X-5.431 5(r=1.000 0)；苦杏仁苷：Y=7.1E+5X+11 650(r=0.999 8)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.097 4～1.948 μg、鹽酸偽麻黃堿在0.064～1.28 μg、甘草苷在0.303 2～3.032 μg、甘草酸銨在0.785 6～7.856 μg、苦杏仁苷在0.611 2～6.112 μg與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，對(duì)照品鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、甘草苷、甘草酸銨、苦杏仁苷的RSD值分別為1.56%、1.67%、1.89%、1.38%、1.87%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄峰面積，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、甘草苷、甘草酸銨、苦杏仁苷的RSD值分別為1.86%、1.97%、2.09%、1.78%、2.05%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取麻杏石甘湯煮散各6份，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品，依法測(cè)定，計(jì)算各成分含量，結(jié)果鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、甘草苷、甘草酸銨、苦杏仁苷的RSD值分別為1.97%、2.07%、2.56%、2.23%、2.16%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn) 稱取麻杏石甘湯煮散9份，分別加入低、中、高濃度的對(duì)照品適量，按2.3項(xiàng)下方法制備樣品，依法測(cè)定，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、甘草苷、甘草酸銨、苦杏仁苷的平均加樣回收率分別為98.98%、99.03%、98.87%、99.08%、101.02%，表明本法具有較好的回收率。

2.5 煎煮工藝研究

2.5.1 麻杏石甘湯中藥材最佳粒徑考察 根據(jù)對(duì)單味藥煮散制備工藝和煎煮工藝的研究筆者得出：麻黃、苦杏仁優(yōu)選最粗粉，生石膏優(yōu)選粗粉，炙甘草最粗粉、粗粉、中粉之間無明顯差異，因此本研究從生產(chǎn)、包裝、實(shí)用多方面考慮，炙甘草的粒度范圍優(yōu)選為小于10目大于80目的顆粒。

2.5.2 加水量的考察 稱取8組麻杏石甘湯煮散，每組3份，每份麻黃6 g、苦杏仁9 g、炙甘草6 g、生石膏24 g，依次加入6、8、10、12、14、16、18、20倍水，煎煮20 min，煎煮1次，濃縮定容至50 mL，取2 mL于5 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，超聲處理20 min，離心，過0.45 μm的濾膜，得供試品。

參考《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄X中水溶性浸出物測(cè)定法，提取得到煮散水煎液后，精密量取濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計(jì)算干膏得率。

通過方差分析，加水量對(duì)麻杏石甘湯中指標(biāo)性成分的煎出量的改變有極顯著影響(p<0.01)，進(jìn)而用多重比較方法(LSD方法)，進(jìn)行兩兩比較，當(dāng)加水量到16倍后雖然苦杏仁苷的含量較小，但其他指標(biāo)性成分的含量和浸膏得率與其余倍數(shù)加水量相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，綜合所有指標(biāo)性成分和浸膏得率，筆者初步確定麻杏石甘湯的加水量為16倍[5]。見圖1。

圖1 麻杏石甘湯加水量的考察(n=3)

2.5.3 煎煮時(shí)間的考察 稱取5組麻杏石甘湯煮散，每組3份，每份麻黃6 g、苦杏仁9 g、炙甘草6 g、生石膏24 g，每份加入16倍水，依次煎煮10、20、30、40、50 min，煎煮1次。按2.5.2項(xiàng)下方法制備供試品，并測(cè)定浸膏得率。

通過方差分析，煎煮時(shí)間對(duì)麻杏石甘湯中指標(biāo)性成分的煎出量的改變有極顯著影響(p<0.01)，進(jìn)而用多重比較方法(LSD方法)，進(jìn)行兩兩比較，當(dāng)煎煮時(shí)間在20 min時(shí)，與其他煎煮時(shí)間點(diǎn)相比，指標(biāo)性成分的煎出率與浸膏得率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。綜合指標(biāo)性成分和浸膏得率，筆者初步確定麻杏石甘湯的煎煮時(shí)間為20 min。見圖2。

圖2 麻杏石甘湯煎煮時(shí)間的考察(n=3)

2.5.4 煎煮次數(shù)的考察 稱取3組麻杏石甘湯煮散，每組3份，每份麻黃6 g、苦杏仁9 g、炙甘草6 g、生石膏24 g，加入6、8、10倍水，各煎煮20 min，煎煮2次，按2.5.2項(xiàng)下方法制備供試品，并測(cè)定浸膏得率，得出結(jié)果與相同加水量、煎煮20 min、煎煮1次的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。

試驗(yàn)結(jié)果表明：煎煮次數(shù)對(duì)煮散組份的溶出有一定影響，主要成分的煎出量隨煎煮次數(shù)的增加而增多。1次煎煮在加入足量水后有效成分的轉(zhuǎn)移率已達(dá)60%～80%，考慮到節(jié)約能源且減少服藥量，故初步確定煎煮次數(shù)為1次。見圖3。

2.6 煮散與飲片用量的化學(xué)對(duì)比性研究

2.6.1 研究?jī)?nèi)容 以固形物及主要有效成份煎出率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)煮散及飲片進(jìn)行化學(xué)對(duì)比性研究，并以此為基礎(chǔ)確定兩者之間的劑量關(guān)系。

2.6.2 研究方法 煮散煎煮：加16倍水，煎煮20 min，煎煮1次。飲片煎煮：1)同煮散煎煮方法。2)常規(guī)煎煮方法：加6倍水，煎煮30 min，再加4倍水，煎煮20 min。見表2。

圖3 麻杏石甘湯煎煮次數(shù)考察(n=3)

固形物鹽酸麻黃堿鹽酸偽麻黃堿甘草苷甘草酸銨苦杏仁苷煮散/飲片(飲片按煮散煎煮法)1.26倍3.52倍4.02倍3.99倍4.86倍1.06倍煮散/飲片(飲片按常規(guī)煎煮法)1.67倍2.11倍2.52倍3.23倍4.14倍1.02倍

3 討論

3.1麻杏石甘湯的最佳煎煮工藝：加16倍水，煎煮20 min，煎煮1次，在此條件下進(jìn)行有效成分結(jié)果對(duì)比，采用最佳煎煮工藝，煮散能達(dá)到飲片的3.52～4.86倍，能節(jié)約5/7～4/5的藥材；采用常規(guī)

法，煮散能達(dá)到飲片的2.11～4.14倍，能節(jié)約1/2～3/4的藥材。且煮散縮短了煎煮時(shí)間，說明了煮散在臨床的可行性。

3.2煮散的粒徑影響煎出率[6-8]，最佳粒徑使得中藥指標(biāo)性成分能最大程度地溶出，在選擇粉體的時(shí)候不僅應(yīng)該考慮其煎出率，還應(yīng)該考慮其生產(chǎn)的可能性。麻黃、炙甘草纖維性比較強(qiáng)，不僅要滿足有效成分煎出量達(dá)到較優(yōu)，而且還要選擇較寬的粒度范圍，這樣有利于煮散制備生產(chǎn)時(shí)達(dá)到較高的收粉率。本研究在考察煎煮次數(shù)時(shí)，僅選擇6、8、10倍的加水量，是考慮到加水量過多時(shí)，為達(dá)到臨床湯劑的服用量會(huì)相應(yīng)增加濃縮時(shí)間和能耗[5]。

3.3研究結(jié)果表明煮散中苦杏仁苷含量與飲片的差別不大，而煮散的其他指標(biāo)性成分遠(yuǎn)高于飲片，其原因可能是生石膏能降低苦杏仁苷的含量[9]，其他可能原因還需要進(jìn)一步探討。

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ResearchonDecoctionProcessofMaxingshiganZhusan

ZHUGuoxue1，2，ZHANGChao2，WANGShumei1*

(1.GuangzhouPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，china；2.Kangmei(Beijing)PharmaceuticalResearchInstituteCo.Ltd，Beijing102629，China)

Objective：To optimize the decoction process of Maxingshigan Zhusan.Methods：The optimal size of particle was prepared，HPLC method was used for the determination of the content of ephedrine，pseudoephedrine，amygdalin，liquiritin and glycyrrhizic acid.Yield of dry extract and the content of index components were selected as the referent indexes，and the decoction process was optimized by boiling time，amount of water and boiling times as the factors.Results：The optimal condition for decoction process were 16-fold solvent，boiling 20 minutes，1 time.Conclusion：The optimized extracting process is user-friendly and suitable in clinical，providing experimental basis for the subsequent development.

Zhusan of traditional Chinese medicine；Maxingshigan decoction；yield of dry extrcct；content of index components；decoction techniques

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.015

2014-11-17)

北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)“十病十藥”研發(fā)項(xiàng)目(Z121102001112010)

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王淑美，博士，教授，研究方向：中藥物質(zhì)基礎(chǔ)及新藥開發(fā)；E-mail：zhuguoxue0122@163.com