南文金 黃健強(qiáng) 胡鴻惠 吳靜波

摘 要：廣東某豬場，哺乳仔豬和保育豬舍仔豬出現(xiàn)以神經(jīng)癥狀、呼吸困難和關(guān)節(jié)炎為主要特征的疾病。發(fā)病豬樣品經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室檢測，結(jié)果表明豬偽狂犬病毒gE抗體和豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸呈陽性，細(xì)菌分離鑒定豬鏈球菌2型為陽性。綜合臨床癥狀、剖檢變化及實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，該例傳染病診斷為豬偽狂犬病毒、繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和鏈球菌混合感染。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬病毒；繁殖與呼吸障礙綜合征病毒；鏈球菌；診斷

中圖分類號 S852 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號 1007-7731（2015）17-102-03

Diagnosis for Mixed Infection of Pseudorabies，Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome and Streptococcus

Nan Wenjin et al.

（Laboratory of Animal Disease，Shaoguan University，Shaoguan 512005，China；North Guangdong Collaborative Innovation and Development Center of Pig Farming and Disease Control，Shaoguan 512005，China）

Abstract：A pig farms in Guangdong，suckling pigs and nursery pigsbroken out neurological symptoms，dyspnoea and arthritis as the main clinical characteristics of the disease. Samples of infected pigs through laboratory tests，the results showed that the Porcine Pseudorabies virus（PRV）gE antibodyand Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus（PRRSV）nucleic acid positive，and the bacterial isolation and identification showed that Streptococcus suis type 2（SS2）positive. Comprehensiveclinical symptoms，pathological anatomical change and laboratory test results，the case of infectious disease diagnosis of PRV，PRRSV and SS2 co-infection.

Key words：Pseudorabies virus；Porcine Reproductive and respiratory syndrome virus；Streptococcus；Diagnosis

廣東某豬場，哺乳后期仔豬和保育舍仔豬出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹，神經(jīng)癥狀，呼吸困難等癥狀，隨著病程發(fā)展，發(fā)病仔豬食欲廢絕，逐漸消瘦死亡，損失較大。綜合臨床癥狀，病理變化和實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，確診為豬偽狂犬、豬繁殖與呼吸綜合征和鏈球菌混合感染。

1 發(fā)病情況

廣東某豬場，存欄母豬300頭，2014年9月份開始哺乳后期個(gè)別仔豬開始出現(xiàn)呼吸道癥狀和神經(jīng)癥狀，斷奶仔豬轉(zhuǎn)入保育舍后部分出現(xiàn)后肢關(guān)節(jié)腫脹，神經(jīng)癥狀增多，體溫上升，呼吸困難，逐漸消瘦死亡。發(fā)病后懷疑為副豬嗜血桿菌或鏈球菌，采用多種抗生素保健和治療，效果不理想，保育舍發(fā)病率和死亡率不斷增加，2014年12月份豬舍保育舍仔豬發(fā)病率達(dá)40%，發(fā)病豬死亡率接近60%。

2 解剖病變

解剖發(fā)病和死亡保育豬，普遍存在心包、胸腔和腹腔有積液；肺臟腫脹、間質(zhì)性性肺炎；肝臟和脾臟腫大、部分肝臟表面覆蓋纖維素性滲出物，偶見白色壞死點(diǎn)；腫大的關(guān)節(jié)腔里有滲出液；腹股溝淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)腫大充血；腎臟有點(diǎn)狀血；腦膜水腫明顯，個(gè)別充血。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 樣品采集 無菌采集發(fā)病保育豬心血、關(guān)節(jié)液、淋巴結(jié)、肺臟和脾臟組織5份；隨機(jī)采集19頭有臨床癥狀的仔豬（產(chǎn)房仔豬和保育舍保育豬）和25頭懷孕母豬前腔靜脈血3～5mL，實(shí)驗(yàn)室分離分離血清備用。

3.2 主要試劑 Taq PCR Mastermix、DL 2000 DNA Marker、RNAiso Plus、cDNA第一鏈試劑盒購自寶生物工程（大連）有限公司；瓊脂糖購自Sigma公司；豬藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒和豬偽狂犬野毒抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；營養(yǎng)瓊脂購、小牛血清、藥敏紙片購置杭州天和微生物試劑有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

3.3 主要儀器 PCR儀、恒溫金屬浴為杭州博日科技有限公司產(chǎn)品；恒溫培養(yǎng)箱為韶關(guān)科力儀器設(shè)備公司生產(chǎn)；凝膠成像系統(tǒng)為法國VILBER公司生產(chǎn)；臺(tái)式冷凍離心機(jī)、全波長酶標(biāo)儀為美國Therm Fisher公司生產(chǎn)；移液器為芬蘭百得公司生產(chǎn)；超凈工作臺(tái)為蘇州凈化科技有限公司生產(chǎn)。

3.4 血清學(xué)檢測 按IDEXX抗體檢測試劑盒使用說明對采集的母豬和仔豬血清樣品進(jìn)行豬藍(lán)耳病抗體檢測和豬偽狂犬野毒抗體檢測。結(jié)果19頭仔豬藍(lán)耳病抗全部呈陽性，陽性率100%，平均S/P值2.34，抗體離散度高達(dá)81.6%；19頭仔豬豬偽狂犬野毒抗體陽性的7頭，野毒抗體可疑的2頭。25頭母豬藍(lán)耳病抗全部呈陽性的有19頭，陽性率76%，平均S/P值1.74，抗體離散度高達(dá)73.3%；25頭母豬偽狂犬野毒抗全部呈陽性的有6頭，豬偽狂犬野毒陽性率24%。

3.5 病毒檢測 用實(shí)驗(yàn)室建立的豬藍(lán)耳病經(jīng)典毒株和變異毒株鑒別診斷RT-PCR、豬瘟病毒RT-PCR和豬圓環(huán)病毒PCR檢測方法進(jìn)行血清和病料中病毒核酸檢測。

3.6 細(xì)菌分離鑒定 取新鮮的病料組織和關(guān)節(jié)液觸片，革蘭氏染色后鏡檢。用無菌接種環(huán)取少量關(guān)節(jié)炎接種到THB培養(yǎng)基中，37℃，培養(yǎng)18h，取少量菌液進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)用豬鏈球菌2型特異性鑒定引物進(jìn)行PCR鑒定。

3.6 細(xì)菌藥敏試驗(yàn) 將PCR鑒定過的鏈球菌2型菌株純培養(yǎng)物均勻涂布于含小牛血清的LB瓊脂平板上，常規(guī)K-B紙片擴(kuò)散方法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，準(zhǔn)確記錄抑菌圈直徑。

4 結(jié)果

4.1 血清學(xué)檢測結(jié)果 19頭仔豬藍(lán)耳病抗全部呈陽性，，陽性率100%，平均S/P值2.34，抗體離散度高達(dá)81.6%；19頭仔豬豬偽狂犬野毒抗體陽性的7頭，野毒抗體可疑的2頭。25頭母豬藍(lán)耳病抗全部呈陽性的有19頭，陽性率76%，平均S/P值1.74，抗體離散度高達(dá)73.3%；25頭母豬偽狂犬野毒抗全部呈陽性的有12頭，豬偽狂犬野毒陽性率48%。

4.2 病毒檢測結(jié)果 對采集的8頭發(fā)病保育豬血清提取RNA后進(jìn)行了藍(lán)耳病核酸擴(kuò)增，結(jié)果1～4號血清樣品藍(lán)耳病變異毒株和經(jīng)典毒株呈陽性（418bp和508bp），5號樣品變異毒株陽性（418bp），6～8號樣品藍(lán)耳病擴(kuò)增為陰性（見圖1）。對采集的4份病料進(jìn)行了豬瘟、豬圓環(huán)病毒PCR擴(kuò)增，均無目的條帶擴(kuò)增。

圖1 豬藍(lán)耳病變異毒株和經(jīng)典毒株RT-PCR鑒定結(jié)果

注：1-8：血清樣品；M：DNA Marker DL 2000。

4.3 細(xì)菌檢測結(jié)果 新鮮病料觸片革蘭氏染色可見優(yōu)勢菌為成對或短鏈狀排列，接種BHT培養(yǎng)基進(jìn)行鏈球菌增菌培養(yǎng)后革蘭氏染色可見典型的鏈球菌，經(jīng)過豬鏈球菌2型PCR鑒定為豬鏈球菌2型菌株（見圖2和圖3）。

圖2 BHT增菌培養(yǎng)后革蘭氏染色（1000X）

圖3 豬鏈球菌2型PCR鑒定

注：SS：鏈球菌；M：DNA Marker DL2000。

4.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 選擇常用的獸用抗菌藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，該菌株對慶大霉素、新霉素、丁胺卡那霉素、阿莫西林、青霉素、磺胺間甲氧嘧啶、泰妙菌素、氟苯尼考幾乎都不敏感。

5 診斷結(jié)果

依據(jù)實(shí)驗(yàn)室血清檢測和病原檢測結(jié)果，結(jié)合臨床癥狀、病理變化和疫苗免疫程序，本次疫情診斷為豬偽狂犬野毒感染，同時(shí)該豬場藍(lán)耳病變異毒株處于活躍期，豬群發(fā)病后又繼發(fā)感染鏈球菌2型，造成了保育豬死亡較多。

6 防治措施

及時(shí)淘汰沒有飼養(yǎng)價(jià)值的發(fā)病豬并進(jìn)行無害化處理，加強(qiáng)全場飼養(yǎng)管理，增加消毒次數(shù)，飼料和飲水中添加電解多維。全場所有豬緊急免疫豬偽狂犬基因工程疫苗，種豬和中大豬肌肉注射3頭份，保育舍小豬肌肉注射2頭份，21d后再加強(qiáng)免疫1次。產(chǎn)房現(xiàn)有仔豬滴鼻免疫1頭份，斷奶轉(zhuǎn)群前再肌肉注射1次。

該場原偽狂犬疫苗免疫不科學(xué)，母豬每年免疫2次，小豬45日齡左右肌肉注射疫苗1次。鑒于偽狂犬野毒感染比例較高，必須增加滴鼻免疫，產(chǎn)房新分娩仔豬出生當(dāng)天進(jìn)行滴鼻免疫1頭份，60日齡左右肌肉注射疫苗1次，90日齡加強(qiáng)免疫1次，公豬和母豬每90d偽狂犬免疫1次。30d后，生產(chǎn)基本恢復(fù)正常，新出生的仔豬發(fā)病率和死亡率大大降低。

7 討論

我國豬偽狂犬疫病控制成效較好，很多豬場都成功凈化了該疫病。但近2a來豬偽狂犬疫情在部分地區(qū)爆發(fā)，一些偽狂犬陰性場短時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)陽，在部分豬場造成較大損失。該場就是因?yàn)楹鲆暳藗慰袢呙缑庖撸N豬免疫次數(shù)減少，商品豬免疫程序不科學(xué)，造成偽狂犬野毒感染。

混合感染成為豬病主要發(fā)病形式，疾病臨床癥狀和病理變化不典型，依據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)很難做出一個(gè)準(zhǔn)確的診斷，特別是在藍(lán)耳病病毒普遍感染情況下，對一些疫病要通過實(shí)驗(yàn)室檢測，根據(jù)檢測結(jié)果綜合判斷，才能制定科學(xué)合理的防治措施。 （責(zé)編：徐煥斗）