惠慧 林海龍 潘曉芳 賈曉東 徐鶴

【摘 ? 要】 目的 ?探討大連地區(qū)漢族人內(nèi)皮型一氧化氮基因G894T多態(tài)性與原發(fā)性高血壓之間的關(guān)系。方法 ?Chelex-100法抽提DNA，測定100名高血壓患者及健康對(duì)照的基因分型，并測定其性別、年齡、體重、血脂等指標(biāo)。結(jié)果 ?觀察組的GT、TT基因型及T等位基因頻率均高于正常對(duì)照組，P<0.05。結(jié)論 ?一氧化氮合酶基因G894T多態(tài)性可能是大連地區(qū)漢族人高血壓的一種遺傳敏感性指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 高血壓;基因順應(yīng)性;一氧化氮合酶

【中圖分類號(hào)】 R544.1 ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

高血壓病是多基因遺傳性疾病，基因和基因、環(huán)境和基因的相互影響的復(fù)雜性導(dǎo)致各人群間的易感基因不同。內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）屬NOS家族，定位于染色體7q35-36，包含有26個(gè)外顯子和25個(gè)內(nèi)含子，全長約21-22kb，翻譯生成的蛋白質(zhì)產(chǎn)物為1203個(gè)氨基酸。至今為止，發(fā)現(xiàn)該基因存在近10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，而第7核苷酸894處的G被T等位基因所代替后，以致第298號(hào)氨基酸由Glu變?yōu)锳sp[1]。以往的國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，該基因G894T多態(tài)性和原發(fā)性高血壓密切相關(guān)，并具備種族及地區(qū)特異性。本人旨在研究大連地區(qū)eNOS基因G894T多態(tài)性與原發(fā)病高血壓之間的關(guān)系。

1 ?資料與方法

1.1 ?病例選擇 ?高血壓和正常對(duì)照組各100例，男、女各50例，年齡40～65歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：患糖尿病、繼發(fā)性高血壓以及嚴(yán)重臨床重要疾?。ㄈ缧哪X血管疾病、肝腎及外周血管疾病等）。

1.2 ?Chelex-100法抽提DNA

1.3 ?基因型測定上下游引物分別是：5-TCCCTgAggAgggCATgAggC-3，5-TgAgggTCACACAggTTCCT-3。PCR反應(yīng)體系：50uL反應(yīng)體系，加超純水至50ul，混勻后離心。預(yù)變性94℃需4min;而后變性94℃ 需0.5 min，退火55℃需1min，延伸72℃需1min，35個(gè)循環(huán);最后72℃延伸時(shí)間為5min，擴(kuò)增產(chǎn)物糖凝膠電泳后再采用EB染色。取PCR產(chǎn)物10uL，限制性內(nèi)切酶BanII 0.5uL，10xBuffer1.5uL，滅菌去離子雙蒸水2.9uL，反應(yīng)總體積共15uL，混勻離心30s，37℃恒溫箱孵育2小時(shí)。根據(jù)條帶個(gè)數(shù)確定G、T基因型。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ?SPSS11.0軟件包，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差分析計(jì)量資料，用t檢驗(yàn)或方差分析組間計(jì)量資料，X2檢驗(yàn)分析計(jì)數(shù)資料。

2 ?結(jié)果

觀察組和健康對(duì)照eNOS各基因型的頻率比較，觀察組和對(duì)照組的eNOS基因G894T基因型構(gòu)成比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），前者GT、TT基因型頻率及T等位基因頻率均顯著高于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P<0.05）（見表1）。

3 ?討論

作為高血壓的一個(gè)重要候選基因，eNOS已引起國內(nèi)外很多學(xué)者的廣泛關(guān)注，其中，G894T多態(tài)性對(duì)原發(fā)性高血壓影響的研究結(jié)論各不相同。張麗萍[2]等發(fā)現(xiàn)，G894T多態(tài)性可能是中國新疆維吾爾族人群高血壓的一種遺傳易感性指標(biāo)，T等位基因頻率在EH和正常組分別是29.33%、22.83%，明顯高于劉海珍[3]等研究的中國漢族人群（26.2%、12.8%）。但譚建聰?shù)萚4]發(fā)現(xiàn)該基因多態(tài)性與重慶市高血壓患者無明顯關(guān)聯(lián)。陳麗娜等[5]對(duì)寧夏回族的研究結(jié)果表明，回族高血壓組GG、GT、TT基因型分別頻率為0.831、0.142和0，兩組間基因頻率差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。梁榮等[6]對(duì)天津的高血壓人群分析，提示G894T多態(tài)性與原發(fā)性高血壓無關(guān)。分析其差異的原因，可能與環(huán)境、生活習(xí)慣及遺傳結(jié)構(gòu)等因素相關(guān)。隨著血管生物學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域聯(lián)合研究發(fā)展，對(duì)基因可能會(huì)需要更深入的臨床試驗(yàn)。

綜上所述，不同種族、不同地域的eNOS等位基因頻率不一致，報(bào)道結(jié)論不一。該研究提示eNOS基因G894T多態(tài)性與大連地區(qū)漢族人的原發(fā)性高血壓相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不足之處的是，該研究樣本量較小，故需進(jìn)行大樣本的研究來進(jìn)一步確定其相關(guān)性。

參考文獻(xiàn)

[1] 崔美善.內(nèi)皮型一氧化氮基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性[J].中國心血管病研究，2014，12（4）：362-364.

[2] 張麗萍.內(nèi)皮型一氧化氮基因G894T多態(tài)性與新疆維吾爾族原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)研究[J].中華心血管病雜志，2006，34（5）：403-406.

[3] 劉海珍.內(nèi)皮型一氧化氮基因G894T多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系研究[J].中國循環(huán)雜志，2002，17（5）：361-363.

[4] 譚建聰.重慶市部分高血壓患者內(nèi)皮型一氧化氮基因G894T多態(tài)性與相關(guān)危險(xiǎn)因素的研究[J].中華流行病學(xué)雜志，2004，25（2）：158-161.

[5] 陳麗娜.內(nèi)皮型一氧化氮基因G894T多態(tài)性與寧夏回族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28（7）：1107-1109.

[6] 梁榮.內(nèi)皮型一氧化氮基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系研究[J].天津醫(yī)藥，2012，40（10）：1015-1107.