復(fù)方霍山石斛含片增強(qiáng)免疫力功能的試驗(yàn)研究

吳文華 倪林英 陳鋒 鄭海磊 李濱

摘要 [目的]研究復(fù)方霍山石斛含片是否具有增強(qiáng)免疫力的作用。[方法]按《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》要求，分別對不同劑量組的小鼠進(jìn)行細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核—巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性的測定。[結(jié)果]細(xì)胞免疫功能和單核—巨噬細(xì)胞功能為陽性，體液免疫功能和NK細(xì)胞活性為陰性。[結(jié)論]復(fù)方霍山石斛含片具有增強(qiáng)免疫力的功能。

關(guān)鍵詞 霍山石斛;含片;小鼠;免疫力

中圖分類號 S567 ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A ?文章編號 0517-6611（2015）03-052-03

Research on Enhancing Immunity of the Tablet of Dendrobium huoshanense

WU Wenhua¹， NI Linying²， CHEN Feng²， LI Bin2* et al

（1. Anhui Center for Food and Drug Evaluation & Certification， Hefei， Anhui 230051; 2.Jiuxianzun Huoshan Dendrobium huoshanense Co. Ltd.， Luan， Anhui 237000）

Abstract [Objective] To study the effect of the tablet of Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng on the immune function of mice. [Method] According to demands of Technical Standards for Testing and Assessment of Health Food， cellular immune function， humoral immune function， mononuclear macrophage function and NK cell activity of mice in different dosage group were determined. [Result] The cellular immune function and mononuclear macrophage function is positive， humoral immune function and NK cell activity were negative. [Conclusion] The tablet could enhance immune function of mice.

Key words Dendrobium huoshanense; Tablet; Mice; Immunity

作者簡介 吳文華（1984- ），男，安徽巢湖人，主管藥師，碩士，從事食品監(jiān)督管理工作。*通訊作者，主管藥師，在讀碩士，從事制藥工程研究。

收稿日期 20141211

復(fù)方霍山石斛含片是以中藥霍山石斛、百合、玉竹三者提取物為主要原料，同時添加相關(guān)輔料制成的保健食品，所含生物活性物質(zhì)尤以石斛多糖、玉竹多糖、百合多糖具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。將三者進(jìn)行科學(xué)配伍后制成的復(fù)方霍山石斛含片，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》^[1]之增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)的要求，筆者在此對試驗(yàn)動物小鼠進(jìn)行細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核—巨噬細(xì)胞功能及NK細(xì)胞活性測定，研究復(fù)方霍山石斛含片是否具有增強(qiáng)小鼠免疫力的功能，為復(fù)方霍山石斛含片的推廣使用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 樣品 復(fù)方霍山石斛含片，規(guī)格0.8 g/片×40片/瓶，批號130208，由九仙尊霍山石斛股份有限公司提供，樣品形態(tài)為黃棕色至棕褐色片劑，密封置陰涼干燥處保存。樣品人體推薦劑量為3.2 g/（人·d）。

1.2 動物來源及分組 選擇購自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司繁殖的SPF級CI/F1代200只健康雌性小鼠，體重為19.0～21.9 g，試驗(yàn)小鼠生產(chǎn)許可證號為SCXK（滬）20080016，合格證號為2008001634291。試驗(yàn)動物房溫度為21～25 ℃、相對濕度為45%～70%，使用許可證號為SYXK（蘇）20120041。輻照滅菌飼料由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動物飼料科技有限公司提供，批準(zhǔn)文號為蘇飼審（2009）05032。

試驗(yàn)動物按體重隨機(jī)分為5個大組，每大組40只且分成4個劑量組，每個劑量組10只小鼠，其中第一大組動物測定ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和利用乳酸脫氫酶法測定NK細(xì)胞活性;第二大組動物利用耳廓腫脹法進(jìn)行DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng);第三大組動物進(jìn)行體液免疫功能檢測（抗體生成細(xì)胞檢測和血清溶血素測定）;第四大組動物進(jìn)行單核—巨噬細(xì)胞功能之碳廓清試驗(yàn);第五大組動物進(jìn)行單核—巨噬細(xì)胞功能之利用半體內(nèi)法進(jìn)行腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)。

1.3 劑量選擇與受試物給予方式 受試樣品的人體推薦劑量為3.2 g/（人·d）（以60 kg體重計），設(shè)分別相當(dāng)于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍的3個劑量組，即027、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）。另設(shè)對照組以無菌水代替受試物，即0 g/（kg·bw·d）。采用無菌水配制受試樣品，按高、中、低劑量分別配制濃度為160、53、27 mg/ml，每日一次經(jīng)口給予受試動物相應(yīng)劑量的受試物，小鼠灌胃量為0.1 ml/（10g·bw）。連續(xù)給藥一個月后按照參考文獻(xiàn)[1]檢測各項(xiàng)功能指標(biāo)。

2.3.1 復(fù)方霍山石斛含片對小鼠碳廓清能力的影響。

經(jīng)口給予小鼠不同劑量的復(fù)方霍山石斛含片一個月后，進(jìn)行小鼠碳廓清試驗(yàn)^[6]，計算吞噬指數(shù)a，并進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個試驗(yàn)組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理。由表5可知，1.60 g/（kg·bw·d）組小鼠吞噬指數(shù)高于0 g/（kg·bw·d）組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表5 復(fù)方霍山石斛含片對小鼠碳廓清能力的影響

劑量∥ g/（kg·bw·d）動物數(shù)∥只胸腺/體重∥%脾臟/體重

∥%吞噬指數(shù)aP值

0100.249±0.0430.447±0.0465.68±0.76

0.27100.258±0.0290.452±0.0516.05±0.890.631

0.53100.246±0.0200.411±0.0536.45±0.910.112

1.60100.251±0.0330.410±0.0556.71±0.730.023

2.3.2 復(fù)方霍山石斛含片對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響。

經(jīng)口給予小鼠不同劑量的復(fù)方霍山石斛含片30 d后，用半體內(nèi)法進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)，計算吞噬指數(shù)及吞噬百分率，并將吞噬百分率經(jīng)sin-1P1/2（P為吞噬百分率，用小數(shù)表示）轉(zhuǎn)化后進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊性要求后，用單因素方差分析方法中多個試驗(yàn)組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理。由表6可知，1.60 g/（kg·bw·d）組吞噬百分率及吞噬指數(shù)高于0 g/（kg·bw·d）組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表6 復(fù)方霍山石斛含片對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)的影響

劑量

g/（kg·bw·d）動物數(shù)

只吞噬百分率

%P值吞噬指數(shù)P值

01021.3±2.30.25±0.03

0.271022.4±2.40.5820.25±0.040.932

0.531023.5±2.80.1040.27±0.040.427

1.601026.1±1.90.0000.29±0.020.010

2.4 NK細(xì)胞活性測定

經(jīng)口給予小鼠不同劑量的復(fù)方霍山石斛含片30 d后，用乳酸脫氫酶測定法進(jìn)行小鼠NK細(xì)胞活性測定，將其經(jīng)sin-1P1/2（P為NK細(xì)胞活性，用小數(shù)表示）轉(zhuǎn)化后進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個試驗(yàn)組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理。由表7可見，0.27、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）組NK細(xì)胞活性與0 g/（kg·bw·d）組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

表7 復(fù)方霍山石斛含片對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

劑量

g/（kg·bw·d）動物數(shù)

只NK細(xì)胞活性

%P值

010 25.2±4.8

0.2710 25.4±6.81.000

0.5310 26.7±10.60.976

1.6010 28.0±8.40.789

3 小結(jié)

九仙尊牌清養(yǎng)含片以0.27、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）連續(xù)給樣30 d，按《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》要求，分別對不同劑量組的小鼠進(jìn)行細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性的測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復(fù)方霍山石斛含片增強(qiáng)免疫力功能之細(xì)胞免疫功能試驗(yàn)為陽性、復(fù)方霍山石斛含片增強(qiáng)免疫力功能之體液免疫功能試驗(yàn)為陰性、復(fù)方霍山石斛含片增強(qiáng)免疫力功能之單核-巨噬細(xì)胞功能試驗(yàn)為陽性、復(fù)方霍山石斛含片增強(qiáng)免疫力功能之NK細(xì)胞活性測定試驗(yàn)為陰性。

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》之增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)的結(jié)果判定，在細(xì)胞免疫功能（ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH）、體液免疫功能（抗體生成細(xì)胞檢測、血清溶血素測定）、單核-巨噬細(xì)胞功能（小鼠碳廓清、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞）、NK細(xì)胞活性4個方面任2個方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力作用。在該試驗(yàn)條件下復(fù)方霍山石斛含片具有增強(qiáng)免疫力功能。

參考文獻(xiàn)

[1] 衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范[M].北京：清華同方電子出版社，2003.

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[6] 秦光和，景簫，王偉，等.墨汁的注入途徑不同對小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)的影響[J].毒理學(xué)雜志，2007，21（1）：77-78.