郝海玉 任景樂(lè) （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所 266000）王善堂 阮國(guó)宏 宋曉娜 （國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系青島綜合試驗(yàn)站）

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種雞人工授精技術(shù)的操作方法及注意事項(xiàng)

郝海玉 任景樂(lè) （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所 266000）王善堂 阮國(guó)宏 宋曉娜 （國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系青島綜合試驗(yàn)站）

種雞人工授精操作技術(shù)主要包括種公雞挑選、種公雞訓(xùn)練、人工采精、精液管理、輸精操作、器具管理等。人工授精過(guò)程中主要必備器具包括保溫杯、溫度計(jì)、精液稀釋液、采精管、輸精槍或輸精管、毛巾、醫(yī)用棉、烤箱、溫水。

1 種公雞的挑選與訓(xùn)練

挑選健康、無(wú)垂直傳播性病原(雞白痢、禽白血病等)的公雞。在正式采精前一周對(duì)公雞進(jìn)行按摩訓(xùn)練，將性反射強(qiáng)、精液品質(zhì)好的公雞挑選出來(lái)。

2 人工采精

2.1 采精準(zhǔn)備 采精前2h停止喂料，以防采精時(shí)公雞拉出糞便。將保溫杯水溫調(diào)至39~40℃，精液稀釋液放入進(jìn)行預(yù)熱。

2.2 采精 采用背部按摩法采精。抓雞人員左手抓住公雞雙腿，右手手臂夾住公雞，使公雞尾尖朝上45度，臀部朝向采精人員；采精人員左手大拇指和其余4指自然分開(kāi)微彎曲，以掌面自公雞的腰背部向尾部輕快而有節(jié)奏地按摩1~2次，左手將尾羽撥向背側(cè)，并用拇指和食指向勃起的交配器輕輕擠壓，右手拇指和食指迅速跨掐在泄殖腔上兩側(cè)柔軟部位并將杯口迅速放在交配器下端承接精液。

2.3 采精注意事項(xiàng) （1）選取保溫性能好的保溫杯，保證水溫在0.5~1h之間降低不能超過(guò)1℃，以確保精液溫度從采出到點(diǎn)精的過(guò)程中始終保持在39~40℃之間。（2）抓雞人員動(dòng)作要輕而快，不能過(guò)于粗暴；采精人員輕撫雞背1~2次，速度適中，勿用力擠捏。（3）避免采到透明液和氣泡，采出的精液應(yīng)為乳白色，精液中不能含有血液、糞便、羽毛等污物。每只種公雞5d采精2~3次，采精不能過(guò)于頻繁，也不能長(zhǎng)時(shí)間不采。

3 精液管理

3.1 精液保存 38~40℃時(shí)精子的活力最高，在保證短時(shí)間內(nèi)輸完精液的前提下，在此溫度范圍內(nèi)，溫度越高，精子活力越強(qiáng)，因此，應(yīng)使水溫盡可能保持38-40℃，保證每管精液在采出后20min內(nèi)用完。

3.2 精液稀釋 精液與自配稀釋液(配方：100ml生理鹽水、5g分析純葡萄糖、1.5ml新鮮蛋黃液、2g頭孢噻肟鈉)按照1:1的比例均勻混合。也可以購(gòu)買(mǎi)質(zhì)量可靠的商品化稀釋液。稀釋過(guò)程中，用干凈的拇指堵住管口，采用“∞”式方法緩慢進(jìn)行搖勻，至少重復(fù)10次以上。

3.3 精液品質(zhì)測(cè)定 （1）精液理化指標(biāo)：精液為乳白色或淺灰色略帶腥味的粘稠狀液體，以pH計(jì)或pH試紙測(cè)量，正常范圍為7.0~7.8。各周齡種公雞精液活力等指標(biāo)參考標(biāo)準(zhǔn)。（2）精子活力檢測(cè)：在常規(guī)顯微鏡下觀察，按0.1~1.0范圍的10級(jí)評(píng)分法估計(jì)，鮮精活力要求不低于0.5，稀釋精液活力要求不低于0.4。檢查活力時(shí)要求載玻片和蓋玻片都應(yīng)預(yù)熱到37℃。使用精子檢測(cè)分析系統(tǒng)觀察時(shí)，要進(jìn)行高倍稀釋，一般根據(jù)分析軟件可計(jì)算程度進(jìn)行100-500倍稀釋。稀釋液使用生理鹽水，檢測(cè)的活力結(jié)果以百分?jǐn)?shù)出現(xiàn)，要求A+B級(jí)精子數(shù)不低于20%。（3）精子密度檢測(cè)：血細(xì)胞計(jì)數(shù)法 首先以微量加樣器取原精液20μL，用生理鹽水稀釋10倍；其次在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上放一蓋玻片，取1滴稀釋后精液置于計(jì)數(shù)板的槽中，靠虹吸作用將精液吸入計(jì)數(shù)室內(nèi)；最后在高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)的精子總數(shù)，將該數(shù)乘以500萬(wàn)，即得原精液每毫升的精子數(shù)(即精液密度)。①精子檢測(cè)分析系統(tǒng)測(cè)定法：用微量加樣器取原精液14μl，用生理鹽水稀釋500倍，混勻；再將稀釋精液滴于專用載玻片上，放置于分析系統(tǒng)的顯微鏡下點(diǎn)擊分析軟件計(jì)算視野中精子；以此方法連續(xù)計(jì)算載玻片上4角與中央5個(gè)視野，操作完畢后自動(dòng)顯示精子密度等相關(guān)精液指標(biāo)?；驹硗?xì)胞計(jì)數(shù)法，只是將其中的人工計(jì)數(shù)過(guò)程利用計(jì)算機(jī)捕捉精子圖像自動(dòng)計(jì)算所代替。②分光光度計(jì)法：分光光度計(jì)預(yù)熱20min，選定所需波長(zhǎng)470~570nm；根據(jù)精液對(duì)光的吸收情況，選擇合適的靈敏度，使吸光度讀數(shù)控制在0.2~0.7；輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí)，比色皿暗箱蓋是打開(kāi)的，光路被切斷，光電管不受光照影響)；將盛蒸餾水的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，將10倍稀釋的精液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100%，輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿，使稀釋精液進(jìn)入光路，此時(shí)表頭指針?biāo)緸榫旱奈舛華，根據(jù)公式計(jì)算精液密度。

4 輸精操作

4.1 輸精 翻肛員用右手握住母雞雙腿，稍提起，左手拇指和食指在腹部施以壓力，使輸卵管外翻。輸精員用輸精槍或輸精管吸取定量稀釋精液約0.04ml，沿輸卵管口中央進(jìn)入，感覺(jué)無(wú)阻力時(shí)輕輕插入2~3cm，輕輕下壓輸精槍或擠壓授精滴管，將精液輕輕擠出。同時(shí)翻肛人員立即解除左手對(duì)雞腹部的壓力，防止精液溢出。精液擠出后不要立即放開(kāi)擠壓，待拔出后再放松。拔出輸精槍或輸精滴管時(shí)，關(guān)注輸卵管回縮過(guò)程，避免帶出精液，若有精液，要重復(fù)輸一次。

附表 精子活力、密度等指標(biāo)

指標(biāo)精液量(ml)活力(A+B)密度(億個(gè)/ml)有效精子數(shù)(億) 22周齡0.42±0.1622.91±18.6378.00±44.699.18±9.60 27周齡0.42±0.1824.09±15.481.69±40.199.36±10.57 32周齡0.38±0.1319.99±14.2468.17±27.045.14±4.32 37周齡0.42±0.1818.75±13.3484.67±40.067.39±7.84 42周齡0.39±0.1815.90±12.8574.07±32.574.98±4.31 47周齡0.36±0.1215.38±11.5970.67±31.134.97±5.46 52周齡0.38±0.1314.85±9.1671.49±35.025.63±5.04 57周齡0.39±0.1515.76±11.5975.19±37.145.25±4.96

注：有效精子數(shù)=精液量×密度×活力

4.2 輸精注意事項(xiàng) （1）挑選健康、無(wú)垂直傳播性病原(雞白痢、禽白血病等)的產(chǎn)蛋母雞。在輸精前一周把不產(chǎn)蛋的母雞挑選出來(lái)淘汰或放到標(biāo)記的籠子中。（2）為減少母雞損傷，輸精時(shí)間應(yīng)在15:00~17:00點(diǎn)進(jìn)行。（3）嚴(yán)格遵循抓雞順序，防止漏抓、重抓。（4）抓雞人員動(dòng)作要穩(wěn)、準(zhǔn)、輕、快，防止動(dòng)作粗暴給雞帶來(lái)?yè)p傷。（5）翻肛前需用沾有消毒液的毛巾擦拭手，翻肛時(shí)用力不可過(guò)大或過(guò)小，以輸卵管口剛好露出泄殖腔為好；若發(fā)現(xiàn)輸卵管內(nèi)有未產(chǎn)出的雞蛋，可用手?jǐn)D壓出來(lái)，或做好標(biāo)記，待雞蛋產(chǎn)出后再輸精。當(dāng)天已授精的母雞勿再翻肛。（6）選用口徑適中、管口光滑的輸精管，以保證輸精量的準(zhǔn)確，并防止刮傷輸卵管、泄殖腔粘膜。（7）切勿反復(fù)吹吸精液，以免造成精子大量死亡，每輸完一只雞，都應(yīng)更換輸精槍頭或用醫(yī)用棉擦拭輸精管口。

5 器具管理

每次授精結(jié)束后，及時(shí)沖洗采精管、輸精管；沖洗干凈后在170℃下烘烤30min或煮沸30min，也可以用95%的酒精潤(rùn)洗后再用生理鹽水沖洗1~2次。滅菌后的采精管、輸精管應(yīng)在無(wú)菌條件下保存?zhèn)溆?。每次輸精結(jié)束后將輸精用的移液器調(diào)整至最大刻度，并每隔一個(gè)月安排專業(yè)人員對(duì)移液器進(jìn)行校準(zhǔn)。溫度計(jì)每月校正1次。

6 其他需要注意的事項(xiàng)

授精人員的技術(shù)水平直接影響到種公雞的射精量和精液品質(zhì)。挑選可靠的采精員，是人工授精工作開(kāi)展好壞的關(guān)鍵。授精員操作嫻熟，掌握采精、輸精技術(shù)和技巧，動(dòng)作要輕而敏捷，工作細(xì)致認(rèn)真，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，才能取得良好的授精效果。同一雞舍的人工授精人員、操作手法必須固定；采精、輸精應(yīng)有固定的日程、時(shí)間，更換人員、操作手法均會(huì)引起應(yīng)激，導(dǎo)致受精率下降。人工授精過(guò)程中授精人員要配合默契，以提高采精質(zhì)量和受精率。挑出的病殘雞身體狀況恢復(fù)正常后，繼續(xù)授精，連續(xù)授精兩次后放回大群中。

（2015–03–24）

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