藤黃健骨片對腎虛證和血瘀證動物模型的影響及其鎮(zhèn)痛作用

朱克儉 黃 敏 郭喜庚

（1湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院臨床藥理室，長沙410006；2湖南方盛制藥股份有限公司醫(yī)學部，長沙410205）

藤黃健骨片對腎虛證和血瘀證動物模型的影響及其鎮(zhèn)痛作用

朱克儉1黃 敏2*郭喜庚2

（1湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院臨床藥理室，長沙410006；2湖南方盛制藥股份有限公司醫(yī)學部，長沙410205）

目的觀察藤黃健骨片對腎虛證和血瘀證動物模型的影響及其鎮(zhèn)痛作用。方法小鼠腹腔注射氫化可的松制成腎虛證模型，隨機分為5組（模型組、仙靈骨葆膠囊組、藤黃健骨片低、中、高劑量組），連續(xù)給藥14天，觀察小鼠性腺和免疫功能的變化。大鼠皮下注射腎上腺素制成血瘀證模型，隨機分為6組（空白對照組、模型對照組、仙靈骨葆膠囊組、藤黃健骨片低、中、高劑量組），連續(xù)給藥7天，觀察大鼠血液流變學的變化。采用醋酸扭體和福爾馬林致痛兩種實驗方法評價藤黃健骨片的鎮(zhèn)痛作用。結果藤黃健骨片能顯著提高氫化可的松所致腎虛證動物模型的胸腺系數(shù)、睪丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指數(shù)α，改善血瘀證動物模型的血液流變學并降低其全血粘度和血漿粘度，明顯抑制由醋酸引起的小鼠扭體反應，對福爾馬林致小鼠疼痛的I相和II相反應均有較好的鎮(zhèn)痛作用（與模型組或空白組比較，均有顯著性差異，P＜0.05）。結論以“補腎、活血、止痛”立法組方用藥的藤黃健骨片對腎虛證和血瘀證動物模型具有顯著的改善作用，同時也具有較強的鎮(zhèn)痛作用，這從藥理效應的角度為藥物的功能主治提供了佐證，也為其臨床定位和合理應用提供了較好的現(xiàn)代藥理學依據(jù)。

藤黃健骨片；腎虛證；血瘀證；鎮(zhèn)痛作用；藥理學實驗；劉柏齡；骨痹

藤黃健骨片是國醫(yī)大師劉柏齡教授多年臨床經(jīng)驗總結研發(fā)而成的中藥復方制劑。本品用藥精煉，配伍得當，處方共由7味藥組成，重用熟地黃為君，滋陰補血，益精填髓；臣藥用肉蓯蓉、淫羊藿、骨碎補、鹿銜草，分別取其補腎陽、益精血、入腎生髓以治其本，祛風濕、通經(jīng)絡、強筋止痛以治其標，佐以雞血藤，補血、活血、通經(jīng)絡、強筋骨；使藥為萊菔子，消食、理氣，以防補而滋膩之弊。全方共奏補腎、活血、止痛之功。

藤黃健骨片臨床主要用于治療骨關節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）證屬腎虛血瘀證者，癥見病變部位的疼痛、僵硬、腫脹、無力、攣縮和功能障礙，嚴重影響患者的工作和生活質量。在肯定本品臨床療效的基礎上，為探討該藥的藥理作用，基于其“補腎、活血、止痛”的治則定位，分別采用兩種證候動物模型（腎虛證、血瘀證）和兩種鎮(zhèn)痛實驗方法（醋酸扭體、福爾馬林致痛），系統(tǒng)觀察和評價藤黃健骨片對腎虛證和血瘀證的改善作用及其鎮(zhèn)痛效應，現(xiàn)將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物藤黃健骨片處方由熟地黃、肉蓯蓉、淫羊藿、鹿銜草、骨碎補、雞血藤、萊菔子（炒）組成，由湖南方盛制藥股份有限公司提供，批號：20100303。陽性對照藥是仙靈骨葆膠囊，處方由淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、地黃、丹參、知母組成，貴州同濟堂制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：100215。

1.2 動物ICR系清潔級小鼠，雌雄各半，體重18～20 g；SD系清潔級大鼠，雌雄各半，體重180～200 g，合格證號：004202、004460、004532；均由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。

1.3 對腎虛證模型小鼠性腺及免疫功能的影響取ICR系清潔級雄性小鼠72只，體重（17.1±2.5）g，按體重隨機取12只為空白對照組，每天腹腔注射生理鹽水0.04 ml/只，其余小鼠每天腹腔注射5 mg/ml氫化可的松0.04 ml/只，連續(xù)7天，制成腎虛證模型。過程中小鼠死亡2只，剩余58只。剩余造模小鼠隨機分成5組，分別為模型組、仙靈骨葆膠囊組（陽性藥組）、藤黃健骨片低、中、高劑量組（試驗藥組）。按下表1劑量給小鼠灌胃給藥，每天1次，連續(xù)14天。于末次給藥后30 min，從尾靜脈注射一得閣墨汁（稀釋5倍）10 ml/kg。注射后1 min、5 min從眶后靜脈叢取血20 μl，溶于2 ml0.1%Na2CO3溶液中，搖勻，于680 nm處測定光密度。最后處死小鼠，分別稱取胸腺、肝、脾、睪丸重量，按下列公式計算胸腺指數(shù)、碳粒廓清指數(shù)K及校正指數(shù)α。胸腺指數(shù)=（胸腺重量（mg）÷體重（g））×10，K=（logOD1-logOD2）/（t2-t1），α=K-1/3×體重÷（肝重+脾重）。

1.4 對血瘀證模型大鼠血液流變學的影響取SD大鼠60只，雌雄各半，體重（204.8±19.8）g，隨機分成6組，分別為空白對照組、模型對照組、仙靈骨葆膠囊組（陽性藥組）、藤黃健骨片低、中、高劑量組（試驗藥組）。各組按表2劑量灌胃給予相應藥物7天后，除空白對照組動物外，其余動物于皮下注射腎上腺素（Adr）0.08 ml/100 g兩次，間隔4 h，在兩次注射Adr之間將大鼠浸入冰水內5 min，造成血瘀證模型，停食至次晨，剪開頸動脈采血測定血液流變學指標。

1.5 鎮(zhèn)痛作用

1.5.1 對醋酸扭體小鼠疼痛閾值的影響取ICR小鼠50只，雌雄各半，體重（19.1±0.75）g，按體重隨機分成5組，分別為空白對照組、嗎啡組、藤黃健骨片低、中、高劑量組（試驗藥組）。小鼠按下表3劑量給藥，1h后各小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1 ml/10 g，記錄5～15 min內的扭體次數(shù)。

1.5.2 對福爾馬林小鼠疼痛的影響［1］小鼠足底皮下注射福爾馬林引起的疼痛反應可分為兩個時相：0～10 min出現(xiàn)者為Ⅰ相（早期相）反應，10～60 min出現(xiàn)的反應為Ⅱ相（遲發(fā)相）反應。用微量注射器向動物足底皮下注射3%的福爾馬林溶液，30 μl/只，立即置入一懸掛在鐵架臺上的平底大玻璃容器內，容器下方置一傾斜30度左右的大鏡子，從鏡面觀察動物足部反應。足部反應分為4級：1級是舔、咬或抖足；2級是提足；3級是輕觸底面但不負重，行走時跛行；4級是正常負重，走動自如。以1級疼痛的出現(xiàn)時間（即潛伏期）和持續(xù)時間（即疼痛期）為疼痛指標進行統(tǒng)計，Ⅰ相反應的潛伏期從注射福爾馬林開始至舔、咬或抖足止；Ⅱ相反應的潛伏期從注射福爾馬林10 min后開始至舔、咬或抖足止。

分組給藥：取ICR小鼠50只，體重（16.5±1.5）g，雌雄各半，隨機分成5組，分別為：空白對照組、嗎啡組、藤黃健骨片低、中、高劑量組（試驗藥組），按表4劑量灌胃給藥1 h后，各小鼠足底注射3%福爾馬林30 μl/kg，記錄0～90 min內的疼痛狀況。

2 結果

2.1 藤黃健骨片對腎虛證模型的作用研究結果顯示，模型組動物在造模后普遍消瘦，毛發(fā)無光澤，倦怠少動，治療期間體重增長緩慢。由表1可見，與空白組比較，模型組小鼠的胸腺系數(shù)、睪丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指數(shù)α均明顯降低。與模型組比較，藤黃健骨片中、高劑量組小鼠的胸腺系數(shù)、睪丸重量、碳粒廓清K及校正指數(shù)α均顯著性升高。

表1 藤黃健骨片對腎虛證模型小鼠性腺及免疫功能的影響（）

表1 藤黃健骨片對腎虛證模型小鼠性腺及免疫功能的影響（）

注：與模型組比較，t檢驗，*P＜0.05，**P＜0.01

組別動物（只）劑量（g / k g）α空白組1 1 / 8 . 9 7 5 ± 1 . 4 3 8**1 . 4 1 ± 0 . 2 4 1 3 8 ± 2 8 0 . 1 6 9 ± 0 . 0 3 0陽性藥組1 0 0 . 8 1 . 7 1 ± 0 . 3 0*1 5 5 ± 2 1*0 . 1 8 8 ± 0 . 0 2 8*8 . 5 0 1 ± 1 . 2 5 0*睪丸重量（m g）K 1 6 9 ± 3 0**0 . 2 1 4 ± 0 . 0 3 5**模型組9 / 7 . 1 5 7 ± 1 . 4 0 9胸腺系數(shù)（m g / g）1 . 9 4 ± 0 . 3 8**試驗藥組1 1 1 . 7 1 . 6 4 ± 0 . 3 6 1 5 4 ± 2 3 0 . 1 8 0 ± 0 . 0 2 3 8 . 1 6 2 ± 1 . 0 0 4 1 0 3 . 4 1 . 7 2 ± 0 . 2 5*1 5 6 ± 3 5 0 . 1 8 2 ± 0 . 0 3 7 8 . 3 0 7 ± 1 . 3 2 6*1 1 6 . 8 1 . 8 5 ± 0 . 2 9**1 6 2 ± 3 7*0 . 1 9 2 ± 0 . 0 3 7*8 . 5 1 6 ± 1 . 5 0 0*

2.2 藤黃健骨片對血瘀證模型的作用實驗結果顯示，與空白對照組比較，血瘀證模型組動物的全血粘度、血漿粘度、紅細胞壓積均明顯升高。與血瘀證模型組比較，藤黃健骨片中、高劑量組血漿粘度顯著性減低，高劑量組全血粘度顯著性減低。

表2 藤黃健骨片對血瘀模型大鼠血液流變學的影響（，n=10）

表2 藤黃健骨片對血瘀模型大鼠血液流變學的影響（，n=10）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

全血粘度（S H R 1 0 -1）空白對照組/ 2 2 . 1 2 8 ± 2 . 9 2 4紅細胞壓積（%）4 7 . 7 ± 7 . 4 3 9血瘀模型組/ 2 5 . 1 8 2 ± 2 . 9 1 0*2 . 1 2 4 5 ± 0 . 2 5 8*5 4 . 5 ± 5 . 7 0 1*陽性藥組0 . 5 2 3 . 7 5 1 ± 3 . 9 9 7 1 . 8 9 2 7 ± 0 . 1 0 8*5 2 . 1 ± 3 . 7 5 5組別劑量（g / K g）血漿粘度（S H R 1 2 0 s -1）1 . 8 5 6 1 ± 0 . 1 6 2試驗藥組1 . 2 2 3 . 1 5 6 ± 2 . 2 1 5 1 . 9 2 0 6 ± 0 . 2 2 6 5 3 . 4 ± 5 . 2 5 3 2 . 4 2 2 . 7 0 8 ± 2 . 4 1 4 1 . 8 9 6 4 ± 0 . 1 2*5 1 . 6 ± 6 . 5 5 2 4 . 8 2 2 . 5 0 4 ± 2 . 3 7 0*1 . 8 7 8 4 ± 0 . 2 5*5 1 . 4 ± 2 . 6 7 5

2.3 藤黃健骨片鎮(zhèn)痛作用

2.3.1 對醋酸扭體小鼠疼痛閾值的影響實驗結果表明，與空白對照組比較，藤黃健骨片高劑量組小鼠扭體次數(shù)有顯著性差異，能明顯抑制由醋酸引起的小鼠扭體反應，表明藤黃健骨具有一定的鎮(zhèn)痛作用。

表3 藤黃健骨片對小鼠扭體反應的影響（，n=10）

表3 藤黃健骨片對小鼠扭體反應的影響（，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別劑量（g / k g）潛伏期空白對照組/ 1 5 8 . 3 ± 4 6 . 6抑制率（%）/嗎啡組0 . 0 0 5 3 1 7 . 5 ± 5 7 . 1**1 1 . 8 ± 5 . 4**5 9 . 6扭體次數(shù)2 8 . 9 ± 7 . 7試驗藥組1 . 7 2 0 2 . 4 ± 4 7 . 4*2 3 . 2 ± 4 . 2 1 9 . 7 3 . 4 2 2 4 . 6 ± 6 8 . 2*2 1 . 6 ± 7 . 9 2 5 . 2 6 . 8 2 4 5 . 8 ± 7 4 . 1**1 8 . 5 ± 9 . 0**3 6 . 0

2.3.2 對福爾馬林所致小鼠疼痛的影響研究結果表明，與空白對照組比較，藤黃健骨片高劑量組小鼠I相反應的疼痛期有顯著性差異，高劑量組小鼠II相反應的潛伏期和疼痛期均有顯著性差異，表明藤黃健骨片對福爾馬林致小鼠疼痛的I相反應和II相反應均有一定的鎮(zhèn)痛作用，即具有中樞與外周的雙重鎮(zhèn)痛作用。

表4 藤黃健骨片對小鼠足疼痛反應的影響（，n=10）

表4 藤黃健骨片對小鼠足疼痛反應的影響（，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別劑量（g / k g）空白對照組/ 3 6 . 9 ± 9 . 0 5 2 6 . 3 ± 1 6 9 . 3Ⅰ相疼痛反應（s）潛伏期疼痛期Ⅱ相疼痛反應（s）潛伏期疼痛期1 8 . 9 ± 2 . 2 1 3 8 . 4 ± 1 7 . 2嗎啡組0 . 0 0 5 7 5 . 6 ± 1 8 . 6**1 5 0 . 2 ± 5 5 . 0**2 5 . 8 ± 3 . 5*8 0 . 8 ± 2 0 . 1**試驗藥組1 . 7 2 0 . 3 ± 4 . 1 1 2 1 . 3 ± 3 7 . 2 3 7 . 2 ± 1 2 . 1 4 9 7 . 6 ± 1 2 1 . 7 3 . 4 2 1 . 0 ± 4 . 5 1 0 9 . 9 ± 4 4 . 0 4 4 . 1 ± 1 3 . 1 4 1 0 . 6 ± 1 2 8 . 4 6 . 8 2 1 . 4 ± 4 . 7 1 0 3 . 7 ± 4 3 . 9*4 9 . 4 ± 1 6 . 9*2 8 2 . 0 ± 7 0 . 3**

3 討論

骨關節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）是一種由多因素引起的關節(jié)軟骨變性、破壞及骨質增生為特點的慢性退行性關節(jié)疾病，屬于臨床常見病、多發(fā)病。本病病因尚不明確，其發(fā)生與年齡、肥胖、炎癥、創(chuàng)傷、遺傳因素等有關，發(fā)病以中老年人多見，其發(fā)病率隨年齡增長而增加，據(jù)X線普查數(shù)據(jù)，55歲以上發(fā)病率高達88%，女性多于男性［2］。本病最常見的臨床表現(xiàn)是疼痛，這也是導致患者就醫(yī)的主要原因之一；其他癥狀有關節(jié)腫脹、僵硬、攣縮、無力、功能障礙等，嚴重影響患者的生活質量。

本病屬于中醫(yī)學“骨痹”范疇。《素問·宣明五氣》《素問·陰陽應象大論》提出“藏真下于腎，腎藏骨髓之氣也”“腎主骨”，“腎主身之骨髓”。本病發(fā)病多因腎元虧虛、肝血不足、血脈瘀滯，致骨失所養(yǎng)，筋骨不堅，瘀血內阻或兼有外邪侵襲，經(jīng)脈痹阻。辨證以本虛標實為主，虛則補益，實則通達，治療總的組方原則是補腎活血、強筋健骨、舒筋活絡。

由于骨關節(jié)炎發(fā)病機制不清，故尚缺乏特異有效的治療方法。目前西醫(yī)臨床一線用藥多為非甾體抗炎藥（NSAIDs）和慢作用藥物，其對改善癥狀具有一定效果。尤其是NSAIDs，是重要的癥狀性治療用藥，對關節(jié)疼痛、腫脹、積液、活動障礙等有較好的治療效果，但其不良反應也很明顯，如消化道潰瘍和出血、腎功能損傷、中樞神經(jīng)癥狀、抗凝血、轉氨酶升高、過敏反應等［3］。在疾病的治療和藥物臨床應用過程中，中醫(yī)藥發(fā)揮著越來越大的作用。有循證醫(yī)學Meta分析結果表明［4-6］，中藥治療OA具有較好的認可度，其療效優(yōu)于NSAIDs，且安全性遠好于NSAIDs。

本研究為探索藤黃健骨片“補腎、活血、止痛”的現(xiàn)代藥理學內涵，選用了兩種證候模型和鎮(zhèn)痛作用實驗方法。研究結果表明，藤黃健骨片能顯著提高氫化可的松腎虛證模型小鼠的胸腺系數(shù)、睪丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指數(shù)α，改善腎上腺素血瘀證模型大鼠的血液流變學并降低其全血粘度和血漿粘度。同時，可明顯減少小鼠由醋酸引起的扭體次數(shù)、抑制扭體反應，對福爾馬林致小鼠疼痛的I相和II相反應均有較好的鎮(zhèn)痛作用，即具有中樞與外周的雙重鎮(zhèn)痛效應。藤黃健骨片作為名老中醫(yī)的臨證經(jīng)驗總結，早在20世紀80年代就有大樣本的臨床觀察數(shù)據(jù)表明其治療OA療效顯著（1000例），能明顯改善臨床癥狀，提高患者的生活質量［7］，近期臨床研究數(shù)據(jù)也佐證了這一點［8］。本項實驗研究從探索“補腎、活血、止痛”的藥理效應角度出發(fā)，驗證了藤黃健骨片對腎虛血瘀證的治療作用。

藤黃健骨片作為中藥復方制劑，因其組方配伍和藥效物質的復雜性，故通過本項實驗，把藤黃健骨片的理法方藥與現(xiàn)代藥理研究相結合，以表達出藤黃健骨片以“補腎活血”立法的方藥及其作用機理對骨關節(jié)炎腎虛血瘀證的綜合效應，為藥物的臨床定位和科學合理使用提供確切的實驗數(shù)據(jù)支持。

［1］陳旭，楊勇，劉慧，等.預先鞘內注射氯諾昔康對福爾馬林致痛大鼠行為學及脊髓c-Fos蛋白表達的影響［J］.四川大學學報（醫(yī)學版），2008，39（1）：89-93.

［2］中國中西醫(yī)結合學會風濕病專業(yè)委員會.骨關節(jié)炎中西醫(yī)結合診療指南［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（6）：150-155.

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［4］曹月龍，高寧陽，龐堅，等（節(jié)譯）.國際骨關節(jié)炎研究學會髖與膝骨關節(jié)炎治療指南·第一部分：對現(xiàn)有治療指南的嚴格評價及對近期研究依據(jù)的系統(tǒng)回顧［J］.國際骨科學雜志，2009，30（3）：138-143.

［5］唐萌芽，翁祝承，邵利芳.中藥治療膝骨關節(jié)炎臨床療效和安全性的系統(tǒng)評價［J］.中醫(yī)正骨，2014，26（1）：43-47.

［6］康杰，李寧，吳濱.膝骨關節(jié)炎的治療措施：隨機對照試驗及系統(tǒng)評價分析［J］.中國臨床康復，2005，30（9）：27-30.

［7］劉柏齡.退行性脊椎炎1000例臨床分析［J］.遼寧中醫(yī)雜志，1982，9（3）：40-41.

［8］張波，盧敏，唐盾.藤黃健骨片、玻璃酸鈉聯(lián)用與單用玻璃酸鈉治療骨性關節(jié)療效比較［J］.藥物與臨床，2010，17（6）：67-68.

The Effect of Tenghuang Jiangu Tablet on the Animal Model of Kidney Deficiency Syndrome and Blood Stasis Syndrome and Its Analgesic Effect

ZHU Kejian1，HUANGMin2*，GUOXigeng2
（1.Department of ClinicalPharmacology，AffiliatedHospitalof HunanAcademyof ChineseMedicine，Changsha410006，China；2.Medicaldepartment，HunanFangshengPharmaceuticalco.，LTD，Changsha410205，China）

Objective To observe the influence of Tenghuang Jiangu tablet on the animal model of kidney deficiency syndrome and blood stasis syndrome and its analgesic effect.Methods The mouse model of kidney deficiency syndrome was formed by intraperitoneal injection of hydrocortisone.The mice were randomly divided into model group，Xianling Gubao capsule group，groups with low，middle and high dosages of Tenghuang Jiangu tablet，and the perfusion course was 14 days.The gonad and immunologic functions were detected and observed.The rat model of blood stasis syndrome was formed by subcutaneous injection of epinephrine.The rats were randomly divided into blank group，model group，Xianling Gubao capsule group，groups with low，middle and high dosages of Tenghuang jiangu tablet，and the perfusion course was 7 days.The hemorheology indexes were detected and observed.The analgesic effect of Tenghuang Jiangu tablet was evaluated by the experiment methods of acetate torsion body and faure marin.Results The Tenghuang Jiangu tablet can enhance thymus coefficient，testicular weight，carbon clearance K and correction index α of kidney deficiency syndrome model，can improve blood rheology and reduce whole blood viscosity and plasma viscosity of blood stasis syndrome model，can inhibit acetate body torsion reactions，and then can inhibit I phase and II phase pain reaction by faure marin.There were significant differences between in Tenghuang Jiangu tablet group and model group or blank group（P＜0.05）.Conclusion Jinying capsule have the effect on bacteriostatic and uterine inflammation and endometrial adhesion，and can reduce the uterine pathological changes，promote inflammation restoration，and keep uterine cavity unobstructed.

Tenghuang Jiangu tablet；kidney deficiency syndrome；blood stasis syndrome；analgesic effect；pharmacology experiment；Liu Bailing；bone bi-disease

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.15.071

1672-2779（2015）-15-0139-03

：張文娟本文校對：郭喜庚

2015-06-19）

*通訊作者：hminykjie@163.com