鳳臺縣主要蔬菜病毒的dot—ELISA檢測研究

田學(xué)飛++江彤++許起言

摘要 利用dot-ELISA法檢測了安徽省鳳臺縣蔬菜產(chǎn)區(qū)茄科、葫蘆科和豆科蔬菜中5種主要病毒（TSWV、TMV、CMV、CGMMV和BBWV）的帶毒率，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5種病毒的帶毒率分別為1.52%、13.64%、31.89%、54.32%和20.39%。CMV與CGMMV和BBWV分別存在復(fù)合侵染現(xiàn)象，復(fù)合侵染率分別為29.63%和50.00%。另外，辣椒、瓜類和豇豆帶毒率較高，菜豆未檢出病毒。本研究結(jié)果可為鳳臺縣蔬菜主要病毒病的綜合防治提供重要的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 蔬菜病毒；dot-ELISA；檢測；安徽鳳臺

中圖分類號 S436.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）17-0149-02

Study on Dot-ELISA Detection of Major Viruses on Vegetables in Fengtai County

TIAN Xue-fei 1 JIANG Tong 2 XU Qi-yan 1 *

（1 Fengtai Vegetable Production and Marketing Office，F(xiàn)engtai Anhui 232100； 2 School of Plant Protection，Anhui Agricultural University）

Abstract Five major viruses（TSWV，TMV，CMV，CGMMV and BBWV）infecting Solanaceae，Cucurbitaceae and Leguminosae vegetables in Fengtai County were detected by dot-ELISA.The results demonstrated that the positive rate of 5 viruses was 1.52%，13.64%，31.89%，54.32% and 20.39% respectively.It could be found that the phenomen of CMV and CGMMV，CMV and BBWV complex infection occurred in the vegetable fields，and the rates of complex infection are 29.63% and 50.00%.Moreover，virus-carrying rates of pepper，melon and asparagus bean are relatively high，and virus could not be detected in bean.This reseach will provide important theoretical basis for integrate control of major virus diseases of vegetables in Fengtai County.

Key words virus in vegetables；dot-ELISA；detection；Fengtai Anhui

侵染各類蔬菜的植物病毒種類繁多，主要有番茄斑萎病毒（TSWV）、煙草花葉病毒（TMV）、黃瓜花葉病毒（CMV）、黃瓜綠斑駁花葉病毒（CGMMV）和菜豆萎蔫病毒（BBWV）等[1-2]。蔬菜病毒病的癥狀有蕨葉、明脈、矮化、黃化、壞死、畸形等[3-4]。一種病毒可以侵染多種蔬菜，多種病毒也可復(fù)合侵染一種蔬菜[5]。蔬菜生產(chǎn)中，無論是露天種植還是大棚栽培，因受病毒危害造成的減產(chǎn)減收，甚至絕收現(xiàn)象普遍發(fā)生，在防治過程中盡管多方采取措施，還是收效甚微[6-7]。

近幾年，由于鳳臺縣蔬菜種植結(jié)構(gòu)調(diào)整、氣候條件變化和栽培管理粗放等，鳳臺縣主要蔬菜辣椒、番茄、黃瓜、酥瓜、豇豆等病毒病發(fā)生極其嚴重，給鳳臺縣蔬菜生產(chǎn)造成巨大損失，影響了該縣“菜籃子”工程建設(shè)。因此，熟悉病毒病的特性、了解病毒病的規(guī)律，對于防治十分必要[8]。而目前鳳臺縣蔬菜病毒種類、病毒的變異、發(fā)生與分布、病害循環(huán)和流行規(guī)律等缺乏系統(tǒng)研究，特別是主要蔬菜病毒種類不清、發(fā)生分布與流行規(guī)律不明，造成蔬菜病毒病的防治工作非常被動，無法根據(jù)鳳臺縣蔬菜產(chǎn)區(qū)的實際情況因地制宜地制定有效的防控措施。因此選擇茄科的辣椒、番茄等，葫蘆科的黃瓜等，豆科蔬菜的菜豆等，普查嚴重威脅鳳臺縣主要蔬菜生產(chǎn)的5種代表性病毒，從源頭上進行技術(shù)創(chuàng)新，為建立鳳臺蔬菜病毒病綜合防控技術(shù)體系奠定基礎(chǔ)，可望對鳳臺乃至安徽省蔬菜產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣本來源。蔬菜樣本采自鳳臺縣關(guān)店、丁集和桂集3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)蔬菜集中種植區(qū)的茄科、葫蘆科和豆科蔬菜。每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)選定2塊田，每個田塊之間的距離1 000 m以上。采取雙對角線五點取樣法，每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)每種蔬菜每塊田的樣品采集總量為10個以上。

1.1.2 試劑。硝酸纖維素膜購自Amersham 公司；5種病毒TSWV、TMV、CMV、CGMMV和BBWV的抗血清由浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所惠贈；HRP-羊抗鼠IgG購自武漢博士德生物工程有限公司；顯色液購自Promega公司；96孔酶標板購自美國Corning公司；其他試劑均為購自國藥生物公司的分析純。

1.2 試驗方法

稱取0.1 g植物葉片，按重量體積比1∶10（g/mL）加入0.01 mol/L PBS研磨；12 000 r/min離心3 min；取1 μL上清液點到硝酸纖維素膜上，室溫干燥10 min；將膜浸入封閉緩沖液稀釋的一抗血清中，37 ℃孵育30～60 min；洗膜3～4次，再將膜轉(zhuǎn)入封閉緩沖液稀釋的二抗血清中，37 ℃孵育60 min；洗膜5～6次，膜用濾紙吸干，放在培養(yǎng)皿底部，滴加顯色液顯色，拍照統(tǒng)計結(jié)果。endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 主要蔬菜病毒病發(fā)病率

從表1可以看出，關(guān)店、丁集和桂集3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的蔬菜病毒病發(fā)生較為普遍，辣椒、番茄、黃瓜和豇豆的發(fā)病率較高，達10%～30%，南瓜的發(fā)病率較低，菜豆的發(fā)病率為0。

2.2 病毒dot-ELISA檢測結(jié)果

dot-ELISA檢測結(jié)果顯示（表2），TMV、TSWV、BBWV、CMV和CGMMV的帶毒率分別為13.64%、1.52%、20.39%、31.89%和54.32%。

2.3 蔬菜病毒復(fù)合侵染分析

從表3可以看出，CMV和CGMMV及CMV和BBWV均存在復(fù)合侵染現(xiàn)象，復(fù)合侵染率分別為29.63%和50.00%。

2.4 主要蔬菜帶毒率

鳳臺縣主要蔬菜為辣椒、番茄、黃瓜、南瓜、菜豆和豇豆等。從表4可以看出，辣椒樣本TMV、TSWV、BBWV和CMV的帶毒率分別為35.14%、0、0和2.70%，番茄樣本TMV、TSWV、BBWV和CMV的帶毒率分別為0、3.70%、0和0，黃瓜樣本CMV和CGMMV的帶毒率分別為82.00%和75.00%，南瓜樣本CMV和CGMMV的帶毒率分別為60.00%和34.50%，菜豆樣本BBWV和CMV的平均帶毒率分別為16.00%和0，豇豆樣本BBWV和CMV的帶毒率分別為80.77%和73.08%。

3 結(jié)論與討論

本研究普查了鳳臺縣主要蔬菜病毒病發(fā)病率，發(fā)現(xiàn)3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的蔬菜病毒病發(fā)生較為普遍，辣椒、番茄、黃瓜和豇豆的發(fā)病率較高，南瓜發(fā)病率較低，菜豆未檢出病毒。血清學(xué)方法檢測了鳳臺縣蔬菜樣本中5種病毒TMV、TSWV、BBWV、CMV和CGMMV的帶毒率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CGMMV的帶毒率最高，說明CGMMV的發(fā)生非常普遍，為鳳臺縣蔬菜主要病毒，采樣時發(fā)現(xiàn)有黃瓜地嚴重受害，大部分植株表現(xiàn)出花葉癥狀。TSWV的帶毒率最低，說明TSWV發(fā)生較少，為鳳臺蔬菜次要病毒。另外，CMV與CGMMV和BBWV均存在復(fù)合侵染現(xiàn)象，復(fù)合侵染發(fā)生頻繁。

從鳳臺縣主要蔬菜帶毒率可以看出，辣椒、瓜類和豇豆帶毒率較高，與高發(fā)病率有一定的相關(guān)性。但番茄帶毒率很低，與高發(fā)病率差異較大，可能是大部分番茄發(fā)病為番茄黃化曲葉病毒（TYLCV）侵染，本次試驗沒有檢測。

由于鳳臺縣蔬菜種植結(jié)構(gòu)調(diào)整、氣候條件變化和栽培管理粗放型，導(dǎo)致鳳臺縣蔬菜病毒病的發(fā)生越來越嚴重。因此，本研究提供了鳳臺縣蔬菜產(chǎn)區(qū)病毒分布特點和發(fā)病情況，為鳳臺縣蔬菜產(chǎn)業(yè)穩(wěn)定發(fā)展的技術(shù)保障，也為建立鳳臺縣蔬菜病毒病綜合防控技術(shù)體系奠定了基礎(chǔ)。應(yīng)因地制宜采取“預(yù)防為主，綜合防治”的可持續(xù)發(fā)展方針和策略，科學(xué)管理和控制鳳臺縣蔬菜病毒病的發(fā)生和危害。

4 參考文獻

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