冬凌草甲素固體分散體的制備及溶出度測定

張慶明，徐云燕，張 平，蘇 華

0 引 言

溶解度影響藥物的生物利用度，固體分散體技術(shù)是一種能增加藥物溶解度、溶出速率和生物利用度的有效方法［1-2］，有熔融法、溶劑蒸發(fā)法、溶劑-熔融法、超臨界 CO2萃取法等［3-6］。

冬凌草甲素是從冬凌草中提取的一種二萜化合物，具有免疫增強(qiáng)、抗菌消炎、抗腫瘤等作用［7-10］，但由于水溶性差、生物利用度低、體內(nèi)代謝速度快，使其臨床應(yīng)用和推廣受到限制［11-12］。目前對增加冬凌草甲素溶解度的相關(guān)研究較少，本文采用溶劑蒸發(fā)法，以泊洛沙姆為載體制備冬凌草甲素-泊洛沙姆固體分散體，將藥物高度分散在泊洛沙姆載體中，提高冬凌草甲素的體外溶解度和溶出度，進(jìn)而為提高冬凌草甲素的生物利用度打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，ZRS-8G智能溶出儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);DSC 204 HP phoenix差示掃描量熱儀(美國Philips公司);XRD-6100 X射線衍射儀(日本島津);BS21S Sartorius電子天平(德國賽多利斯集團(tuán))。

冬凌草甲素對照品(河南濟(jì)世藥業(yè)，批號20140301，含量99.5%);冬凌草甲素原料藥(河南濟(jì)世藥業(yè)，批號20140501，含量98.7%);泊洛沙姆188(德國巴斯夫);甲醇(色譜純，美國Merk公司);其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

2.1.1 冬凌草甲素固體分散體的制備 取冬凌草甲素0.5g，用適量乙醇溶解后，加入泊洛沙姆1.5g，攪拌至溶解，40℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，置-20℃環(huán)境中冷卻固化0.5 h，40℃真空干燥12 h后，研磨粉碎過60目篩得冬凌草甲素固體分散體。

2.1.2 物理混合物的制備 取冬凌草甲素0.5 g，泊洛沙姆1.5 g混合均勻后過60目篩即得。

2.2 冬凌草甲素固體分散體的鑒別

2.2.1 差示掃描量熱儀分析 分別稱取冬凌草甲素、泊洛沙姆、物理混合物和固體分散體適量，掃描溫度范圍40～350℃，升溫速率10℃/min，掃描環(huán)境為N2，冬凌草甲素和泊洛沙姆在225℃和55℃有吸熱峰分別為它們的熔點(diǎn)，物理混合物中這2個吸熱峰均存在，而在固體分散體中，冬凌草甲素的特征吸收峰消失，表明冬凌草甲素可能以無定形態(tài)分散在泊洛沙姆中。見圖1。

2.2.2 X-射線粉末衍射分析 分析條件為，Cu石墨靶單色器，管流強(qiáng)度40 mA，高壓強(qiáng)度40 kV，范圍0°～40°(2θ)，步長0.04°，頻率 0.04°/s。冬凌草甲素原料藥呈結(jié)晶結(jié)構(gòu)，物理混合物中冬凌草甲素的特征峰均存在，而固體分散體中冬凌草甲素的特征峰均消失。說明冬凌草甲素分散在泊洛沙姆中，失去了原有的晶型結(jié)構(gòu)，與差示掃描量熱儀分析結(jié)果一致。見圖2。

圖1 差示熱量掃描圖譜Figure 1 DSC thermograms

圖2 粉末X-射線衍射圖譜Figure 2 Powder X-ray diffraction spectra

2.3 冬凌草甲素固體分散體的體外溶出研究

2.3.1 色譜條件 色譜柱Thermo C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇/水(50/50);流速 1.0 mL/min;檢測波長236 nm;柱溫30℃;進(jìn)樣體積20 μL，分別取空白溶液、冬凌草甲素對照品溶液和樣品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3。

圖3 高效液相色譜圖Figure 3 HPLC chromatograms

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取冬凌草甲素對照品25.0 mg置100 mL量瓶中，加甲醇15 mL溶解后，用水定容至刻度搖勻。分別精密量取上述溶液適量置50mL量瓶中加水定容配制成濃度為1、3、5、7、10、20、25 μg/mL 濃度樣品搖勻，分別進(jìn)樣 20 μL，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:

A=39058C-1755(r=0.9998)

結(jié)果表明，冬凌草甲素濃度在1～25 μg/mL的范圍，線性關(guān)系良好。

2.4 進(jìn)樣精密度實驗 取“2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項下濃度為5、10、25 μg/mL的對照品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣5次計算冬凌草甲素的進(jìn)樣精密度，低、中、高濃度的精密度分別為 1.52%、0.85%、0.47%，RSD均＜2%，方法精密度良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性實驗 按“2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項下配制濃度為20 μg/mL的冬凌草甲素對照品溶液，并于0、2、4、6、8、12、24h 分別進(jìn)樣20μL，記錄其峰面積，計算RSD值，考察冬凌草甲素在溶液中的穩(wěn)定性，結(jié)果RSD=1.1%，表明冬凌草甲素在溶液中12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 回收率實驗 分別精密稱取冬凌草甲素對照品16.0、20.0 和24.0 mg與相應(yīng)比例的泊洛沙姆混合均勻。然后分別精密稱取上述混合物適量各3份，置100 mL量瓶中，加甲醇15 mL溶解，后用水定容，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜濾過。低、中、高3種濃度下冬凌草甲素的回收率分別為99.1%、100.5%、99.5%，RSD=1.3%(n=9)，回收率良好。

2.7 溶出度測定 分別測定原料藥、物理混合物和冬凌草甲素固體分散體(均含冬凌草甲素20 mg)的溶出度。分別以900 mL水、pH6.8磷酸鹽緩沖液和pH1.2鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，溫度為(37±0.5)℃，于5、10、15、20、30、45、60 min 時，分別取溶液 5 mL經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣 20 μL，記錄峰面積，計算累計溶出度。結(jié)果見表1、表2、表3。

表1 原料藥在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出度(±s，n=6)Table 1 Results of API dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

表1 原料藥在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出度(±s，n=6)Table 1 Results of API dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

時間(min) 原料藥平均累積溶出度(%)水 pH6.8磷酸鹽緩沖液 pH1.2鹽酸溶液5.4 ±3.1 11.2 ±2.6 16.6 ±3.5 10 14.2 ±2.1 19.3 ±2.2 25.5 ±3.1 15 21.6 ±2.6 27.8 ±3.1 32.1 ±4.2 20 28.3 ±2.8 30.3 ±3.5 44.4 ±4.6 30 29.4 ±4.0 35.4 ±4.2 56.5 ±5.4 45 32.9 ±3.6 41.2 ±3.3 58.3 ±4.2 5 60 33.4 ±2.9 43.3 ±3.3 62.6 ±2.9

表2 物理混合物在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出度(±s，n=6)Table 2 Results of physical mixture dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

表2 物理混合物在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出度(±s，n=6)Table 2 Results of physical mixture dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

時間(min) 物理混合物平均累積溶出度(%)水 pH6.8磷酸鹽緩沖液 pH1.2鹽酸溶液9.6 ±4.0 13.1 ±3.6 15.2 ±2.5 10 18.2 ±3.5 21.3 ±3.1 28.5 ±3.5 15 24.6 ±3.2 30.8 ±4.1 35.5 ±4.5 20 29.3 ±3.8 42.3 ±4.1 47.4 ±3.6 30 32.4 ±3.5 45.4 ±4.0 60.5 ±4.4 45 37.9.±4.2 49.7 ±5.3 67.3 ±3.2 5 60 37.4 ±3.9 51.3 ±5.9 68.4 ±3.9

表3 固體分散體在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出度(±s，n=6)Table 3 Results of solid dispersion dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

表3 固體分散體在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出度(±s，n=6)Table 3 Results of solid dispersion dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

時間(min) 固體分散體平均累積溶出度(%)水 pH6.8磷酸鹽緩沖液 pH1.2鹽酸溶液37.2 ±5.1 33.1 ±2.9 35.2 ±4.5 10 49.8 ±3.7 47.6 ±4.5 48.8 ±5.5 15 67.5 ±4.1 64.2 ±3.8 65.2 ±3.5 20 78.4 ±5.0 75.4 ±4.5 74.4 ±5.6 30 88.5 ±5.4 90.5 ±3.8 91.5 ±3.4 45 90.0 ±4.4 92.6 ±4.2 93.0 ±3.2 5 60 92.6 ±4.2 93.1 ±3.5 94.4 ±2.9

3 討 論

泊洛沙姆為聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，由于其對難溶性藥物具有良好的潤濕和增溶效果，被廣泛用于傳遞藥物的載體［13-15］。本文以泊洛沙姆為載體，在前期試驗中，以不同比例的冬凌草甲素:泊洛沙姆制備固體分散體，結(jié)果表明，隨著泊洛沙姆量的增加，冬凌草甲素的溶解度隨著增加，綜合考慮載藥量，最終選擇比例為1∶3。

本文制備的冬凌草甲素固體分散體經(jīng)差示掃描量熱儀和P-XRD實驗表明，原料藥從結(jié)晶狀態(tài)變成以無定型狀態(tài)分散在泊洛沙姆中，為增加藥物的溶解度和藥物的吸收奠定了基礎(chǔ)［16］。

本研究建立了冬凌草甲素的體外溶出度測定方法。結(jié)果表明，該方法簡單，能夠準(zhǔn)確測定冬凌草甲素在溶出介質(zhì)中的溶出度。經(jīng)體外溶出實驗表明，冬凌草甲素、物理混合物均在pH1.2鹽酸溶液介質(zhì)中的累積溶出度最高，固體分散體在3種溶出介質(zhì)中的累積溶出度均＞90%。表明冬凌草甲素及其混合物的溶出受溶出介質(zhì)的pH影響，在酸性條件下溶出度高于堿性條件。而冬凌草甲素固體分散體的溶出不受介質(zhì)pH的影響，且在3種介質(zhì)中溶出度均＞原料藥和物理混合物。

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