黃文武

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烏梅丸熏洗聯(lián)合肛周皮下游離術(shù)對(duì)肛門瘙癢癥患者PAR-2靶點(diǎn)的研究

黃文武

（井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院肛腸科，江西，吉安 343000）

目的 通過研究治療組（烏梅丸熏洗聯(lián)合肛周皮下游離術(shù)）針對(duì)肛門瘙癢癥皮損PAR-2（蛋白酶活化受體-2）的表達(dá)量，從而客觀評(píng)價(jià)本方案的治療效果。方法 選擇2013年1月至2014年10月肛門瘙癢癥術(shù)后患者，隨機(jī)分為治療組20例、對(duì)照組20例、空白組10例。取術(shù)后三組第1、3、7 d的肛周皮損皮膚，采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)PAR-2編碼基因的表達(dá)量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 治療組術(shù)后第1、3、7 d較對(duì)照組及空白組的表達(dá)量明顯下降，且有顯著性差異（< 0.05）。結(jié)論 烏梅丸聯(lián)合肛周皮下游離術(shù)對(duì)肛門瘙癢癥有良好的治療效果。

PAR-2；肛門瘙癢癥；烏梅丸熏洗；肛周皮下游離術(shù)

肛門瘙癢癥是局限性神經(jīng)機(jī)能障礙性皮膚病，具有病程長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)；它能引起強(qiáng)烈地搔抓欲望，嚴(yán)重影響患者睡眠，從而主觀搔抓欲望更強(qiáng)，形成惡性循環(huán)，嚴(yán)重的搔抓引起繼發(fā)性皮膚損害，如癢疹、濕疹和苔蘚樣改變[1]。因此，對(duì)肛門瘙癢癥的研究刻不容緩。本研究旨在從現(xiàn)代分子生物學(xué)方面來探討此疾病的機(jī)理，最新研究明確表明，肛門瘙癢癥患者皮損組織中PAR-2表達(dá)對(duì)本病致炎、致癢具有重要作用[2]。通過觀察肛門瘙癢癥患者經(jīng)烏梅丸熏洗聯(lián)合肛周皮下游離術(shù)治療后第1、3、7 d肛周皮損中PAR-2的表達(dá)，客觀評(píng)價(jià)本治療方案對(duì)肛門瘙癢癥患者致敏皮膚PAR-2表達(dá)的影響，為此提供客觀依據(jù)，以期為臨床治療肛門瘙癢癥提供切實(shí)可行、便于推廣、安全有效的臨床治療方法。

1 研究方法

1.1 收集樣本

(1)病例來源：患者主要來源于井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院2013年1月至2014年10月收治的肛門瘙癢癥患者的住院病人，共收集50例。參照《安德魯斯臨床皮膚病學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)。(2)觀察方法：隨機(jī)分組方法：將全部入選患者按就診順序編號(hào)，采用SPSS軟件進(jìn)行隨機(jī)化分配，依次裝入隨機(jī)信件分配治療，并作登記。在分組時(shí)保證將各組患者年齡、性別、病程等的均衡性，并注意各中心試驗(yàn)組間的均衡性。

1.2 技術(shù)方法

肛門瘙癢癥符合納入標(biāo)準(zhǔn)患者進(jìn)行分組，隨機(jī)分為治療組20例、對(duì)照組20例、空白組10例，所有納入患者均行肛周皮下游離手術(shù)。 (1)治療組：于術(shù)后第1 d開始使用烏梅丸（藥物組成：烏梅30 g，細(xì)辛15 g，干姜10 g，黃連10 g，當(dāng)歸10 g，制附片10 g，蜀椒30 g，桂枝10 g，人參5 g，黃柏20 g），上述中藥由井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供，每天1劑，水煎兩次，每次用清水2000 mL浸泡半小時(shí)，煎1 h，煎后量約1000 mL，2煎兌勻，存入保溫瓶中，分早晚兩次用（每次大便后加坐浴1次），水溫控制在39~43℃，每次熏蒸5 min后坐浴10~15 min[4]。(2)對(duì)照組：手術(shù)后第1d用1/5000高錳酸鉀液熏洗，配比成1/5000濃度高錳酸鉀1000 mL溶液，進(jìn)行坐浴，早晚兩次（每次大便后加坐浴1次）每次熏蒸5 min后坐浴10~15 min。(3)空白組：肛周皮下游離術(shù)后不予任何藥物治療；治療組與對(duì)照組術(shù)后均連用7 d后停藥。(4)肛周皮下游離術(shù)：常規(guī)碘伏消毒鋪巾，以2%利多卡因20 mL加0.9%NS20 mL分別在12、3、6、9點(diǎn)呈扇形肛周皮下菱形浸潤(rùn)，麻醉生效后，于肛門前后距肛緣1.5 cm各做一縱行切口，用手術(shù)剪從前、后方切口進(jìn)入，緊靠皮下圍繞肛周做銳性游離，離斷皮下神經(jīng)末梢[3]。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)

(1)取材及病理學(xué)觀察：標(biāo)本采集及制備方法：肛門瘙癢癥患者術(shù)后第1、3、7 d肛周皮損皮膚，每天同一時(shí)段以4 mm環(huán)鉆在上述時(shí)相切取患者肛周皮損的皮膚，放入事先準(zhǔn)備好的專用epp管中，并做好編號(hào)以示區(qū)別，迅速放入液氮罐內(nèi)，以防創(chuàng)面組織中DNA變性，待測(cè)PAR-2表達(dá)量。(2)PAR-2含量和檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)PAR-2編碼基因的表達(dá)，取術(shù)后第1、3、7 d的肛周皮損皮膚，根據(jù)RT-PCR試劑盒、總RNA提取試劑盒說明提取組織中mRNA，然后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR擴(kuò)增PAR-2。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

(1)應(yīng)用Microsoft Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù)，用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。(2)比較三組指標(biāo)，定性資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，定量資料進(jìn)行檢驗(yàn)，得出結(jié)論，< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

(2)效果標(biāo)準(zhǔn)：治療組術(shù)后第1、3、7 d患者皮損部位中PAR-2染色的平均吸光度較對(duì)照組及空白組第1、3、7 d PAR-2染色的平均吸光度顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（< 0.01），提示肛周皮下游離聯(lián)合烏梅丸熏洗能明顯抑制肛門瘙癢癥患者皮損部位PAR-2表達(dá)。

2 結(jié)果

顯示治療組術(shù)后第1、3 d皮損部位的PAR-2表達(dá)量明顯低于對(duì)照組及空白組< 0.05(有顯著性差異)；治療組術(shù)后第7 d和對(duì)照組及空白組的術(shù)后第7 d比較：= 0.000 < 0.01(有非常顯著性差異)。結(jié)果見表1。

表1 三組肛周皮損皮膚中PAR-2表達(dá)(± s )

Table 1 The expression of PAR-2 in wound surface tissue after anal fistula operation

表1 三組肛周皮損皮膚中PAR-2表達(dá)(± s )

組別 例數(shù)(50)不同時(shí)相PAR-2▲ P值 平均表達(dá)值（± S） 治療組 20例 對(duì)照組 20例 空白組 10例 術(shù)后第1 d術(shù)后第3 d術(shù)后第7 d 術(shù)后第1 d術(shù)后第3 d術(shù)后第7 d 術(shù)后第1 d術(shù)后第3 d術(shù)后第7 d4267.90 ± 213.3 0.0363989.00 ± 226.6 0.0133652.40 ± 196.8 0.000 4555.50 ± 121.34386.30 ± 212.8 4365.82 ± 189.3 4742.40 ± 119.94423.60 ± 158.1 4238.20 ± 224.6

注：▲PAR-2（目的基因 Ct 值—βactionCt值）。

3 分析與討論

3.1 烏梅丸的治療機(jī)理

肛門瘙癢癥的發(fā)病機(jī)制很多，目前研究更多地認(rèn)為組胺是本病的主要致癢因子，組胺存在于肥大細(xì)胞與嗜堿性細(xì)胞中；PAR-2是肥大細(xì)胞分泌的類胰蛋白酶作用的一種G蛋白耦聯(lián)受體，參與皮膚炎癥及超敏反應(yīng)的重要分子[5]；祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為風(fēng)寒濕熱之邪客于肌膚之間，或肝經(jīng)濕熱下注，蟲毒騷擾。本方案采取肛周皮下游離術(shù)聯(lián)合烏梅丸熏洗治療肛周瘙癢癥，中藥熏洗可通過溫差及藥物的滲透直接作用于局部組織，通過經(jīng)絡(luò)散布全身，氣血通暢，局部血液循環(huán)增加和增加白細(xì)胞吞噬功能，促進(jìn)局部炎癥滲出物吸收[6]；現(xiàn)代研究中藥熏洗主要透過表皮角質(zhì)層和通過皮膚附屬器（毛囊、皮脂腺和汗腺）的吸收，又能刺激皮膚的神經(jīng)末梢感受器，促進(jìn)體液和內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)，同時(shí)肛門部皮膚的屏障功能較弱，且肛門靜脈血管叢豐富，故肛門局部用藥較易滲透和吸收，可以直接進(jìn)入血液循環(huán)及淋巴循環(huán)，加速新陳代謝，迅速發(fā)揮藥效，同時(shí)也避免了肝臟的首過效應(yīng)及胃腸道的毒副反應(yīng)[7]。

3.2 本治療方案的優(yōu)點(diǎn)與不足

本方案體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合，標(biāo)本兼治原則，既發(fā)揮中醫(yī)治本原則，同時(shí)突出肛周皮下神經(jīng)末梢離斷治其標(biāo)。本熏洗方選用張仲景經(jīng)方烏梅丸，為治厥陰經(jīng)的主方，以烏梅之酸斂肝熄風(fēng)為主藥，蜀椒、干姜、桂枝、附子、細(xì)辛之辛，黃連、黃柏之苦，人參、當(dāng)歸之甘，合而為一，同時(shí)方中蜀椒能溫散止痛，燥濕殺蟲，黃柏、黃連清熱燥濕，殺蟲止癢，能抑制皮膚PAR-2的表達(dá)，從而治愈肛門瘙癢癥。我們的研究顯示，治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組及空白組，肛周皮下游離術(shù)聯(lián)合烏梅丸熏洗治療肛周瘙癢癥，能降低患者皮損內(nèi)角質(zhì)形成細(xì)胞PAR-2的表達(dá)[8]。從臨床病例觀察，該治療方案使患者恢復(fù)快、疼痛小，臨床操作易掌握，值得在臨床中推廣應(yīng)用。但本次因研究樣本量小、時(shí)間短，今后還需要大規(guī)模的臨床研究以觀察其長(zhǎng)久的療效。

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INTERVENTION EFFECT OF FUMIGATION AND WASHING WITH WUMEI PILL COMBINED WITH FREE PERIANAL SUBCUTANEOUS OPERATION ON EXPRESSIONS OF PROTEASE-ACTIVATED RECEPTOR-2 IN PERIANAL PRURITUS PATIENTS

HUANG Wen-wu

(Department of Anal and Rectal, The Affiliated Hospital of Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343000, China)

Objective：To investigate intervention effect of fumigation and washing with Wumei pill combined with free perianal subcutaneous operation on the expression of protease-activated receptor-2 (PAR-2). And the efficacy of this treatment was evaluated objectively. Methods：50 postoperative patients with perianal pruritus were selected from January 2013 to October 2014 and divided randomly into 3 groups as the experimental group (= 20), the control group (= 20) and the blank group (= 10). The expression of PAR-2 was detected with RT-PCR in all patients’ lesion skin collected on day 1, 3 and 7 after operation. All acquired data were analyzed by statistical software. Results：The expression of PAR-2 in experimental group was much lower than that in the control group and the blank group on day 1, 3 and 7 after operation with significant difference (< 0.05). Conclusion：Wumei pill combined with free perianal subcutaneous operation had a good efficacy in treating perianal pruritus.

PAR-2; perianal pruritus; fumigation and washing with Wumei pill; free perianal subcutaneous operation

1674-8085(2015)05-0100-03

R284.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2015.05.019

2015-06-06；修改日期：2015-08-18

江西省衛(wèi)生和計(jì)生委課題計(jì)劃項(xiàng)目(2013A187)

黃文武(1969-)，男，江西安福人，主任醫(yī)師，主要從事肛腸科臨床研究工作(E-mail:13707960100@126.com).