姚鋒

南通大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇南通 226001

細(xì)菌性陰道炎對陰道免疫環(huán)境的影響

姚鋒

南通大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇南通 226001

目的 探討細(xì)菌性陰道炎對陰道內(nèi)免疫環(huán)境的影響。方法2015年1—7月整群收集該院診治的80例細(xì)菌性陰道炎患者和80例正常婦女陰道灌洗液和白帶，ELISA檢測陰道灌洗液中IL-1β，IL-6,IL-8及HBD-2。白帶涂片革蘭氏染色鏡檢陰道桿菌和其他雜菌的數(shù)目。結(jié)果 細(xì)菌性陰道炎組較正常婦女組陰道內(nèi)IL-1β水平升高 （P＜0.001），HBD-2水平降低（P＜0.001），IL-6，IL-8差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.631，P=0.764）。細(xì)菌性陰道炎組較正常婦女組陰道內(nèi)雜菌數(shù)量增多（P＜0.001），陰道桿菌數(shù)量減少（P＜0.001）。結(jié)論 陰道桿菌對陰道內(nèi)環(huán)境有免疫調(diào)節(jié)作用，細(xì)菌性陰道炎雜菌生長會破壞陰道內(nèi)免疫環(huán)境。

細(xì)菌性陰道炎；陰道桿菌；免疫環(huán)境；細(xì)胞因子

細(xì)菌性陰道炎(Bacterial vaginosis,BV)是由加德納桿菌類、擬桿菌類、彎曲弧菌類以及生殖道支原體等混合感染,而導(dǎo)致陰道乳酸桿菌數(shù)量減少,甚至消失的一種育齡婦女最常見的下生殖道感染性疾病。

該研究通過整群收集2015年1—7月診治的80例細(xì)菌性陰道炎患者和80例正常婦女,檢測BV患者的陰道灌洗液中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-8(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)以及人β-防御素-2(HBD-2)水平,了解BV患者陰道局部免疫環(huán)境的變化?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群選取2015年1—7月南通大學(xué)附屬醫(yī)院的來自婦產(chǎn)科門診的80例BV患者標(biāo)本，以及來自體檢中心的80例正常婦女標(biāo)本。標(biāo)本為陰道灌洗液和白帶。在篩選病例時，均已排除了具有其他相關(guān)陰道疾病的患者，且在1個月內(nèi)，160例患者均未服用過其他相關(guān)的治療藥物，在2個月內(nèi)，未對陰道進(jìn)行用藥。

1.2 方法

1.2.1 BV診斷標(biāo)準(zhǔn)①涂片鏡檢結(jié)果顯示，患者的線索

細(xì)胞＞20%；②胺試驗中，對分泌物添加 1～2滴濃度為10%的氫氧化鉀，分泌物具有魚腥味，則表明胺試驗結(jié)果為陽性；③通過pH試紙對分泌物進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)pH值＞4.5；④陰道分泌物有增多的情況，且分泌物較為稀薄，呈奶狀，并存在異味；對患者進(jìn)行診斷時，若患者具有上述標(biāo)準(zhǔn)中的3個以上指標(biāo)，則可確診為BV。

1.2.2 標(biāo)本采集 采集前24 h內(nèi)禁止性交、盆浴、陰道灌洗和局部上藥等。白帶標(biāo)本用消毒棉拭子自陰道深部或陰道穹隆后部、宮頸管口等處取材。陰道灌洗用3 mL無菌0.9%氯化鈉溶液反復(fù)沖洗陰道壁后收集陰道灌洗液。陰道灌洗液標(biāo)本最初存放在4℃環(huán)境中長達(dá)4 h,然后置于-80℃待查。

1.2.3 檢測方法 (1)IL-1β，IL-6,IL-8及HBD-2的測定采用雙抗體夾心ELISA方法檢測陰道沖洗液中IL-1β，IL-6,IL-8及HBD-2的質(zhì)量濃度;ELISA檢測試劑盒分別購自深圳晶美生物工程有限公司及深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司。（2）應(yīng)用陰道革蘭染色涂片檢查陰道桿菌和其它雜菌的數(shù)量，每個白帶涂片經(jīng)革蘭染色鏡檢計數(shù)10個油鏡視野，以平均數(shù)作為每個患者顯微鏡下陰道桿菌和其它雜菌的數(shù)量。對細(xì)菌數(shù)量給予賦值：油鏡視野下細(xì)菌數(shù)0，賦值0；油鏡視野下細(xì)菌數(shù)小于1，賦值；油鏡視野下細(xì)菌數(shù)1～5，賦值2；油鏡視野下細(xì)菌數(shù)6～30，賦值3；油鏡視野細(xì)菌數(shù)大于，賦值4。

1.3 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)均采用 SPSS17軟件包進(jìn)行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，并采用 t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常婦女組平均（29.24±5.90）歲，BV組平均（29.1± 6.89）歲，兩組年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.48）。由表1可見，BV組較正常婦女組陰道內(nèi)IL-1β水平升高 （P＜0.001），HBD-2水平降低 （P＜0.001），IL-6，IL-8差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.631，P=0.764）。BV組較正常婦女組陰道內(nèi)雜菌數(shù)量增多（P＜0.001），陰道桿菌數(shù)量減少（P＜0.001）。

3 討論

BV是育齡婦女最常見的陰道感染性疾病[1]，患病年齡多在15～44歲，是由多種致病性厭氧菌引起的感染性疾病，感染率在15%～30%，在陰道感染性疾病中，發(fā)病率遠(yuǎn)高于陰道滴蟲和霉菌感染，且易復(fù)發(fā)。

該研究通過檢測BV患者的陰道灌洗液中細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8及HBD-2水平,了解BV患者陰道局部免疫環(huán)境的變化。

細(xì)胞因子和免疫反應(yīng)具有相關(guān)性。其中IL-1β，IL-6,IL-8是重要的炎癥介質(zhì)，是前炎癥網(wǎng)鏈中的一級細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)中起核心作用，其持續(xù)升高會導(dǎo)致系列生理病理改變，眾多的細(xì)胞因子構(gòu)成了炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)。我們的研究結(jié)果顯示BV組較正常婦女組陰道內(nèi)IL-1β水平升高（P＜0.001），可見陰道桿菌對陰道內(nèi)免疫環(huán)境有免疫調(diào)節(jié)作用，尤其對IL-1β有作用，而BV對陰道粘膜有免疫刺激作用。但是，一些研究結(jié)果顯示陰道桿菌對陰道粘膜的免疫調(diào)節(jié)作用是有限的。Anderson等[2]檢測了47個正常育齡期婦女的IL-1β，IL-6和分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑，并未發(fā)現(xiàn)陰道桿菌數(shù)量對這些因子有什么影響。我們的研究結(jié)果顯示IL-6，IL-8差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.631，P=0.764），即陰道桿菌對陰道內(nèi)IL-6,IL-8表達(dá)無影響，但是卻引起陰道內(nèi)IL-1β表達(dá)降低。

HBD-2是人體中第一個被發(fā)現(xiàn)的可誘導(dǎo)性表達(dá)的防御素，主要來源于皮膚角質(zhì)細(xì)胞、黏膜上皮細(xì)胞。

HBD-2在泌尿生殖道感染中起著重要的作用[3]。更年期婦女由于缺乏雌激素，抑制陰道上皮細(xì)胞HBD-2的表達(dá)，從而增加了細(xì)胞性陰道炎和復(fù)發(fā)性尿路感染的易感性。我們的研究顯示 HBD-2水平降低 （P＜0.001），即HBD-2的表達(dá)在BV患者陰道內(nèi)受到抑制。BV的發(fā)病機(jī)制與陰道優(yōu)勢菌群的變化，相關(guān)菌群及其代謝產(chǎn)物增加，局部黏膜免疫因素及性活動有關(guān)。陰道正常菌群中主要的微生物是乳酸桿菌，乳酸桿菌分解陰道黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)的糖原產(chǎn)生乳酸、過氧化氫[4]，陰道內(nèi)的不同微生物之間相互制約、相互依存，使陰道保持酸性環(huán)境[5]，保持著陰道生態(tài)平衡。抗生素的廣泛使

用、陰道灌洗不當(dāng)、頻繁性交、避孕藥具的使用[6]、全身性疾病、性激素的變化等引起陰道內(nèi)微環(huán)境紊亂，菌群間拮抗作用消失而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。BV婦女的陰道分泌物有很強(qiáng)的溶解陰道保護(hù)性黏液層的作用，并且破壞宮頸黏液和其他宿主的防御機(jī)制。BV相關(guān)致病性厭氧菌氨基酸代謝產(chǎn)生的三甲胺、尸胺、腐胺導(dǎo)致 BV患者陰道分泌物產(chǎn)生腥臭味和pH值升高。BV還伴有陰道分泌物中丙酸鹽、丁酸鹽、醋酸鹽幾種短鏈脂肪酸的升高。已經(jīng)有相關(guān)用于臨床產(chǎn)品的二期試驗，這個試驗使用陰道桿菌菌株L.crispatus CTV-05作為有益菌接種于臨床病人陰道內(nèi)進(jìn)而觀察臨床效果[7]，研究證明這個方案是可行的。還有研究表明，僅含有陰道桿菌的陰道分泌物可以體外抑制大腸桿菌的生長[8]。我們的研究發(fā)現(xiàn)，BV患者陰道內(nèi)陰道桿菌的數(shù)量明顯較少，甚至缺失。正常婦女陰道內(nèi)陰道桿菌較多，雜菌較少。這說明陰道桿菌抑制雜菌的生長。雜菌反過來也會抑制了陰道桿菌的生長從而導(dǎo)致BV。

表1 兩組細(xì)胞因子和細(xì)菌計數(shù)結(jié)果比較（）

表1 兩組細(xì)胞因子和細(xì)菌計數(shù)結(jié)果比較（）

組別正常婦女組（n=80）BV組（n=80）t值P值降鈣素原含量（ng/mL）IL-1β IL-6 IL-8 HBD-2 1.51±0.19 2.29±0.41 15.470＜0.001 0.97±0.15 0.98±0.06 0.482 0.631 2.61±0.38 2.63±0.18 0.301 0.764 3.48±0.22 3.25±0.20 6.851＜0.001細(xì)菌計數(shù)雜菌 陰道桿菌0.5±0.62 3.33±0.67 27.739＜0.001 3.21±0.63 0.48±0.55 29.112＜0.001

綜上，該研究表明陰道桿菌具有免疫調(diào)節(jié)的作用，調(diào)節(jié)一些細(xì)胞因子的表達(dá)。BV實(shí)際上是雜菌與陰道桿菌的菌群失調(diào)導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)。

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Effect of Bacterial Vaginitis on the Immune Environment of Vagina

YAO Feng
Department of gynaecology and obstetrics,Affiliated hospital to Nantong university,Nantong,Jiangsu Province,226001 China

Objective To study the effect of bacterial vaginitis on the immune environment of vagina.Methods From January 2015 to July 2015,vaginal lavage fluid and leucorrhea of 80 cases of bacterial vaginitis patients and 80 cases of normal women were collected,IL-1β，IL-6,IL-8 and HBD-2 in vaginal lavage fluid were detected by ELISA,the number of vagina bacillus and other miscellaneous bacteria was examined by leucorrhea smear gram staining microscopic.Results Compared with the normal women group,IL-1βlevel of vaginal internal in the bacterial vaginitis group increased（P＜0.001）and HBD-2 decreased（P＜0.001）,the difference of IL-6 and IL-8 was notstatistically significant（P=0.631，P=0.764）.Compared with the normal women group,the number of miscellaneous bacteria in the bacterial vaginitis group increased（P＜0.001）but the number of vagina bacillus decreased（P＜0.001）.Conclusion Vagina bacillus has an immune and adjustment effect on vaginal internalenvironment and the growth of bacterial vaginitis bacteria can destroy vaginal internal immune environment.

Bacterial vaginitis;Vagina Bacillus;Immune environment;Cell factor

R711.31

A

1674-0742（2015）12（a）－0080-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2015.34.080

2015-09-05）

姚鋒（1984-），男，江蘇南通人，碩士，實(shí)習(xí)研究員，技師，主要從事婦產(chǎn)科相關(guān)臨床檢驗和科研工作。