張 敏，李海茹

(1.空軍太原干休所衛(wèi)生所，山西 太原 030006;2.山西省腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，山西 太原030013)

液相微萃取HPLC測定消癌平口服液中綠原酸含量

張 敏1，李海茹2

(1.空軍太原干休所衛(wèi)生所，山西 太原 030006;2.山西省腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，山西 太原030013)

目的 研究消癌平口服液中綠原酸的定量方法。方法 采用高效液相色譜法。色譜柱:Eclipse XDBC18柱(150 mm×4.6 mm×5μm);流動相:乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92);檢測波長:327 nm。結(jié)果 綠原酸的線性范圍:1.60～160μg(r=0.999 5，n=5)，平均加樣回收率99.3%，RSD=2.4%。結(jié)論 本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于消癌平口服液的質(zhì)量控制。

消癌平口服液;綠原酸;液相微萃取

消癌平口服液系由烏骨藤制成的單方制劑，具有抗癌、消炎、平喘之功效。用于食道癌、胃癌、肺癌，對惡性淋巴癌、大腸癌、宮頸癌、白血病等多種惡性腫瘤亦有療效。綠原酸是烏骨藤藥材及其制劑中的主要活性成分之一，具有抗誘變、抗菌、抗病毒等作用。目前，制劑中綠原酸的含量測定的樣品前處理方法有超生提取法［1］、水提醇沉法［2］、離子液體提取法等［3］，這些方法手工操作繁冗，勞動強(qiáng)度大，甚至需要使用大量有機(jī)溶劑。液相微萃取法是基于有機(jī)溶劑、分散劑和水的三元混合溶劑體系的樣品前處理方法，具有溶解性能好、極性范圍大、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)［4］。本研究首次建立了液相微萃取高效液相色譜法測定烏骨藤制劑中綠原酸的含量，方法簡單快捷，為該藥材及其制劑的質(zhì)量研究提供了一種新方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1200 series高效液相色譜儀(Agilent公司)。

氯仿、四氫呋喃(分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)，乙腈(色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)，其他試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。綠原酸對照品由中國生物樣品檢定所提供(批號110753-200212)。

消癌平口服液(河南中杰藥業(yè)有限公司)，10 mL×12支，生產(chǎn)批號:20130720、20130721、20130722。

1.2 色譜條件

Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm×5μm，Agilent公司)，流動相:乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92)。流速:1.0 mL/min。檢測波長為327 nm，柱溫: 30℃。

1.3 對照品溶液的配置

精密稱取綠原酸對照品2.0、6.0、10、15、20 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得80μg/mL、240μg/mL、400μg/mL、600μg/mL和800μg/mL的對照品溶液，并對80μg/mL的對照品溶液繼續(xù)稀釋得到16μg/mL及8μg/mL的對照品溶液。

1.4 供試品溶液的制備

在5 mL具塞尖底離心管中，精密量取口服溶液1 mL，0.5 mL(100 mmol/L HCl)溶液，用二次蒸餾水稀釋至5 mL，即為分析溶液。加入50μL氯仿萃取劑和300μL四氫呋喃，充分振蕩后形成了水/分散劑/萃取劑形成的白色云霧狀的混濁體系。以5 000 r/min離心，在離心管底部形成萃取劑液滴聚集相。用微量進(jìn)樣器抽取聚集相液滴20μL，置于5 mL燒杯中(揮干氯仿)，用適量甲醇溶解，取20μL進(jìn)行高效液相色譜分析。

2 結(jié)果

2.1 液相微萃取條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)對液相微萃取的萃取劑與分散劑的種類和體積、萃取時間、離心時間和轉(zhuǎn)速、樣品溶液的酸度等影響因素進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果為:萃取劑氯仿50μL，分散劑四氫呋喃300μL，HCl濃度10 mmol/L。表明萃取劑種類和體積、分散劑種類和體積以及樣品溶液的酸度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響比較大。

2.2 線性范圍

按照1.4項(xiàng)下的樣品處理方法，加入1.3項(xiàng)下的對照品溶液1 mL，測定色譜峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=2 026.3X+0.372 6 r=0.999 5，結(jié)果表明進(jìn)樣量在1.60～160μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取本品1 mL，按1.4項(xiàng)下方法制成供試品溶液，精密吸取20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得色譜峰面積平均值為12 238.9，RSD為0.43%。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取1.4項(xiàng)下的供試品溶液，精密吸取10μL，按0、2、4、8、16 h分別進(jìn)樣，記錄色譜峰面積。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液制備后16 h內(nèi)測定，色譜峰面積無明顯變化，在此時間內(nèi)待測組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號為20130720的樣品5份，按照1.4項(xiàng)下方法測定，平均含量為32μg/mL，RSD為1.5%。

2.6 陰性干擾試驗(yàn)

取處方中除去烏骨藤外的輔料，按制備工藝及供試品溶液制備方法，制成陰性對照液，依含量測定方法測定，結(jié)果陰性色譜圖中，在與綠原酸對照品相應(yīng)保留時間附近無干擾，見圖1(b)。

2.7 回收率試驗(yàn)

按加樣回收率方法試驗(yàn)，取已知準(zhǔn)確含量的樣品(平均含量32μg/mL)5支，從每支樣品中分別取0.5 mL，再分別取綠原酸對照品溶液(40μg/mL) 0.5 mL，按1.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定峰面積，結(jié)果平均回收率為99.3%，RSD=2.4%(n=5)，測定結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品的測定

取本品樣品3批，按1.4項(xiàng)方法制成供試品溶液，并照2.2項(xiàng)色譜條件測定，結(jié)果三批樣品RSD分別為1.8%、1.2%、1.5%，色譜圖見圖1。

圖1 綠原酸對照(a)，陰性對照(b)和樣品(c)溶液色譜圖

3 討論

液相微萃取法與其他萃取方式相比，具有操作簡單、環(huán)境友好、快速、靈敏、富集倍數(shù)高等特點(diǎn)，特別是對常規(guī)前處理方法難以分析的少量、微量活性成分或有害成分的分析具有重要的意義。液相微萃取聯(lián)合高效液相色譜法用于測定綠原酸含量，靈敏度高，專屬性強(qiáng)，操作簡便，可以用于消癌平口服液的質(zhì)量評價，并且為口服溶液的測定提供了一種更加簡便、有效的樣品前處理方法。

［1］ 史禮貌，解成喜.超聲提取-反相高效液相色譜法測定新疆大薊中綠原酸和蘆丁的含量［J］.分析科學(xué)學(xué)報，2012，28(3):401-404.

［2］ 舒孝順，卿婉華，許凱揚(yáng)，等.紅腺忍冬花中綠原酸提取工藝研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2013，25(10): 1448-1451.

［3］ 王新紅，李雪梅，蔡晨，等.離子液體提取山楂綠原酸的工藝優(yōu)化［J］.農(nóng)業(yè)工程學(xué)報，2014，30(10):270-276.

［4］ Tian Jie，Chen Xuan，Bai Xiaohong.Comparison of dispersive liquid-liquid microextraction based on organic solvent and ionic liquid combined with high-performance liquid chromatography for the analysis of emodin and itsmetabolites in urine samples［J］.J Sep Sci，2012，35(1):145-152.

The determ ination of chlorogenic acid content in Xiao'aiping oral liquid by liquid phasem icroextraction HPLC

ZHANG Min1，LIHairu2
(1.The Air Force Taiyuan sanatorium，Taiyuan，Shanxi Province，030006;2.Shanxi Province Tumor Hospital Pharmacy Department，Taiyuan，Shanxi Province，030013，China)

Objective To study the quantitativemethod for chlorogenic acid in Xiao'aiping oral liquid.Methods High performance liquid chromatography(HPLC)were employed.Chromatographic column was Eclipse XDB-C18 column(150mm×4.6mm×5μm)，mobile phasewas acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution(8∶92);and detection wavelength was327 nm.Results The linear range of chlorogenic acid covered from 1.60μg to 160μg(r= 0.999 5，n=5)，and the average sample recovery rate was 99.3%，RSD=2.4%.Conclusion Thismethod is simple，sensitive，accurate，and can be for Xiao'aiping oral liquid quality control.

Xiao'aiping oral liquid;chlorogenic acid;the liquid phasemicroextraction

R284.2

A

1673-2995(2015)01-0015-03

2014-10-03)

張 敏(1974－)，男(漢族)，主治醫(yī)師，本科.