朱燕 謝麗 ，2 楊覓 ，2 任偉 ，2 胡靜 ，2 胡文靜 ，2 錢曉萍 ，2# 劉寶瑞 ，2

1南京中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院，南京210008

2南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心，南京210008

傳統(tǒng)中醫(yī)中藥用于腫瘤治療的原則主要有扶正和祛邪兩方面，其中清熱解毒法是最重要的祛邪手段之一。重樓為清熱解毒類中藥，具有清熱解毒、涼肝定驚、消腫止痛等功效，被廣泛用于抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、止咳平喘等治療中。在中醫(yī)復(fù)方中，重樓組方治療腫瘤的歷史已經(jīng)有幾千年，且主要治療惡性腫瘤的熱證和實證。

現(xiàn)代研究證實，重樓對肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、直腸癌、腎癌、胰腺癌、前列腺癌和宮頸癌等多種實體瘤均有一定的抑制作用[1]。RPTS是重樓抗腫瘤的主要有效成分，可采用水提和醇提兩種方法提取。Sun等[2]通過實驗證實重樓醇提物比水提物的抗腫瘤作用更強。孫治國等[3]報道，醇提較水提的重樓總皂苷得出率更高，且70%乙醇提取總皂苷的得出率最高。本文對重樓醇提物及醇提物主要抗腫瘤成分RPTS在體內(nèi)外的抗腫瘤作用予以分析并總結(jié)如下。

1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是大多數(shù)抗腫瘤藥物最主要的作用機制。細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡，是由細(xì)胞內(nèi)特定基因激活、表達(dá)、調(diào)控的一種細(xì)胞自主性、有序性的死亡方式[4]。重樓醇提物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機制包括阻滯腫瘤細(xì)胞增殖周期、影響細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)、影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)等幾個方面。

1.1 阻滯腫瘤細(xì)胞增殖周期

腫瘤細(xì)胞的增殖都需要經(jīng)歷DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）和有絲分裂期（M期）4個不同的時期。重樓醇提物能夠作用于腫瘤細(xì)胞增殖周期，使其增殖周期受阻，從而誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。Qian等[5]的體外實驗探究了重樓醇提物抗腫瘤作用的機制，結(jié)果顯示重樓醇提物能顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長，將血管內(nèi)皮細(xì)胞周期阻滯于G0～G1期。李晞等[6]通過體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，重樓醇提物作用于人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后，細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死，可見大量細(xì)胞壞死凋亡碎片；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，SW480細(xì)胞在S期的分布比例下降，在G0～G1期和G2/M期的分布比例增高，表明重樓醇提物可能是通過抑制腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)與DNA的合成、抑制腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，來實現(xiàn)抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

1.2 影響細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)

細(xì)胞內(nèi)外存在著多種類、多途徑的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號途徑。caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中的關(guān)鍵激酶，caspase-3活性的改變直接影響到細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生[7-8]。江皓等[9]通過體外實驗發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅰ能抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖，并能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機制可能與重樓皂苷Ⅰ降低PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表達(dá)、增加Bax及caspase-3蛋白表達(dá)有關(guān)。范軍強[10]認(rèn)為，重樓皂苷Ⅰ誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞A549的凋亡可能是通過多種信號傳導(dǎo)通路相關(guān)基因的表達(dá)來實現(xiàn)的，這些基因表達(dá)水平的綜合作用決定著腫瘤細(xì)胞的凋亡與否。蛋白印跡法結(jié)果提示重樓皂苷Ⅰ可以抑制AKT（蛋白激酶B）的磷酸化，從而誘導(dǎo)A549細(xì)胞的凋亡。將重樓皂苷Ⅰ作用于A549細(xì)胞后，利用RTPCR法檢測不同時間節(jié)點細(xì)胞內(nèi)p53、Gadd45、Gadd45a、JUN等基因表達(dá)的情況，結(jié)果顯示重樓皂苷Ⅰ可能通過P53/GADD45/JUN信號通路誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。Gadd45a基因家族是DNA損傷修復(fù)相關(guān)的重要基因，在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著極其重要的作用。Gadd45a的表達(dá)可以影響細(xì)胞周期，Gadd45a高表達(dá)時，細(xì)胞被阻滯于G2/M期[11]。孫雨等[12]發(fā)現(xiàn)，呋喃唑酮可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2阻滯于S期，同時Gadd45a表達(dá)上調(diào)，磷酸化P38表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而抑制JNK信號傳導(dǎo)通路。

1.3 影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)

李濤[13]發(fā)現(xiàn)，通過下調(diào)VEGF、MDM2和NFˉκB/p65和上調(diào)p53基因的表達(dá)，重樓醇提物能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)其凋亡。有研究證實，血小板源性生長因子B（platelet-derived growth factor B，PDGF-B）是原癌基因cˉsis的編碼產(chǎn)物，是一種重要的血管生成因子，能通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及新生血管的生成，來促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移[14]。張珂等[15]的實驗結(jié)果顯示，重樓醇提物組移植瘤組織中PDGF-B蛋白的表達(dá)水平顯著低于空白對照組（p＜0.01），結(jié)合重樓醇提物對人胃癌裸鼠移植瘤細(xì)胞的增殖能力存在明顯的抑制作用，研究者推測重樓醇提物可能顯著降低了胃癌細(xì)胞中PDGF-B蛋白的表達(dá)水平，并抑制其血管生成。

2 抑制腫瘤細(xì)胞增殖

腫瘤細(xì)胞增殖是腫瘤生長、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖是抗腫瘤的重要手段之一。李晞等[6]采用MTT法證實，重樓醇提取液對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的增殖具有抑制作用，且其抑制作用具有時間依賴性和濃度依賴性。即，隨著作用時間的延長和藥物濃度的增加，重樓醇提取液對SW480細(xì)胞增殖的抑制效果越來越明顯，存在量-效關(guān)系和時-效關(guān)系。此外，重樓醇提物還對肺癌、胃癌、肝癌等多種細(xì)胞株的增殖有一定的抑制作用[16-18]。

3 抗新生血管生成

新生血管可以為腫瘤的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和氧，為腫瘤細(xì)胞的快速增殖和轉(zhuǎn)移提供物質(zhì)基礎(chǔ)，所以抑制腫瘤組織中新生血管的形成可以抑制其生長及轉(zhuǎn)移。林云華等[19]發(fā)現(xiàn)：經(jīng)重樓醇提物作用后，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）可出現(xiàn)變圓、漂浮、數(shù)量減少等表現(xiàn)。重樓醇提物能夠明顯減少HUVEC遷移細(xì)胞的數(shù)量；重樓醇提物對雞胚絨毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用，能夠明顯減少新生血管的數(shù)目（p＜0.05）。可見，重樓醇提物在體外能有效抑制血管生成，其機制可能與抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移及管腔形成有關(guān)。胡靜等[20]用重樓醇提物對肝癌H22荷瘤小鼠進(jìn)行灌胃治療，10天后處死小鼠，觀測移植瘤微血管的密度，發(fā)現(xiàn)中、高劑量重樓醇提物能夠明顯抑制腫瘤組織微血管的密度，提示其有抗血管生成的作用。

4 調(diào)節(jié)機體免疫功能

Th1細(xì)胞亞群主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β三種細(xì)胞因子，均具有較強的抗腫瘤活性及抗血管生成作用；而Th2細(xì)胞亞群主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子抑制免疫應(yīng)答。李春江[21]建立乳腺癌移植瘤裸鼠模型，通過灌胃途徑給予重樓醇提物，對比相應(yīng)各項指標(biāo)。結(jié)果顯示：與陰性對照組相比，重樓醇提物高、低劑量組荷瘤裸鼠的胸腺指數(shù)顯著升高（p＜0.01）；重樓醇提物處理組荷瘤裸鼠的TNF-α和IL-4水平顯著低于陰性對照組，IFN-γ表達(dá)水平顯著高于陰性對照組，這說明荷瘤裸鼠經(jīng)重樓醇提物灌胃后，機體內(nèi)Thl/Th2平衡向Th1偏移，免疫應(yīng)答增強。

5 抑制耐藥細(xì)胞株

王震等[22]將重樓皂苷Ⅶ作用于對順鉑耐藥的人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅶ對該細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用，并呈明顯的濃度、時間相關(guān)性；與陰性對照組相比，重樓皂苷Ⅶ有明顯的促細(xì)胞凋亡作用；流式細(xì)胞儀檢測顯示重樓皂苷Ⅶ將對順鉑耐藥的人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞阻滯于G2期。

6 小結(jié)

綜上所述，中藥重樓及其有效成分RPTS在抗腫瘤方面發(fā)揮著極其重要的作用，主要通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)機體免疫功能等機制來發(fā)揮抗腫瘤作用，此外它還對耐藥細(xì)胞株起到一定的抑制作用。盡管關(guān)于重樓抗腫瘤機制方面的研究已經(jīng)取得了一定的成果，但其在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化機制方面的研究還有待進(jìn)一步深入探索。

［1］林云華,錢曉萍,等.中藥重樓抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2013,19(13):2358-2360.

［2］Sun J,Liu BR,Hu WJ,et al.In vitro anticancer activity of aqueous extracts and ethanol extracts of fifteen taditional Chinese medicines on human digestive tumor cell lines[J].Phytother Res,2007,21(1.102-1104.

［3］孫治國,張琳,李凌軍,等.重樓總皂苷提取工藝研究[J].中藥材,2007,30(6):726-729.

［4］郭曉辰,張軍平.中藥調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞凋亡的作用機制研究進(jìn)展[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(19):288-291.

［5］Qian X,Zhu L,Hu J,et al.Rhizoma Paridis ethanol extract selectively inhibits the proliferation of HUVECs comparing to Lovo cells and shows anti-angiogenesis effects in a mouse model[J].J Ethnopharmacol,2012,143(1):256-261.

［6］李晞,王繼紅,亞雄.重樓提取液對人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的影響及其作用機制[J].中國生物制品學(xué)雜志,2010,23(6):619-622;632.

［7］韓憲春,王帆,李喜茹,等.Survivin與caspase-3在食管癌中的表達(dá)和意義[J].中國藥物與臨床,2010,10(12):1328-1330.

［8］張黎黎,張潔,張林,等.p53、bcl-2、caspase-3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性分析[J].天津醫(yī)藥,2014,42(7):670-673.

［9］江皓,趙鵬軍,馬勝林.重樓皂苷Ⅰ通過PI3K/Akt途徑誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞凋亡的研究[J].腫瘤學(xué)雜志,2014,20(2):127-130.

［10］范軍強.重樓皂甙Ⅰ抗非小細(xì)胞肺癌作用及機制的體內(nèi)和體外實驗研究[D].杭州:浙江大學(xué),2008.

［11］李鵬飛,楊成旺,蘇秀蘭.Gadd45a基因?qū)?xì)胞調(diào)控作用的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010,32(2):155-158.

［12］孫雨,湯樹生,靳溪,等.GADD45a與p38/JNK MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在呋喃唑酮誘導(dǎo)的細(xì)胞S期阻滯中作用機理的研究[C].中國毒理學(xué)會獸醫(yī)毒理學(xué)與飼料毒理學(xué)學(xué)術(shù)討論會暨獸醫(yī)毒理專業(yè)委員會第4次全國代表大會會議論文集.2012:134.

［13］李濤.重樓總皂苷抗腫瘤機制研究[D].西安:陜西師范大學(xué),2013.

［14］沈令廣.PDGF-B與微血管密度在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2011.

［15］張珂,牟瀚舟,馮建國,等.重樓醇提取物抑制胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤細(xì)胞增殖的研究[J].腫瘤學(xué)雜志,2011,17(3):205-208.

［16］陳志紅,龔先玲,劉義.重樓總皂苷對人肺癌細(xì)胞A549的增殖抑制作用及對細(xì)胞周期的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2010,26(15):2685-2687.

［17］保永亮,龔曉燕,方海雁,等.重樓總皂苷對人胃癌MNK-45和MGC80-3細(xì)胞增殖的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,31(6):51-54.

［18］陳源紅,曾怡,覃艷春,等.重樓水提物對肝癌細(xì)胞HepG2增殖及凋亡的影響[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013,35(5):595-597.

［19］林云華,錢曉萍,劉寶瑞.中藥重樓聯(lián)合奧沙利鉑抗血管生成的實驗研究[C].第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集,北京,2009.北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2009:459.

［20］胡靜,錢曉萍,劉寶瑞,等.重樓醇提物抗鼠H22移植瘤血管生成的體內(nèi)實驗研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2010,18(10):1886-1889.

［21］李春江.重樓皂苷抗乳腺癌及免疫調(diào)節(jié)作用研究[D].長春:東北師范大學(xué),2011.

［22］王震,李亞榮,郝杰,等.重樓皂苷Ⅶ對耐順鉑人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞增殖的抑制作用[J].中國老年學(xué)雜志,2013,33(1):145-147.