手工克隆公豬繁殖性能跟蹤

夏代剛，鄭 華，蒙小云，石 偉，李 青

（深圳市農(nóng)牧實(shí)業(yè)有限公司，廣東 深圳 518023）

手工克隆公豬繁殖性能跟蹤

夏代剛，鄭 華*，蒙小云，石 偉，李 青

（深圳市農(nóng)牧實(shí)業(yè)有限公司，廣東 深圳 518023）

對3頭克隆公豬的精液指標(biāo)和配種效果進(jìn)行了跟蹤，并與同期普通公豬進(jìn)行了對比，結(jié)果表明，克隆公豬的采精量、精子活力和精子畸形率與普通公豬差異不顯著（P＞0.05），但精子密度極顯著低于普通公豬（P＜0.01）；克隆公豬能達(dá)到85%的配種受胎率和81.67%的配種分娩率，已能達(dá)到正常集約化養(yǎng)豬需要的標(biāo)準(zhǔn)；克隆公豬所配母豬的窩均總仔、窩均活仔均顯著低于普通公豬所配母豬（0.01＜P＜0.05），分別為11.14頭和9.94頭，其窩均畸形數(shù)則顯著高于普通公豬（0.01＜P＜0.05），窩均死胎、窩均木乃伊和窩均弱仔數(shù)則差異不顯著（P＞0.05）?？寺」i完全可以用于擴(kuò)大優(yōu)秀種公豬群體并應(yīng)用于集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)。

克??；生長；性能測定；豬

克隆技術(shù)使遺傳優(yōu)良的種豬快速擴(kuò)繁成為了可能，但目前豬的克隆成功率低[1]，且成本高，所以克隆種公豬的經(jīng)濟(jì)價值更大，畢竟可以一公配多母。克隆的最終目的是為了產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用，那么我們生產(chǎn)克隆種公豬的目的是為了利用其采精配種，但克隆公豬的繁殖力正常嗎？能否像普通公豬一樣利用？目前這方面的研究尚處于起步階段。Shibata M等（2006）[2]研究了金華克隆豬的生長性能和繁殖性能，馬青艷等（2009）[3]對克隆的巴馬小型豬繁殖性能進(jìn)行了觀察，逯心玉等（2012）[4]研究了克隆的大白豬的繁殖性能。

1??材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

選用深圳市農(nóng)牧實(shí)業(yè)有限公司遺傳指數(shù)高、生產(chǎn)性能好的杜洛克公豬作為供體，采用手工克隆技術(shù)建系和生產(chǎn)克隆胚胎。分別用手術(shù)法和內(nèi)窺鏡法胚胎移植，結(jié)果分娩9窩45頭活仔，飼養(yǎng)到成年僅剩3頭。本研究就以這3頭克隆杜洛克公豬為研究對象，與同期的普通杜洛克公豬對比精液品質(zhì)和配種性能。配種的180頭母豬為同一公司發(fā)情正常的2～6胎普通二元雜母豬。

1.2 試驗(yàn)動物的飼養(yǎng)管理

按深圳市農(nóng)牧實(shí)業(yè)有限公司飼養(yǎng)管理規(guī)程飼養(yǎng)，飼喂公司自己生產(chǎn)的全價配合料，自由采食，自由飲水。免疫和保健程序、衛(wèi)生和消毒程序等均嚴(yán)格按公司已有的程序執(zhí)行。

1.3 試驗(yàn)儀器

顯微鏡、磁力攪拌器、水浴鍋、恒溫冰箱、干燥箱、恒溫板、電子稱、血細(xì)胞計數(shù)板、精液稀釋粉(丹麥) 、采精杯、溫度計、濾紙、輸精瓶、無菌袋、燒杯、蒸餾水、計數(shù)器、輸精管。

表1 克隆公豬與普通公豬精液品質(zhì)對比（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤）

表2 克隆公豬與普通公豬情期配種受胎率、配種分娩頭數(shù)對比

表3 克隆公豬與普通公豬配種后母豬產(chǎn)仔情況對比（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤）

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 精液采集

達(dá)到8月齡后開始進(jìn)行人工采精調(diào)教，采精頻率為每周1次，采精2～3次每次射精量基本穩(wěn)定后正式進(jìn)行試驗(yàn)。采精頻率為每周1次，每頭公豬收集5次采精數(shù)據(jù)，并計算其平均值為此頭公豬的精液品質(zhì)數(shù)據(jù)。

1.4.2 精液品質(zhì)檢查指標(biāo)

記錄每次采精的精液量、精子密度、精子活力、精子畸形率。

1.4.3 精液品質(zhì)指標(biāo)檢查方法

人工采集的原精液經(jīng)過濾后，用電子秤稱量精液質(zhì)量，再按1 g折算為1 mL的計算方法統(tǒng)計公豬射精量；原精初步鏡檢，用稀釋液進(jìn)行2～4倍的稀釋，然后在400 相差顯微鏡下利用血細(xì)胞計數(shù)法進(jìn)行檢測，檢測指標(biāo)主要有：精子密度、精子活力（按1分制進(jìn)行評分）、精子畸形率。

1.4.4 種公豬的繁殖性能跟蹤

采集3頭克隆公豬和3頭普通公豬精液，按人工授精操作規(guī)程每頭公豬配20頭發(fā)情母豬，每頭母豬情期輸精3次，配種28 d時B超查孕，分娩時記錄產(chǎn)仔情況，記錄指標(biāo)包括窩產(chǎn)總仔數(shù)、活仔數(shù)、死胎數(shù)、畸形數(shù)、弱仔數(shù)、木乃伊數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SAS軟件(V8.02)的Means過程計算平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)誤，應(yīng)用GLM過程進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2??結(jié)果與分析

2.1 克隆公豬與普通公豬精液品質(zhì)對比

具體見表1?？梢钥闯?，克隆公豬的采精量、精子活力和精子畸形率與普通公豬差異不顯著（P＞0.05），但精子密度極顯著低于普通公豬（P＜0.01），每mL精液只有1.87億精子。

2.2 克隆公豬與普通公豬配種產(chǎn)仔情況對比

表2列出了克隆公豬與普通公豬的配種效果對比，克隆公豬能達(dá)到85%的配種受胎率和81.67%的配種分娩率，雖然略低于同期普通公豬的配種水平，但已能達(dá)到正常集約化養(yǎng)豬需要的標(biāo)準(zhǔn)。

從配種后母豬產(chǎn)仔情況來看（表3），克隆公豬所配母豬的窩均總仔、窩均活仔均顯著低于普通公豬所配母豬（0.01＜P＜0.05），分別為11.14頭和9.94頭，其窩均畸形數(shù)則顯著高于普通公豬（0.01＜P＜0.05），窩均死胎、窩均木乃伊和窩均弱仔數(shù)則差異不顯著（P＞0.05）。

3??討論

1)克隆公豬所配60頭母豬平均胎次（3.82±0.18）胎，普通公豬所配60頭母豬平均胎次（3.85±0.18）胎，經(jīng)差異顯著性檢驗(yàn)，兩者差異不顯著（P＞0.05），剔除了母豬胎次對試驗(yàn)結(jié)果的影響。

2)本研究發(fā)現(xiàn)克隆公豬精液的精子密度極顯著低于普通公豬（P＜0.01），其余精液指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），與逯心玉等（2012）[4]的研究結(jié)果不一致，他們認(rèn)為克隆公豬的精子密度和活力都高于供核公豬，畸形率顯著低于供核公豬。這種不一致可能源于與克隆公豬對照的對象差異，本研究選用同期年齡相近的普通公豬，而逯心玉等（2012）[4]的研究中選用了供核公豬。供核公豬從采樣克隆到克隆產(chǎn)物成年采精，二者年齡相差至少1年時間；如果供核公豬是成年時采樣，則相差2年時間，年輕公豬與老公豬精液品質(zhì)對比很有可能占優(yōu)勢。

3)本研究中，克隆公豬所配母豬的窩均總仔、窩均活仔均顯著低于普通公豬所配母豬（0.01＜P＜0.05），這與逯心玉等（2012）[4]認(rèn)為無顯著差異又不一致，其原因可能仍然是源于對照公豬的年齡差異。

4)通過研究，我們發(fā)現(xiàn)克隆公豬在繁殖性能方面雖然略低于普通公豬，但其各項(xiàng)繁殖指標(biāo)已達(dá)到了集約化生產(chǎn)的要求，說明克隆公豬完全可以用于擴(kuò)大優(yōu)秀種公豬群體并應(yīng)用于生產(chǎn)，克隆豬產(chǎn)業(yè)應(yīng)用具有廣闊前景。

[1] Nanassy L， Lee K， Javor A， et al. Effects of activation methods and culture conditions on development of parthenogenetic porcine embryos [J]. Anim Reprod Sci， 2008， 104(2-4)：264-274.

[2] Shibata M， Otake M， Tsuchiya S，et al. Reproductive and growth performance in Jinhua pigs cloned from somatic cell nuclei and the meat quality of their offspring [J]. J Reprod Develop， 2006， 52：583-590.

[3] 馬青艷，陸維和，張彩珠，等.廣西小型克隆豬繁殖性能和生長發(fā)育情況觀察[J].中國畜禽種業(yè)，2009，11：55-56.

[4] 逯心玉，劉彪，胡魁，等. 克隆種公豬生長狀況和繁殖性能評價[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2012，44（7 ）：6-9.

2014-11-05)

深圳市科技計劃項(xiàng)目（編號：JSA200904011807A）

*通訊作者：鄭華（1973—），男，高級畜牧師，主要從事豬的育種、生產(chǎn)和經(jīng)營管理。