王 斌 張騰霄 李新晶 任清云 宋相周 唐志國（.綏化學院食品與制藥工程學院；.綏化市食品藥品檢驗檢測所 黑龍江綏化 506）

不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類物質比較分析

王 斌1張騰霄1李新晶1任清云1宋相周2唐志國2
（1.綏化學院食品與制藥工程學院；2.綏化市食品藥品檢驗檢測所 黑龍江綏化 152061）

為建立柴胡多指標的質量評價體系，比較分析了不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類成分含量。以蘆丁為標準品，采用亞硝酸鈉－硝酸鋁比色法，在520nm處測定吸光度。結果顯示：不同產(chǎn)地野生與栽培柴胡中，含量最高的是黑龍江栽培，依次是山西野生、吉林野生、河北栽培。不同部位野生與栽培柴胡中黃酮含量最高的是柴胡花，依次是柴胡葉、柴胡莖、柴胡根。得出結論：不同產(chǎn)地的野生與栽培柴胡中黃酮類物質含量差別不是很大。不同部位柴胡中黃酮類物質含量差別很大，柴胡花中黃酮含量最高，為柴胡的擴大藥源提供了理論依據(jù)。柴胡的質量評價還應結合其他主要有效成分進行綜合評價。

柴胡；黃酮；不同產(chǎn)地；不同部位

柴胡是我國常用中藥，2010版《藥典》收錄的柴胡正品為柴胡（Bupleurum chinenseDC）和狹葉柴胡（B.scorzonerifolium Willd）的干燥根，前者習稱為北柴胡，后者稱為南柴胡。柴胡性味苦甘，入肝膽經(jīng)，具有和解退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功能?，F(xiàn)代藥理表明柴胡具有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳、抗菌、保肝利膽、抗炎、抗病毒、降血脂及抗消化道潰瘍等藥理活性[1]。隨著中藥現(xiàn)代化的發(fā)展，柴胡需求量不斷增加，野生資源的數(shù)量已不能滿足需求，人工栽培品種已成為商品柴胡的主要來源[2]。近年來發(fā)現(xiàn)，黃酮類成分也是柴胡中的重要活性成分，具有利膽、抑菌、殺菌等作用。但有關柴胡中黃酮類化合物的研究報道相對較少。本文通過研究不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類成分含量，為建立柴胡多指標的質量評價體系提供理論依據(jù)。

一、材料與方法

（一）材料。

1.柴胡樣品：所有樣品經(jīng)綏化學院制藥工程教研室鑒定為狹葉柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd）的根，樣品均采于2013年，樣品編號及相應產(chǎn)地見表1、表2：

表1 樣品編號及產(chǎn)地

2.儀器：FW100高速萬能粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；分析天平FA2014，上海舜宇恒平科學儀器有限公司；101-2A型數(shù)顯電熱鼓風干燥箱，上海錦屏儀器儀表有限公司；DK-98-IIA電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；KQ-50B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；752紫外可見分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司。

表2 樣品編號及不同部位

3.試劑。蘆丁對照品（購于中國食品藥品鑒定研究院）、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、蒸餾水，以上試劑均為分析純。

（二）實驗方法。

1.標準曲線的繪制。

（1）標準品溶液的制備。干燥恒重的蘆丁標準品20 mg，加60％乙醇20mL于水浴60℃溶解，配制成1.0mg/mL的標準溶液。

（2）線性關系考察。精密吸取0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL的標準溶液至25mL容量瓶中，加入0.7mL5％NaNO2，5分鐘后再加入0.7mL10％Al（NO3）3，放置10分鐘，加入5.0mL 4％的NaOH，混勻后用30％乙醇定容置刻度，于38℃水浴中顯色15分鐘，以試劑空白對照，在510nm處測定吸光度。以蘆丁質量（mg）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線。

2.樣品的測定。

（1）樣品溶液的制備。樣品于55℃干燥5h，于粉碎機中粉碎，過40目篩，置干燥器中備用。稱取樣品粉末2.0g，置于100mL錐形瓶中，加入65％乙醇30mL，用封口膜密封，浸泡24h，超聲提取，提取溫度50℃，提取時間10分鐘，超聲功率60％，提取完畢，過濾，取上清液。第二次提取加入65％乙醇15mL，提取條件不變，合并兩次上清液，65％乙醇定容至35mL，備用。

（2）樣品的測定與結果。精密吸取1-4號樣品溶液5mL，按（二）中1項條件下測定，平行3次，取平均值代入公式計算總黃酮的含量。計算公式如公式一：百分含量/％＝｛[（X× 7）÷1000]÷M｝×100％，精密吸取5-8號樣品溶液2.5mL，按（二）中1項條件下測定，平行3次測定，取平均值代入公式計算總黃酮的含量。計算公式如公式二：百分含量/％＝｛[ （X×14）÷1000]÷M｝×100％，公式中，X為根據(jù)標準曲線計算換算為蘆丁的mg數(shù)；M為制備樣品測定液時稱取的柴胡干燥粉末的重量，單位為g。

（三）方法學實驗。

1.精密度實驗。精密稱取1號樣品，分別按（二）中1和2項制備供試品溶液，按樣品測定項操作連續(xù)測吸光度各5次，計算黃酮含量。

2.穩(wěn)定性實驗。精密稱取樣品分別按（二）中1和2項制備供試品溶液，60min內每隔10min測1次吸光度。

3.重復性實驗。精密稱取樣品，分別按（二）中1和2項制備供試品溶液各5份，并計算含量。

4.加樣回收率實驗。以重復實驗所得的總黃酮平均含量為樣品含量，精密稱取4號樣品5份，加入等量對照品溶液，按樣品測定項操作并計算含量。

二、結果與討論

（一）精密度及加樣回收率。精密度結果表明，精密度良好，相對標準偏差（RSD）分為2.43％。加樣回收率為99.99％，RSD為1.17％。

表3 黃酮含量的精密度實驗

表4 黃酮含量的回收率實驗

（二）穩(wěn)定性及重復性。穩(wěn)定性結果表明在60min內，吸光度均基本穩(wěn)定。重復性良好，RSD為1.13％。重復性及穩(wěn)定性結果說明，該方法重復性好且測定的數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

（三）不同產(chǎn)地及不同部位柴胡根中黃酮的含量。經(jīng)回歸分析，柴胡黃酮類物質含量的回歸方程：y=0.3798x+0.0415，R2=0.9948，表明蘆丁在0.8～2.0mg呈良好的線性關系。從圖1中可以看出：不同產(chǎn)地野生與栽培柴胡中黃酮類物質含量差別不是很大，其中，黃酮含量最高的是4號樣品（黑龍江栽培）含量為0.333％，依次是1號樣品（山西野生）含量為0.276％，2號樣品（吉林野生）含量為0.248％，3號樣品（河北栽培）含量為0.181％。不同部位柴胡中黃酮類物質含量差別很大，含量最高的是8號樣品（柴胡花中）含量為1.745％，依次是7號樣品（柴胡葉中）含量為1.170％，6號樣品（柴胡莖中）含量為0.763％，5號樣品（柴胡根中）含量為0.253％。

（四）討論。野生的柴胡中黃酮含量并不一定比栽培柴胡中黃酮含量高，本研究中黃酮含量最高的是栽培品種，黃酮含量最低的也是栽培品種，因此中藥常常強調其道地性。不同部位柴胡中黃酮類物質含量差別很大，黃酮含量最高的是柴胡花，依次是柴胡葉、柴胡莖、柴胡根中。2010版藥典中收錄柴胡的入藥部位是根，實驗表明柴胡莖中及花中黃酮含量豐富，為柴胡的臨床應用擴大藥源提供了理論依據(jù)。

圖1 不同產(chǎn)地及不同部位柴胡根中黃酮的含量

本研究的不足之處是沒有建立同時以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、黃酮、糖類物質及其他有效成分含量的多指標體系來評價柴胡的質量。王斌等[3]對7個不同產(chǎn)地來源的柴胡中糖類物質含量進行分析發(fā)現(xiàn)，同種柴胡不同產(chǎn)地或不同的生長環(huán)境，其糖類物質含量差別較大；同種產(chǎn)地野生品種和栽培品種總糖和多糖均存在一定的差異。曹海祿等[4]采用ICP-AES/ICP-MS技術分析測定了四種柴胡種質藥材中21種常量及微量元素的含量，這些研究為柴胡的質量評價提供了重要依據(jù)。

三、結論

本文應用亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法，測定不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類成分含量，結果不同產(chǎn)地的野生與栽培柴胡中黃酮類物質含量差別不是很大。不同部位柴胡中黃酮類物質含量差別很大，柴胡花中黃酮含量最高，為柴胡擴大藥源提供了理論依據(jù)。柴胡的質量評價還應結合其他主要有效成分進行綜合評價。同時，對該測定方法進行了全面的方法學考察，加樣回收率實驗和精密度實驗表明，該方法排除了干擾因素，精密度良好；重復性及穩(wěn)定性結果說明，該方法重復性好且測定的數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

[1]王斌,張騰霄,馬松艷,等.柴胡的臨床應用及配伍規(guī)律研[J].時珍國醫(yī)國藥,2012（1）.

[2]賀獻林,王旗,賀振寧,等.野生柴胡生育特性及其對馴化栽培的啟示[J].河北農(nóng)業(yè)科學，2014（3）.

[3]王斌,張騰霄,劉利軍，等.不同產(chǎn)地狹葉柴胡糖類物質含量的比較分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011（22）.

[4]曹海祿,魏建和,何春娥,等.不同土壤種植下四種柴胡種質藥材中常量及微量元素含量的比較研究[J].光譜學與光譜分析,2010（4）.

[責任編輯 鄭麗娟]

R284

A

2095-0438（2015）11-0147-03

2015-06-22

王斌（1980－），女，吉林敦化人，綏化學院食品與制藥工程學院講師，碩士，研究方向：天然藥物質量評價、藥用蕈菌活性成分及藥學。

黑龍江省教育廳科學技術研究項目（12543082）；綏化市科技計劃項目（KJZD20120081）；綏化學院“天然藥物與食藥用菌質量評價及功能保健品開發(fā)研究團隊”階段性研究成果。