某雞場沙門氏菌病病原的分離、鑒定及藥敏試驗

王望寶，劉素曼，占志鵬，羅明華

（修水縣畜牧水產(chǎn)局,江西九江 332400）

某雞場沙門氏菌病病原的分離、鑒定及藥敏試驗

王望寶，劉素曼，占志鵬，羅明華

（修水縣畜牧水產(chǎn)局,江西九江 332400）

江西省修水縣某雞場于2014年10月9日送檢6羽12日齡自然發(fā)病的雛雞，經(jīng)病理剖檢，初步診斷為雞白痢沙門氏菌病。剖檢后從其大腦、肝臟中分離出1株沙門氏菌，經(jīng)生化試驗鑒定為雞白痢沙門氏菌。藥物敏感性試驗結(jié)果表明：細(xì)菌對卡那霉素、環(huán)丙沙星、氯霉素、氟哌酸、呋喃妥因、頭孢唑啉、氧氟沙星等藥物敏感；對青霉素、四環(huán)素、林可霉素、強力霉素、桿菌肽、多粘菌素、苯唑西林、阿莫西林、萬古霉素、克林霉素等藥物耐藥；對頭孢曲松表現(xiàn)為中度敏感。

雞；沙門氏菌；生化試驗；藥敏試驗

雞沙門氏菌病是由某些特定血清型的沙門氏菌所引起的一類傳染病的總稱，對養(yǎng)雞生產(chǎn)及食品衛(wèi)生具有較大危害。該病在雛雞和成年雞中所表現(xiàn)的癥狀和經(jīng)過有顯著的差異。出殼后感染的雛雞,多在孵出后幾天才表現(xiàn)出明顯癥狀，病雛精神萎靡,絨毛松亂,兩翼下垂,縮頸閉眼昏睡,不愿走動,擁擠在一起，拉白色稀糞,肛門周圍絨毛被糞便污染。

1 發(fā)病情況

修水縣某雞場雛雞7日齡左右開始陸續(xù)發(fā)病，病雞表現(xiàn)為精神沉郁、拉白痢，發(fā)病死亡高峰為9～15日齡，死淘率為20%。剖檢6羽?。ㄋ溃╇r雞，病理變化主要表現(xiàn)為肝臟腫大，腎臟有多量白色尿酸鹽沉積，部分病死雛雞心肌有細(xì)小白色結(jié)節(jié)。為確診，我們對送檢樣進行了病原分離、鑒定及藥敏試驗，現(xiàn)報告如下。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 送檢材料。6羽12日齡的病（死）雛雞。

2.1.2 培養(yǎng)基。營養(yǎng)肉湯、普通營養(yǎng)瓊脂、煌綠瓊脂平板、半固體培養(yǎng)基、血液瓊脂平板、麥糠凱瓊脂平板、伊紅美藍平板、SS瓊脂、MR、V-P、三糖鐵瓊脂、三糖鐵瓊脂斜面等常用培養(yǎng)基均按常規(guī)方法配制和保存。

2.1.3 微量生化反應(yīng)管。生化反應(yīng)管由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)藥敏試紙片。標(biāo)準(zhǔn)藥敏試紙片由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。

2.2 實驗方法

2.2.1 分離培養(yǎng)。無菌操作分別從病雞的腦部和肝臟取樣，畫線接種到普通瓊脂平板上，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。

2.2.2 鑒別培養(yǎng)。從普通瓊脂平板上挑取菌落特征明顯的細(xì)菌接種于普通瓊脂斜面上，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。用接菌環(huán)挑取純培養(yǎng)物接種到血液瓊脂平板上，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h，并觀察細(xì)菌的形態(tài)及溶血現(xiàn)象。用接菌環(huán)挑取純培養(yǎng)物分別接種到麥糠凱、伊紅美藍、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂選擇培養(yǎng)基上，置37℃恒溫培養(yǎng)24h，并觀察細(xì)菌生長情況。

2.2.3 染色鏡檢。挑取上述麥糠凱瓊脂平板上單個可疑菌落制成涂片，革蘭氏染色，油鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)。

2.2.4 運動性檢查。半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法：以滅菌接種針蘸取純培養(yǎng)物，垂直穿刺接種于半固體培養(yǎng)基的瓊脂柱中，置37℃恒溫箱培養(yǎng)基24 h，然后取出檢查。

2.2.5 生化試驗。用接菌環(huán)挑取純培養(yǎng)物涂片，用膠頭滴管吸取一滴蒸餾水滴于上面，用另一膠頭滴管滴加一滴3%過氧化氫，觀察有無大量氣泡產(chǎn)生。用接菌針挑取純培養(yǎng)物穿刺接種于三糖鐵瓊脂斜面，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。觀察培養(yǎng)基斜面、底面的顏色。用接菌針挑取麥糠凱瓊脂斜面上生長良好的菌落接種于微發(fā)酵管中觀察結(jié)果。

2.2.6 藥敏試驗。挑取純培養(yǎng)物接種于營養(yǎng)肉湯中，置37℃恒溫?fù)u床振蕩搖菌16h,至營養(yǎng)肉湯變渾，試管底出現(xiàn)多量絮狀沉淀。采用紙片法，用無菌棉簽把營養(yǎng)肉湯細(xì)菌培養(yǎng)物均勻涂抹于麥糠凱瓊脂平板上，晾干后按一定的距離間隔貼上藥敏紙片，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。觀察結(jié)果，并測量抑菌圈的直徑，記錄結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 分離結(jié)果

從6羽12日齡的病（死）雛雞的大腦、肝臟分離出1株致病菌。

3.2 培養(yǎng)特征、形態(tài)

將細(xì)菌分別接種在普通瓊脂、煌綠瓊脂、鮮血瓊脂、營養(yǎng)肉湯、SS瓊脂、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)37℃恒溫培養(yǎng)24h后，在普通瓊脂平板上長出圓形、邊緣整齊、濕潤、稍隆起的光滑菌落。在煌綠瓊脂上菌落呈現(xiàn)白色并有一個紅色的暈環(huán)。在鮮血培養(yǎng)基平板上菌落特征與普通瓊脂平板上相同，未見溶血現(xiàn)象。在營養(yǎng)肉湯中肉湯輕度混濁，管底有絮狀沉淀、無菌膜和菌環(huán)。在SS瓊脂平板上生長出無色半透明、中間帶黑色的菌落，其大小、形狀與血平板相同。在伊紅美藍瓊脂平板上生長出少量、無色透明、有熒光的菌落。

3.3 細(xì)菌染色特性及運動性檢查

純培養(yǎng)物進行涂片染色鏡檢，見有革蘭氏陰性大小約為2mm左右的細(xì)小桿菌，單在或成對排列；不形成莢膜及芽孢。細(xì)菌半固體穿刺培養(yǎng)法檢查無運動性。

3.4 生化試驗結(jié)果

表1 細(xì)菌生化特性結(jié)果

細(xì)菌酶觸試驗結(jié)果沒有產(chǎn)生大量氣泡，表明觸酶試驗為陰性反應(yīng)。

經(jīng)37℃恒溫箱培養(yǎng)24h后，細(xì)菌在三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基沒有呈現(xiàn)紅色，而底面都呈黃色，不產(chǎn)生硫化氫。

分離出的細(xì)菌發(fā)酵鳥氨酸、賴氨酸、葡萄糖、甘露醇、木糖；不發(fā)酵精氨酸、苯丙氨酸、水楊酸、麥芽糖、果糖、鼠李糖、蕈糖、蔗糖；不能利用尿素、枸櫞酸鹽、山梨醇、硝酸鹽；靛基質(zhì)、MR、V-P呈陰性；不產(chǎn)生硫化氫。

3.5 藥敏試驗結(jié)果

藥敏試驗結(jié)果表明雞白痢菌對環(huán)丙沙星、卡那霉素、氯霉素、氟哌酸、呋喃妥因、頭孢唑啉、氧氟沙星等藥物敏感；對青霉素、四環(huán)素、林可霉素、強力霉素、桿菌肽、多粘菌素、苯唑西林、阿莫西林、萬古霉素、克林霉素等藥物耐藥；對頭孢曲松表現(xiàn)為中度敏感（見表2）。

表2 細(xì)菌藥敏試驗結(jié)果mm

4 小結(jié)與討論

經(jīng)細(xì)菌的初次分離后，觀察細(xì)菌在選擇培養(yǎng)基生長的情況和特性及細(xì)菌的染色鏡檢可初步鑒定該致病菌為沙門氏菌。接種的半固體培養(yǎng)基，細(xì)菌僅沿穿刺生長，不具運動性。沙門氏菌中不具運動力的只有雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌。根據(jù)已知雞白痢沙門氏菌與雞傷寒沙門氏菌生化結(jié)果有差別的試劑進行鑒定，結(jié)果大部分與雞白痢沙門氏菌相符。由此可以確診該場所送的雛雞發(fā)生的疾病是雞白痢沙門氏菌病。

從藥敏試驗結(jié)果可以看出，本次分離出來的細(xì)菌對在雞病防治中常用的一些藥物產(chǎn)生了耐藥性。因此對雞白痢的治療，最好是在做完藥敏試驗后再選擇性用藥。經(jīng)過病程的跟蹤了解到，該場在做完藥敏實驗后，選擇了卡那霉素、慶大霉素等氨基糖苷類藥物來投藥治療發(fā)病雞，效果顯著。

與其他細(xì)菌性疾病一樣，雞白痢和禽傷寒可通過幾種途徑傳播。受感染的禽是該病綿延與傳播的最重要方式。在早期的調(diào)查研究中，人們就認(rèn)識到被感染種蛋在這兩種疾病的傳播中起著主要作用。感染禽不僅將疾病傳給同代禽，而且還經(jīng)蛋傳給下一代，其原因一是蛋在母禽排出時即污染該菌，二是在排卵之前，卵泡中即已經(jīng)存在雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌。后者可能是經(jīng)蛋傳播的主要方式。雞白痢沙門氏菌的其他傳播方式還有通過蛋殼進入蛋內(nèi)和通過污染的飼料傳播，但此兩種方式似乎不太重要。

1004-2342（2015）02-0042-02

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2015-03-18）