帥放文，王向峰，雷玉萍，肖江，曹榮，彭麗娟

(湖南省藥用輔料工程技術(shù)研究中心有限公司，長(zhǎng)沙 410331)

沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究

帥放文，王向峰，雷玉萍，肖江，曹榮，彭麗娟

(湖南省藥用輔料工程技術(shù)研究中心有限公司，長(zhǎng)沙 410331)

研制了沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。依據(jù)國(guó)家《一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)規(guī)范》，采用高效液相色譜(HPLC)法和差示掃描量熱(DSC)法對(duì)沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行聯(lián)合定值，進(jìn)行了相應(yīng)的不確定度評(píng)定。研制的沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果為(99.8±0.5)%(k=2，P=0.95)。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于相關(guān)藥品生產(chǎn)及使用單位的質(zhì)量控制和分析方法確認(rèn)評(píng)價(jià)。

沒(méi)食子酸丙酯；純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；高效液相色譜法；差示掃描量熱法

沒(méi)食子酸丙酯因其具有較強(qiáng)的抗氧化能力，在食品、醫(yī)藥化學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。目前市售的沒(méi)食子酸丙酯工作對(duì)照品雖然有多個(gè)，但尚無(wú)國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，不利于該品種的質(zhì)量控制和分析方法確認(rèn)研究。隨著沒(méi)食子酸丙酯生產(chǎn)廠家的增加和使用范圍的擴(kuò)大，該品種的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)需求逐步增加。為滿足市場(chǎng)需求，研制沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有廣泛的市場(chǎng)價(jià)值。根據(jù)我國(guó)一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)規(guī)范和國(guó)家計(jì)量相關(guān)法規(guī)［1-3］，采用高效液相色譜法［4-5］(HPLC)和差示掃描量熱法［6-7］(DSC)完成了對(duì)沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)聯(lián)合定值，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值的不確定度評(píng)估的數(shù)學(xué)模型，克服一種定值方法的技術(shù)缺陷，保證了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。筆者研制的沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，屬計(jì)量范疇，具備溯源性與量值傳遞功能，可在國(guó)際交流中使用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：U3000型，美國(guó)戴安公司；

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：UV-2450型，日本島津公司；

紅外光譜儀：Spectrum-65型，美國(guó)PerkinElmer公司；

核磁共振儀：Varian INOVA-300型，美國(guó)瓦里安公司；

質(zhì)譜儀：Bruker Amazon X型，美國(guó)布魯克·道爾頓公司

高分辨質(zhì)譜儀：Agilent 6520 Q-TOF型，美國(guó)安捷倫公司；

沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：自制；

甲醇：色譜級(jí)，德國(guó)Merck公司；

實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物的制備

采用高純沒(méi)食子酸丙酯為原料，以水為溶劑，水浴加熱80℃使其溶解后，保溫30 min，濾過(guò)，在0℃的條件下重結(jié)晶5 h，過(guò)濾后，在45℃，-0.085 MPa下減壓干燥8 h，經(jīng)研磨過(guò)篩，混勻后即得候選標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

1.3 定性分析

采用紅外光譜、紫外光譜、質(zhì)譜、核磁氫譜、核磁碳譜和高分辨質(zhì)譜對(duì)沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主成分進(jìn)行定性分析。

1.4 定值分析

采用高效液相色譜法和差示掃描量熱法兩種不同原理的方法對(duì)沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值分析。

1.4.1 高效液相色譜條件

色譜柱：WondasilTMC柱色譜柱(250 mm×4.618mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.1%乙酸-甲醇(體積比為40∶60)；流量：1.0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.4.2 DSC條件

精密稱取沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品2～4 mg，置于40 μL標(biāo)準(zhǔn)鋁坩堝中。壓蓋，置于DSC儀中，以空的40 μL標(biāo)準(zhǔn)鋁坩堝作為參比，控制升溫速率為1.0℃／min，升溫區(qū)間為135～155℃，記錄DSC熱流值峰面積，采用分析軟件計(jì)算其化學(xué)純度。

1.5 雜質(zhì)分析

1.5.1 水分測(cè)定

采用卡爾-費(fèi)休法［8］進(jìn)行水分的測(cè)定。

1.5.2 熾灼殘?jiān)臏y(cè)定

采用《中國(guó)藥典》2010版附錄ⅧN的熾灼殘?jiān)鼨z查法進(jìn)行測(cè)定。

1.6 均勻性檢驗(yàn)

根據(jù)JJF1006-1994［9］進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性檢驗(yàn)，采用高效液相色譜法測(cè)定樣品，以面積歸一化法計(jì)算沒(méi)食子酸丙酯的含量，并以含量測(cè)定結(jié)果作為樣品均勻性的考察指標(biāo)。隨機(jī)抽取沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品15瓶，每瓶取樣3次，取樣量為10 mg，共45份樣品，進(jìn)行瓶間和瓶?jī)?nèi)均勻性檢驗(yàn)，對(duì)瓶?jī)?nèi)和瓶間兩組測(cè)定值的方差進(jìn)行F檢驗(yàn)。

1.7 穩(wěn)定性考察

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性是衡量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性的另外一個(gè)重要參數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性與貯存條件有關(guān)，短期穩(wěn)定性與樣品運(yùn)輸過(guò)程中的外部因素有關(guān)。根據(jù)JJF1006-1994［9］，將分裝于棕色西林瓶中的密封樣品，放置于規(guī)定的存儲(chǔ)環(huán)境中，進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察，在不同時(shí)間點(diǎn)(0，1，3，6，9，12月)隨機(jī)選取5瓶，每瓶取樣1份。采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，并以面積歸一化法計(jì)算含量。分別采用t檢驗(yàn)及直線擬合法對(duì)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，以確定樣品的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與討論

2.1 定性分析

沒(méi)食子酸丙酯結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

圖1 沒(méi)食子酸丙酯結(jié)構(gòu)式

沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的紅外圖譜與沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)紅外圖譜一致；UV(甲醇)λmax：206 nm；ESI-MSm／z：212［ M-H］-；高分辨質(zhì)譜：測(cè)得相對(duì)分子質(zhì)量為212.064 0，與其相對(duì)分子質(zhì)量相符；

2.2 定值分析

采用差示掃描量熱法、高效液相色譜法(HPLC-UV)對(duì)沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。兩種不同原理定值方法對(duì)沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的聯(lián)合定值，可避免一種方法可能帶來(lái)的技術(shù)缺陷。建立不同技術(shù)原理不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型，為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度評(píng)價(jià)提供了科學(xué)依據(jù)。圖2為沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)高效液相色譜圖，圖3為沒(méi)食子酸丙酯差示掃描量熱法圖。

圖2 沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖

圖3 沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的DSC譜圖

表1、表2為沒(méi)食子酸丙酯定值結(jié)果。

表1 沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)HPLC純度測(cè)定結(jié)果 %

表2 沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)DSC純度測(cè)定結(jié)果 %

采用科克倫準(zhǔn)則、狄克遜準(zhǔn)則和格布拉斯檢驗(yàn)對(duì)定值數(shù)據(jù)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明測(cè)試數(shù)據(jù)無(wú)異常值。以t檢驗(yàn)法，評(píng)估了兩種方法的一致性，結(jié)果表明兩種方法一致性良好。該批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度值為兩種定值方法的算術(shù)平均值，即99.8%。

2.3 均勻性考察

隨機(jī)抽取沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品15瓶，每瓶取樣3次，取樣量為10 mg，共45份樣品，采用HPLC法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性檢驗(yàn)結(jié)果 %

根據(jù)表3數(shù)據(jù)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，計(jì)算得測(cè)定結(jié)果的總平均值為99.927%，組內(nèi)差方和，組間差方和，F(xiàn)=1.18，F(xiàn)0.05(14，30)=2.04，F(xiàn)＜F0.05(14，30)，說(shuō)明樣品均勻性好。

2.4 穩(wěn)定性考察

樣品長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果列于表4。t檢驗(yàn)結(jié)果表明，樣品在(30±2)℃下儲(chǔ)存12個(gè)月，沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量未發(fā)生顯著變化。因此樣品可以(30±2)℃下穩(wěn)定儲(chǔ)存12個(gè)月。

表4 沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果

2.5 不確定度評(píng)定

2.5.1 水分和熾灼殘?jiān)鼫y(cè)定引入的不確定度

通過(guò)水分和熾灼殘?jiān)己抗烙?jì)，得水分測(cè)定引入的不確定度為uwater=0.13%，熾灼殘?jiān)鼫y(cè)定引入的的不確定度uash=0.02%。

2.5.2 不均勻性引入的相對(duì)不確定度

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性不確定度按照方差分析法進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明該批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性良好。樣品不均勻性引入的不確定度：

2.5.3 穩(wěn)定性引入的不確定度

有效期t=12個(gè)月的長(zhǎng)期穩(wěn)定性的不確定度：

2.5.4 DSC法引入的不確定度

差示掃描量熱法定值的不確定度由5部分組成［10-11］：樣品重復(fù)性測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)不確定度(uA1)；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)銦的熔融焓測(cè)量重復(fù)性(uB1)、天平的稱量誤差(uB2)、儀器的溫度誤差(uB3)、儀器的摩爾熔融熱焓誤差(uB4)等引起。差示掃描量熱法定值的不確定度見(jiàn)表5。

由于上述樣品測(cè)定的4個(gè)不確定度分量產(chǎn)生的原因不同，所以彼此線性無(wú)關(guān)。根據(jù)JJF1059-1999［12］，其合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2由各分量相對(duì)不確定度合成計(jì)算：

表5 DSC檢測(cè)分析方法的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度評(píng)定結(jié)果

則DSC測(cè)量引入的不確定度uDSC：

式中：P——DSC測(cè)定的沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度，%；

2.5.5 高效液相色譜法引入的不確定度

高效液相色譜定值的不確定度由3部分組成：

(1)A類標(biāo)準(zhǔn)不確定度：采用高效液相色譜法定值測(cè)量計(jì)算得到單次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)偏差u3＝0.017%。

(2)B類不確定度：雜質(zhì)響應(yīng)引入的不確定度u4＝0.15%。

(3)檢測(cè)線性引入的不確定度：儀器在檢測(cè)過(guò)程中未超出沒(méi)食子酸樣品的線性范圍，因此檢測(cè)線性引入的不確定度可忽略。

液相色譜分析引入的不確定度：

2.6 合成不確定度

綜上，合成得沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)量不確定度：

置信概率95%下，取包含因子k=2，擴(kuò)展不確定度：

該批沒(méi)食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果：

3 結(jié)論

采用HPLC法和DSC法對(duì)沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值，避免了一種原理方法可能帶來(lái)的技術(shù)缺陷?？疾炝藰?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性和穩(wěn)定性，該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)符合均一性和穩(wěn)定性的要求。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已通過(guò)評(píng)審，獲準(zhǔn)成為國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。研制的沒(méi)食子酸丙酯純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是國(guó)內(nèi)首創(chuàng)，能適應(yīng)多種測(cè)量方法，可以促進(jìn)和規(guī)范國(guó)內(nèi)沒(méi)食子酸丙酯的使用和產(chǎn)品的檢驗(yàn)，也可以擴(kuò)大國(guó)際互認(rèn)范圍，同時(shí)對(duì)保證有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)供應(yīng)、量值傳遞以及質(zhì)量控制具有現(xiàn)實(shí)意義。

［1］ JJG 1006-1994 中華人民共和國(guó)一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)規(guī)范［S］.

［2］ ISO Guide 35 認(rèn)證一般原則與統(tǒng)計(jì)原則［S］.

［3］ 全浩，韓永志，賴喜平，等.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及應(yīng)用技術(shù)［M］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［4］ SN/T 1785-2006 進(jìn)出口化妝品中沒(méi)食子酸丙酯的測(cè)定［S］.

［5］ 龔雪云，張磊，李華岑.高效液相色譜法測(cè)定飼料中的沒(méi)食子酸丙酯［J］.光譜實(shí)驗(yàn)室. 2011(4): 1 969-1 971.

［6］ 王蕾，倪捷兒，張新波，等.差示掃描量熱法測(cè)定7種藥物純度［J］.江蘇藥學(xué)與臨床研究，2005，13(5): 30-32.

［7］ 周政政，郭永輝，楊德智，等.苦杏仁苷純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制和純度標(biāo)準(zhǔn)值及不確定度分析方法研究［J］.醫(yī)學(xué)導(dǎo)報(bào). 2013，23(3): 1-4.

［8］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［9］ JJF 1006-1994 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范［S］.

［10］ 郭永輝，周浩輝，徐維盛，等.差示掃描量熱法對(duì)芝麻酚純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值 [J]. 化學(xué)分析計(jì)量，2011，20(6): 4-7.

［11］ 陳青，魏伯榮，包德君，等. 差示掃描量熱法測(cè)定防老劑D純度的不確定度評(píng)定[J]. 分析儀器，2007(3): 49-52.

［12］ JJF 1059-1999 測(cè)量不確定度平定與表示［S］.

獨(dú)立第三方食品安全檢測(cè)站在京成立

全國(guó)健康產(chǎn)業(yè)工作委員會(huì)食品安全宣教中心不久前在京宣布成立獨(dú)立的第三方食品安全檢測(cè)站。該委員會(huì)秘書(shū)長(zhǎng)李志海表示，公眾對(duì)任何食品存疑，可直接和該檢測(cè)站聯(lián)系，委托檢測(cè)，并公示結(jié)果。

李志海表示，該檢測(cè)站目前設(shè)立在北京，主要檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留、重金屬、微生物、添加劑是否超標(biāo)等項(xiàng)目。日常食用的牛奶、蔬菜、水果、糧食、肉類產(chǎn)品等都在檢測(cè)范圍之內(nèi)。除了接受社會(huì)公眾的委托檢測(cè)之外，檢測(cè)站還會(huì)不定期組織一些隨機(jī)檢測(cè)活動(dòng)，并發(fā)布獨(dú)立檢測(cè)報(bào)告。據(jù)悉，檢測(cè)站使用國(guó)產(chǎn)頂級(jí)設(shè)備，有國(guó)內(nèi)知名食品安全專家組成的專家團(tuán)。

據(jù)介紹，第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)作為中介服務(wù)類機(jī)構(gòu)為社會(huì)提供各項(xiàng)檢測(cè)服務(wù)并出具檢測(cè)報(bào)告，報(bào)告有利于幫助公眾了解真相，有的檢測(cè)報(bào)告可作為公眾維權(quán)的相關(guān)證據(jù)，但不具有法律效力，不可用于社會(huì)公正和法律訴訟。

（儀器信息網(wǎng)）

Development of Propylgallate Certified Reference Material

Shuai Fangwen， Wang Xiangfeng， Lei Yuping， Xiao Jiang， Cao Rong， Peng Lijuan
(Hunan Engineering Research Center for Pharmaceutical Excipients Co.，Ltd.， Changsha 410331， China)

Propylgallate certified reference material was developed. According to national Technical Norm of Primary Reference Material，the purity of propylgallate was determined by combined value assignment of high performance liquid chromatography (HPLC) and differential scanning calorimetry (DSC). The standard value and uncertainty of propylgallate CRM was (99.8±0.5)% (k=2，P=0.95). The purity of propylgallate could be used for pharmaceutical production，quality control and confirm evaluation of analysis method.

propylgallate; reference material; high performance liquid chromatography; differential scanning calorimetry

O657

：A

：1008-6145(2015)03-0005-04

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.03.002

聯(lián)系人：曹榮；E-mail: 510776817@qq.com

2015-02-02