史曉梅 陳士恒 章 晴 楊永壇

分散固相萃取－氣相色譜法快速測定食用植物油中66種農(nóng)藥殘留

史曉梅 陳士恒 章 晴 楊永壇

（中糧營養(yǎng)健康研究院營養(yǎng)健康與食品安全北京市重點實驗室，北京 102209）

建立分散固相萃取法結(jié)合氣相色譜技術(shù)同時快速測定食用植物油中有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯66種農(nóng)藥殘留的方法。樣品經(jīng)乙腈溶劑3次提取后，使用PSA（Primary Secondary Amine，N－丙基乙二胺）和C18分散固相萃取凈化，提取溶液經(jīng)氮吹濃縮過濾后一部分注入氣相色譜－電子捕獲檢測器檢測，另一部分經(jīng)氣相色譜－火焰光度檢測器檢測。樣品在0.08、0.16和0.40 mg／kg添加水平的回收率試驗中，平均回收率為62.3%～112.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于8.6%，檢出限在0.001～0.018 mg／kg之間，基本滿足國內(nèi)外對食用植物油中農(nóng)藥最低殘留限量的標(biāo)準(zhǔn)要求。

有機磷農(nóng)藥 有機氯農(nóng)藥 擬除蟲菊酯農(nóng)藥 分散固相萃取 植物油

食用植物油是人類生活的必需消費品，其安全問題直接關(guān)系到消費者的身體健康。油料作物在生長過程中頻繁使用有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥，其殘留危害也可能影響到植物油的安全性，近年來越來越受到廣泛關(guān)注［1］。植物油中農(nóng)藥殘留量的確證檢測十分重要，我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2014規(guī)定了植物油中多種農(nóng)藥的最大殘留量（MRL）［2］，許多發(fā)達(dá)國家及國際組織對油料中農(nóng)藥殘留限量制定了嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，例如歐盟對大多數(shù)農(nóng)藥采用方法檢出限作為MRL［3］。

食用植物油中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測時，必須盡可能的除去基質(zhì)中脂肪、色素及其他高分子量的干擾物，否則基質(zhì)干擾物會污染檢測儀器，降低儀器使用壽命。國內(nèi)外研究植物油中農(nóng)藥殘留的前處理方法主要有液液萃?。↙LE）、固相萃?。⊿PE）、基質(zhì)固相分散法（MSPD）、凝膠滲透色譜（GPC）等方法［4－9］。這些方法中有些操作繁瑣，有些只針對特定農(nóng)藥種類，故當(dāng)測定多種類型的農(nóng)藥殘留時，需要采用不同的前處理方法，因此也大大增加了檢測成本。QuEChERS方法和在線GPC系統(tǒng)可以簡便、快速的處理完成植物油樣品，還可以同時檢測多種農(nóng)藥殘留［10］。

我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2014中規(guī)定了植物油中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，但是本方法的研究目的在于建立一種能同時快速測定66種有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留的方法。樣品經(jīng)乙腈溶液提取后，采用分散固相萃取的方式凈化，C18凈化劑的使用可以有效去除油基質(zhì)，保護(hù)色譜柱不被基質(zhì)堵塞，進(jìn)而有效避免檢測儀器的污染損傷。PSA可以吸附樣品基質(zhì)中的強極性雜質(zhì)、有機酸和色素等干擾物，同樣避免色譜柱和檢測儀器的損傷。本研究建立的方法提高了分析速度和效率，對于滿足食用植物油中多農(nóng)藥殘留的日常檢測提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。

無水硫酸鎂和無水氯化鈉：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；弗羅里硅土、中性氧化鋁、N－丙基乙二胺（PSA）、C18：北京BESEP 公司；乙腈、甲醇、正己烷：色譜純，美國Fisher公司。大豆油、花生油、玉米油、香油、葵花籽油：市售。

1.2 儀器與設(shè)備

7890A氣相色譜儀：美國安捷倫公司；GC－2010 Plus氣相色譜儀：日本島津公司；TG 16－II臺式高速離心機：長沙平凡儀器儀表公司；HGC－24A氮吹儀：天津恒奧科技發(fā)展有限公司：QL－902旋渦混合器：海門其林貝爾儀器制造有限公司。

1.3 樣品前處理

提?。喝? g均勻植物油樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈提取液和5 g氯化鈉，渦旋振蕩2 min后，8 000 r／min 離心5 min，將上層提取溶液轉(zhuǎn)移到另一個離心管中，樣品中再分別加入5 mL乙腈，重復(fù)2次，合并3次提取溶液。

凈化：將10 mL提取溶液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管，加入240 mg C18、240 mg PSA吸附劑和720 mg無水硫酸鎂，渦旋振蕩2 min后，8 000 r／min離心5 min。

濃縮：將1.0 mL已凈化的提取溶液轉(zhuǎn)移到10 mL離心管，在40℃條件下用氮氣濃縮吹干，1.0 mL正己烷復(fù)溶，樣品過0.22μm有機濾膜后，待GCECD分析；將4 mL已凈化的提取溶液轉(zhuǎn)移到有準(zhǔn)確刻度的離心管，在40℃條件下用氮氣濃縮至1.0 mL以下時，使用乙腈定容到1.0 mL，樣品過0.22μm有機濾膜后，待GC－FPD分析。

1.4 儀器條件

有機磷農(nóng)藥：色譜柱DB－5ms（30 m×0.25 mm×0.25μm）；程序升溫：80℃保持1 min，然后以10℃／min升溫至280℃，保持5 min，以20℃／min升溫至300℃，保持18 min；載氣為高純氮氣，恒流流速為1.0 mL／min；進(jìn)樣口溫度：220℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；檢測器溫度：250 ℃；H2流量：75 mL／min，空氣流量：100 mL／min。

有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥：色譜柱：DB－35ms（30 m ×0.25 mm ×0.25μm）；程序升溫：150 ℃保持2 min，然后以10℃／min升溫至300℃，保持18 min；載氣為高純氮氣，恒流流速為1.0 mL／min；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；分流進(jìn)樣，分流比：10∶1；進(jìn)樣量：1 μL；檢測器溫度：320℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 試驗條件的優(yōu)化

2.1.1 提取方法

分別考察了乙腈－氯化鈉、乙腈／正己烷－水、甲醇低溫冷凍提取3種提取方式對目標(biāo)農(nóng)藥添加回收率的影響（如圖1所示）。乙腈正己烷－水提取和甲醇低溫冷凍提取方法的試驗結(jié)果中，艾氏劑、p，p'－滴滴伊和滅蟻靈的回收率偏低（小于60%）。采用乙腈溶液提取植物油中的農(nóng)藥殘留，通過加入一定量的氯化鈉，可以對有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥進(jìn)行充分的提取，而較少溶解植物油基質(zhì)中的干擾物，還可以減少對儀器進(jìn)樣口和色譜柱的損傷，故采用20 mL乙腈分3次提取樣品。

2.1.2 凈化劑的選擇

按照1.3所述的前處理過程，考察4種常用凈化劑對有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥加標(biāo)回收率的影響（圖2）［11－13］。C18凈化吸附劑碳含量較高，可以通過疏水作用，對非極性的組分有較好的吸附效果。食用植物油中非極性的油脂含量最高，因此C18對油脂的去除有十分顯著的效果，同時還可以除去其他一些非極性的雜質(zhì)［14］。PSA是弱陰離子交換吸附劑，它對于樣品中的一些強極性雜質(zhì)、有機酸、色素和金屬離子等具有良好的凈化吸附效果［15］。當(dāng)凈化10 mL的樣品提取溶液時，選擇PSA和C18的使用量均為240 mg，可以取得較好的凈化效果。

圖1 不同提取方式對農(nóng)藥添加回收率的影響

圖2 不同凈化劑對農(nóng)藥添加回收率的影響

2.2 方法的線性范圍和檢出限

在1.4的試驗條件下，66種有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分離良好（見圖3和圖4）。用空白植物油樣品制備樣品空白提取液，作為基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液。將10 mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋，配制成基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.4的條件進(jìn)行測定，以66種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度對相應(yīng)的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得線性方程及相關(guān)系數(shù)。以S／N＝3計算方法中農(nóng)藥的檢出限（LOD），以S／N＝10計算方法農(nóng)藥的定量限（LOQ）。

表1 66種有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表1 （續(xù)）

圖3 34種有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（0.05 mg／kg）

圖4 32種有機磷農(nóng)藥基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（0.05 mg／kg）

2.3 方法的回收率和精密度

為考察方法的準(zhǔn)確度，按照1.3所確定的方法，在相應(yīng)線性范圍內(nèi)進(jìn)行了3個水平（0.08、0.16、0.40 mg／kg）的添加回收率試驗，每個水平做6個平行樣品測定，結(jié)果詳見表2。

表2 部分有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥添加回收試驗的平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.4 樣品的檢測

為了驗證方法的可行性，應(yīng)用本方法對市售植物油樣品進(jìn)行測定，結(jié)果顯示6個植物油樣品均被檢出農(nóng)藥殘留，其中玉米油檢出了七氯，花生油檢出了毒死蜱，大豆油檢出了乙酰甲胺磷，但均未超過植物油中的限量要求。

表3 不同食用植物油樣品檢測結(jié)果／mg／kg

3 結(jié)論

研究建立了分散固相萃?。瓪庀嗌V法測定食用植物油中66種有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的方法，該方法靈敏度能滿足國內(nèi)外食品安全標(biāo)準(zhǔn)中對植物油的最大殘留限量要求。在0.08～0.40 mg／kg的添加水平，平均回收率62.3%～112.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n＝6）不大于8.6%，檢出限是0.001 ～0.018 mg／kg，定量限0.003 ～0.05 mg／kg。本方法簡便快速，采用GC－ECD／FPD作為分散固相萃取技術(shù)后續(xù)的檢測方法，成本低廉，較適用于在基層企業(yè)推廣。

［1］宋丹陽，宮兆晶，李培武，等.我國油料中農(nóng)藥殘留限量與檢測技術(shù)現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢［J］.中國油料作物學(xué)報，2006，28 （3）：375 －379

Song D Y，Gong Z J，Li P W，et al.A review on maximum residue limits and detection techniques for pesticides in oilseeds ［J］.Chinese Journal of Oil Crop Sciences，2006，28（3）：375 －379

［2］GB 2763—2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)－食品中農(nóng)藥最大殘留限量［S］

GB 2763—2014 National food safety standard－Maximum residue limits for pesticides in food［S］

［3］（EU）08－04歐盟食品中農(nóng)藥殘留限量（按食品分類）［S］（EU）08－04 Pesticide residues in food of the European U-nion （by food category）［S］

［4］郭嵐，謝明勇，鄢愛平，等.GPC－GC－MS對食用植物油中多種類型農(nóng)藥殘留的同步測定［J］.分析測試學(xué)報，2009，28（1）：67 －71

Guo L，Xie M Y，Nian A P，et al.Simultaneous determination of multi－types of pesticide residues in edible vegetable oils by GPC －GC －MSMethod ［J］.Journal of Instrumental Analysis，2009，28（1）：67 －71

［5］吳麗華，楊勤元，王虹，等.氣相色譜法測定植物油中多種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的前處理方法及檢測條件研究［J］. 糧食科技與經(jīng)濟(jì)，2011，36（2）：42 －44

Wu L H，Yang Q Y，Wang H，et al.Study on the pretreatment methods and detection conditions for the determination of the residues of pesticides in vegetable oils by gas chromatography［J］.Grain Science and Technology and Economy，2011，36（2）：42 －44

［6］程景，李培武，張文，等.基質(zhì)固相分散－氣相色譜法測定植物油中多種擬除蟲菊酯類及有機磷類農(nóng)藥殘留［J］.中國油料作物學(xué)報，2008，30（3）：346－352

Cheng J，Li P W，Zhang W，et al.Multiresidue determina-tion of pesticides in vegetable oil by matrix solid－phase dispersion and gas chromatography［J］.Chinese Journal of Oil Crop Sciences，2008，30（3）：346 －352

［7］Juan FG，Carmen F，Antonio M，et al.Determination of pesticide residues in olive oil and olives ［J］.Journal of Trendsin Analytical Chemistry，2007，26（3）：239 －251

［8］Li L，Zhou Z Q，Pan CP，et al.Determination of organophosphorus pesticidesin soybean oil，peanut oil and sesame oil by low－temperature extraction and GC－FPD ［J］.Journal of-Chromatographia，2007，66（7）：625 －629

［9］Liu Y H，Shen D Y，Tang F B.Multiresidue determination of organophorous pesticidesin camellia oilby matrix solid－Phase dispersion followed by GC －FPD ［J］.Journal of Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology，2012，89（5）：1057 －1061

［10］阮華，榮維廣，宋寧慧，等.QuEChERS－在線凝膠色譜－氣相色譜－質(zhì)譜法測定植物油中34種農(nóng)藥殘留［J］.分析化學(xué)，2014，42（8）：1110－1116

Ruan H，Rong W G，Song N H，et al.Simultaneous Determination of 34 Pesticide Residues in Vegetable Oil by QuEChERS－on－line Gel Permeation Chromatography－Gas Chromatography－Mass Spectrometry ［J］.Chinese Journal of Analytical Chemistry，2014，42（8）：1110 －1116

［11］田忙雀，吳麗華，楊勤元.固相萃?。瓪庀嗌V法測定食用植物油中多種有機磷［J］.糧油食品科技，2012，20（5）：36 －38

Tian M Q，Wu L H，Yang Q Y.Determination of organophosphorus pesticide residue in vegetable oil by solidphase extraction and gas chromatography［J］.Science and Technology of Cereals，Oils and Foods，2012，20（5）：36 －38

［12］Bienvenida G L，Juan F G，Antonio M D.Sample treatment and determination of pesticide residues in fatty vegetable matrices：A review ［J］.Journal of Talanta，2009，79（2）：109－128.

［13］Elham S，Nor KA，Keivan N.A simple and efficient multi－residue method based on QuEChERSfor pesticides determination in palm oil by liquid chromatography time－offlightmass spectrometry ［J］.Journal of Environmental Monitoring and Assessment，2012，184（9）：5821 －5828

［14］Paula P，Michelangelo A，Dorothea M，et al.Analysis of pesticide residues using the Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe （QuEChERS）pesticide multiresidue method in combination with gas and liquid chromatography and tandem mass spectrometric detection ［J］.Journal of Analytical Bioanalytical Chemistry，2007，389 （6）：1697－1714

［15］Angelika W，Marek B.Determination of pesticide residues in food matrices using the QuEChERS methodology ［J］.Journal of Food Chemistry，2011，125（3）：803 －812.

Rapid Determination of 66 Pesticides Residues in Edible Vegetable Oil by Dispersive Solid Phase Extraction Method－Gas Chromatography

Shi Xiaomei Chen Shiheng Zhang Qing Yang Yongtan
（COFCO Nutrition＆ Health Research Institute，Beijing Key Laboratory of Nutrition Health and Food Safety，Beijing 102209）

A method was established for the quick determination of 66 organophosphorus，organochlorine and pyrethroid pesticides residues in edible vegetable oil，samples were purified by dispersive solid phase extraction（DSPE）method and detected by gas chromatography （with FPD／ECD detector）.Samples were extracted by acetonitrile for three times，and purified by PSA and C18using dispersive solid phase extraction method.After nitrogen flushing concentration and filtration，samples were detected by GC－ECD and GC－FPD.At the fortification level of 0.08，0.16，0.40 mg／kg，the average recoveries ranged from 62.3%to 112.3%，and the relative standard deviations（RSDs，n＝6）were less than 8.6%，limit of detections（LODs）were 0.001～0.018 mg／kg，this method can basically meet the standard request of peptide residue MRLs in edible vegetable oil at home and abroad.

organophosphorus，organochlorine and pyrethroid pesticides，dispersive solid － phase extraction，edible vegetable oil

O657.7

A

1003－0174（2016）07－0132－06

中糧集團(tuán)應(yīng)用基礎(chǔ)項目（2013－C2－F007）

2014－11－21

史曉梅，女，1986年出生，碩士，食品質(zhì)量與安全

楊永壇，男，1971年出生，研究員，食品質(zhì)量與安全