食管鱗癌組織中HIF－1α和EGFR蛋白的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

賀春語

1

胡曉娜

2

王雯

1

劉如

1

劉勁松

1

吳小源

1

王建華

1

(1.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院/河南省腫瘤醫(yī)院放療中心河南鄭州450008;

2.河南省中醫(yī)學(xué)院三附院醫(yī)學(xué)影像科河南鄭州450008)

【摘要】目的研究食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)中HIF－1α、EGFR蛋白的表達(dá)與食管癌病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)(SP)法檢測(cè)116例ESCC組織中HIF－1α、EGFR蛋白的表達(dá)，并分析其與臨床病理因素及患者生存的關(guān)系。結(jié)果HIF－1α與EGFR在ESCC組織中的陽性率分別為63.8%和68.1%，HIF－1α與EGFR均陽性率為50. 9%。HIF－1α蛋白的陽性表達(dá)與T分期相關(guān)(P =0.014)。聯(lián)合檢測(cè)HIF－1α和EGFR蛋白均陽性表達(dá)與浸潤(rùn)深度及臨床分期相關(guān)(P =0.006，0.023)。HIF－1α與EGFR蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r =0.331，P =0.000)。Kaplan－Meier生存分析結(jié)果顯示，EGFR蛋白陽性表達(dá)的ESCC患者生存時(shí)間短(P =0.019)。結(jié)論HIF－1α、EGFR蛋白在ESCC組織中呈高表達(dá)，二者密切相關(guān)，在ESCC發(fā)生發(fā)展中有重要作用，EGFR可作為判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】食管腫瘤;鱗狀細(xì)胞癌;乏氧誘導(dǎo)因子－1α;表皮生長(zhǎng)因子受體;預(yù)后

Relationship between the expression of hypoxia－inducible factor－1α，epidermal growth factor receptor and prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinomaHe Chunyu

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，Hu Xiaona

2

，Wang Wen

1

，Liu Ru

1

，Liu Jinsong

1

，Wu Xiaoyuan

缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor，HIF)是一類重要的缺氧應(yīng)答誘導(dǎo)因子，家族成員HIF－1α與腫瘤多藥耐藥、放療敏感性、血管生成及淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1］。表皮生長(zhǎng)因子受體(epithelial growth factor receptor，EGFR)的過度激活通過下游多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、分裂、增殖并抵抗細(xì)胞凋亡［2］。本文檢測(cè)食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織中HIF－1α和EGFR蛋白表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征及生存之間的關(guān)系，探討對(duì)ESCC發(fā)生發(fā)展及預(yù)后判斷的價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料收集河南省腫瘤醫(yī)院2007年7月至2009年12月臨床資料完整的ESCC病例116例，被檢測(cè)的腫瘤標(biāo)本均為食管癌根治術(shù)后石蠟包埋組織，所有患者均為初治，術(shù)前均未接受新輔助治療。其中男79例，女37例;年齡30～74歲，中位年齡61歲;采用2009年AJCC食管癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分期，T1、T2、T3、T4期分別為6、45、49、16例; N0、N1、N2期分別為58、41、17例;ⅠA期5例，ⅠB期24例，ⅡA期21例，ⅡB 期15例，ⅢA期34例，ⅢB期9例，ⅢC期8例。腫瘤位于胸上段、胸中段、胸下段分別為15、61、40例。高、中、低分化分別為41、49、26例。行術(shù)后放療66例，化療84例。

1.2檢測(cè)方法所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，制成3 μm厚的切片，采用免疫組化SP法進(jìn)行HIF－1α、EGFR染色。兔抗人HIF－1α多克隆抗體、鼠抗人EGFR單克隆抗體;即用型S－P試劑盒，DAB二氨基聯(lián)苯胺顯色劑試劑盒，均購(gòu)自福州邁新公司。免疫組化染色按SP試劑盒操作說明進(jìn)行，以微波修復(fù)法進(jìn)行抗原修復(fù)，工作液濃度均為1∶150。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)HIF－1α、EGFR均以ESCC細(xì)胞漿/胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性細(xì)胞。免疫組織化學(xué)染色以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)特異性染色深淺來進(jìn)行評(píng)分: 0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色;再依據(jù)染色細(xì)胞所占百分比評(píng)分:陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。兩項(xiàng)乘積即為該例免疫組織化學(xué)得分:(－)0 分;(+ )1～2分;(+ + )3～4分;(+ + + )5～6分。其中，(+ )和(+ + )定為弱陽性，(+ + + )定為強(qiáng)陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同臨床特征間同一指標(biāo)比較采用χ2檢驗(yàn)，指標(biāo)相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析;生存資料應(yīng)用Kaplan－Meier表示，并采用Log－rank方法進(jìn)行分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2　結(jié)果

2.1 HIF－1α、EGFR蛋白在ESCC組織的表達(dá)

116例ESCC患者中HIF－1α、EGFR蛋白均過表達(dá)，陽性率分別為63.8%、68.1%，HIF－1α蛋白陽性表達(dá)呈棕黃色，陽性細(xì)胞在癌組織內(nèi)呈灶性/彌漫性分布。EGFR蛋白陽性顆粒位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，但癌巢中央以細(xì)胞核為主，周圍以細(xì)胞漿為主。

2.2 HIF－1α、EGFR蛋白與ESCC臨床病理特征之間的關(guān)系116例患者的ESCC組織中，HIF－1α蛋白的表達(dá)僅與ESCC的浸潤(rùn)深度相關(guān)，T分期越晚，表達(dá)率越高(P＜0.05)，而與性別、年齡、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。EGFR蛋白的表達(dá)與性別、年齡、分期、分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P均＞0.05)，HIF－1α 與EGFR聯(lián)合檢測(cè)顯示二者均陽性表達(dá)與浸潤(rùn)深度及分期有關(guān)(P＜0.05)，見表1。

表1　HIF－1α、EGFR蛋白表達(dá)與ESCC臨床病理特征的關(guān)系(n，%)

2.3 HIF－1α與EGFR蛋白在ESCC組織中表達(dá)的相關(guān)性116例患者的ESCC組織中HIF－1α與EG-FR蛋白均陽性率為50.9%(59/116)，采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)HIF－1α與EGFR蛋白表達(dá)正相關(guān)(r =0.331，P＜0.001)，見表2。

表2　HIF－1α和EGFR表達(dá)的相關(guān)性

2.4 HIF－1α與EGFR蛋白表達(dá)對(duì)ESCC預(yù)后的影響116例ESCC患者1、3、5年生存率分別為92. 1%，53.3%，34.5%，中位生存時(shí)間為34.1月(5～81.4)。EGFR過表達(dá)與OS呈負(fù)相關(guān)，EGFR過表達(dá)的ESCC患者生存時(shí)間較無表達(dá)者明顯縮短(P = 0. 019); HIF－1α表達(dá)陽性組OS較陰性組短，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P =0.124)。HIF－1α和EGFR聯(lián)合檢測(cè)均高表達(dá)組食管鱗癌患者OS更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P =0.029)。見圖1、2、3、4。

圖1　116例食管鱗癌患者總生存曲線

圖2　HIF－1α蛋白表達(dá)的生存曲線

圖3　EGFR蛋白表達(dá)的生存曲線

圖4　HIF－1α和EGFR蛋白共表達(dá)的生存曲線

3　討論

實(shí)體腫瘤體積大于1 mm3時(shí)，自身的血供就不能滿足腫瘤細(xì)胞快速生長(zhǎng)的需要，腫瘤內(nèi)部總處于相對(duì)缺氧的微環(huán)境［3］。HIF－1是由HIF－1α、HIF－1β組成的異二聚體。乏氧時(shí)HIF－1α表達(dá)增加，與HIF－1β聚合，調(diào)節(jié)下游基因，影響腫瘤的血管形成、侵襲、轉(zhuǎn)移及放化療抵抗等。趙富周等［4］發(fā)現(xiàn)HIF－1α表達(dá)與食管癌分級(jí)、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、手術(shù)切緣陽性率正相關(guān)。Zhu等［5］也報(bào)道ESCC組織中HIF－1α表達(dá)與患者分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和預(yù)后明顯相關(guān)。本研究結(jié)果顯示ESCC中HIF－1α陽性表達(dá)率63.8%，其表達(dá)僅與ESCC的浸潤(rùn)深度相關(guān)，T4患者表達(dá)率高達(dá)87.5%。生存分析顯示盡管HIF－1α陰性表達(dá)患者生存時(shí)間優(yōu)于HIF－1α過表達(dá)者，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，HIF－1α能否作為預(yù)測(cè)ESCC預(yù)后的指標(biāo)需要更多大樣本的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

EGFR在眾多惡性腫瘤中都存在過表達(dá)，在ESCC中表達(dá)為30%～80%［6］。國(guó)內(nèi)一項(xiàng)Meta分析證實(shí)EGFR過表達(dá)對(duì)食管鱗癌T分期、血管受侵及生存有預(yù)測(cè)價(jià)值［7］。本研究顯示，EGFR在ESCC中陽性率為68.1%，與性別、年齡、分期、分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)。生存分析顯示EGFR陰性者明顯高于EGFR高表達(dá)者，與報(bào)道一致［7］。本研究初步探索了ESCC中HIF－1α與EGFR關(guān)系，結(jié)果表明HIF－1α與EGFR表達(dá)有呈正相關(guān)的趨勢(shì)?；A(chǔ)研究認(rèn)為缺氧誘導(dǎo)EGFR和其配體的表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)HIF－1α的表達(dá)以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)，促進(jìn)血管生成，HIF－1α表達(dá)又與EGFR表達(dá)形成正反饋［8］。本研究中聯(lián)合檢測(cè)HIF－1α與EGFR，二者均過表達(dá)患者生存期更短，聯(lián)合檢測(cè)HIF－1α與EGFR比單獨(dú)采用HIF－1α 或EGFR可能會(huì)更好地預(yù)測(cè)ESCC患者預(yù)后。

當(dāng)前腫瘤的個(gè)體化治療及分子靶向治療是腫瘤治療最有前景的新方向，筆者發(fā)現(xiàn)HIF－1α、EGFR在ESCC高表達(dá)，可能在ESCC發(fā)生發(fā)展中起重要作用，有助于深入研究ESCC細(xì)胞凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移、放化療耐受的分子水平調(diào)控機(jī)制，同時(shí)為EGFR作為ESCC靶向治療的新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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·論著·

1

，Wang Jianhua

1

(1.Center of Radiation Oncology，the Affiliated Cancer Hospital of Zhengzhou University/Henan Cancer Hospital，Zhengzhou 450008，China; 2.Department of Medical Image，the Third Affaliated Hospital of Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China)

【Abstract】Objective To investigate the relationship between the expression of epithelial growth factor receptor(EGFR)，hypoxia－inducible factor－1α(HIF－1α)and clinical characteristics and prognosis in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC).Methods 116 cases of ESCC were analyzed about their clinical pathology and survival data.The expression of HIF－1α，EGFR were detected by immnohistochemical staining.Results The positive rates of high expression of HIF－1α and EGFR were 63.8% and 68.1%.Positive rate of co－expression of HIF－1α and EGFR was 50.9%.The expression of HIF－1α was correlated with T stage(P = 0.014)，and the co－expression was correlated with T and TNM stage(P = 0.006，0.023).Spearman rank correlation analysis illustrated that there was a significant correlation between HIF－1α and EGFR.Kaplan－Meier survival analysis showed that high－expression of EGFR were associated with poor survival.Conclusion HIF－1α and EGFR played an important role in the development and progression of ESCC，and show intimate relationship with biological behavior.EGFR may be used as an important index to evaluate the prognosis of esophageal carcinoma.

【Key words】esophageal neoplasm; squamous cell carcinoma; hypoxia－inducible factor－1α; epithelial growth factor receptor; prognosis

(收稿日期:2015－03－15)

通訊作者:劉勁松，E－mail: 655088068@163.com。

基金項(xiàng)目:河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(201003125)。

doi:10.3969/j.issn.1004－437X.2015.05.001

【中圖分類號(hào)】R 735.1