5種洗劑類醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑微生物限度檢查方法驗(yàn)證

劉廣楨，張冕，胡文紅，國明

(山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 濟(jì)南 250101)

摘要：目的建立5種洗劑類醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑微生物限度檢查法。方法細(xì)菌、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證分別采用平皿法、培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法；控制菌檢查法的驗(yàn)證分別采用直接接種法、培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法。結(jié)果1種洗劑的細(xì)菌、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)可采用培養(yǎng)基稀釋法，控制菌檢查可采用直接接種法。另4種洗劑的細(xì)菌、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)和控制菌檢查均需采用薄膜過濾法。結(jié)論5種洗劑類醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑微生物限度檢查法均通過驗(yàn)證。

關(guān)鍵詞：醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑；洗劑；微生物限度檢查；方法驗(yàn)證

作者簡介：劉廣楨，男，主管藥師，研究方向：藥品檢驗(yàn)，E-mail：l_guangzhen@sina.com

中圖分類號(hào)：R927.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Validation of microbial limit test for 5 kinds of hospital preparation with lotions

LIUGuang-zhen,ZHANGMian,HUWen-hong,GUOMing

(ShandongInstituteforFoodandDrugControl,Jinan250101,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method of microbial limit test for 5 kinds of hospital preparation with lotions.MethodsThe validation on plate count method,culture medium diluting method and membrane filtration method was conducted in accordance with bacterium count,total combined molds and yeasts count.The validation on routine method,culture medium diluting method and membrane filtration method was conducted in accordance with absence of specified microorganisms.ResultsThe one kind can be tested with culture medium diluting method on bacterium count,total combined molds and yeasts count,and can be tested with routine method on absence of specified microorganisms.The other 4 kinds can be tested with membrane filtration method on bacterium count,total combined molds and yeasts count,and absence of specified microorganisms.ConclusionThe validation results of microbial limit tests of 5 kinds of hospital preparation with lotions met the requirement.

Key words:Hospital preparation;Lotions;Microbial limit test;Validation of method

醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑指醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床需要而市場(chǎng)上沒有供應(yīng)的品種，具有用量小、貯存期短、市場(chǎng)供應(yīng)缺乏、臨床必需等特性。醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑須經(jīng)藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)后方可配制，并須按照規(guī)定進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，包括有效性和安全性指標(biāo)的檢驗(yàn)。其中微生物限度檢查是醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑一項(xiàng)重要的安全性指標(biāo)。

由于醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑種類比較復(fù)雜，藥效成分經(jīng)常具有抑菌作用，其中溶液型制劑中又經(jīng)常添加抑菌劑防止微生物污染。所以常用的微生物限度檢查方法(平皿法)不完全適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑的微生物限度檢查，有必要對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑中的每個(gè)品種的微生物限度檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證，確保其采用的方法適合于微生物限度檢查的要求。本文選取了5種常用的溶液型洗劑類醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，包括1種中藥制劑和4種化學(xué)藥制劑，參照有關(guān)文獻(xiàn)[1～3]，分別對(duì)其不同的微生物限度檢查法進(jìn)行了驗(yàn)證，確定了最佳的微生物限度檢查方法。

1儀器與材料

1.1儀器HFsafe-1200型生物安全柜(上海力申科學(xué)儀器有限公司)；Equinox集菌儀(默克化工技術(shù)有限公司)；CH-4103型恒溫培養(yǎng)箱(伊孚森生物技術(shù)有限公司)。

1.2樣品復(fù)方伸筋洗劑、苯酚樟腦洗劑、復(fù)方酮康唑洗劑、止癢洗劑和復(fù)方間苯二酚洗劑均為山東省內(nèi)各家醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供。

1.3培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號(hào)：130717)和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：140514)均購于北京三藥科技開發(fā)公司；改良馬丁培養(yǎng)基(批號(hào)：3102637)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：3102345)、膽鹽乳糖培養(yǎng)基(批號(hào)：3102534)和pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(批號(hào)：3103696)均購于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.4菌種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、白色念珠菌、銅綠假單胞菌0代凍干菌種均購于中國食品藥品檢定研究院。

2方法[1～3]

2.1菌液的制備按照《中國藥典》2010年版附錄要求制備。

2.2供試液的制備取本品10 mL，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 mL，振搖，制成1∶10的供試液。

2.3細(xì)菌計(jì)數(shù)、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)

2.3.1檢查方法

2.3.1.1平皿法取1∶10的供試液1 mL，注入平皿中，加入培養(yǎng)基，按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

2.3.1.2培養(yǎng)基稀釋法取1∶10的供試液1 mL，分別注入5個(gè)平皿中，每皿中0.2 mL，加入培養(yǎng)基，按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

2.3.1.3薄膜過濾法取1∶10的供試液1 mL，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每次100 mL/膜，共3次，取出濾膜，菌面朝上貼于培養(yǎng)基平板上，按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

2.3.2方法驗(yàn)證按《中國藥典》2010年版采用平皿法、培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法，用規(guī)定的5株菌逐一進(jìn)行驗(yàn)證，每個(gè)供試品均進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，各菌回收率均應(yīng)大于70%。

2.4控制菌檢查

2.4.1檢查方法

2.4.1.1直接接種法取1∶10的供試液10 mL，加至增菌培養(yǎng)基100 mL中，按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)，觀察結(jié)果。

2.4.1.2培養(yǎng)基稀釋法取1∶10的供試液10 mL，加至增菌培養(yǎng)基200 mL中，按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)，觀察結(jié)果。

2.4.1.3薄膜過濾法取1∶10的供試液10 mL，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每次100 mL/膜，共3次，加入增菌培養(yǎng)基100 mL，按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)，觀察結(jié)果。

2.4.2方法驗(yàn)證按《中國藥典》2010年版采用直接接種法、培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法，用規(guī)定的2株菌分別進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證組應(yīng)檢出相應(yīng)控制菌。

3結(jié)果

細(xì)菌計(jì)數(shù)、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證結(jié)果見表1。控制菌檢查驗(yàn)證結(jié)果見表2。

4討論

由于醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑經(jīng)常具有抑菌作用，因此需要采用適宜的方法消除或降低其抑菌作用，使其對(duì)供試品中污染菌的生長無抑制作用或其抑制作用可以忽略不計(jì)，從而保證微生物限度檢查的準(zhǔn)確性。建立驗(yàn)證的方法時(shí)，應(yīng)在科學(xué)性的基礎(chǔ)上，堅(jiān)持簡便易行的原則，避免不必要的浪費(fèi)。微生物限度檢查法由簡到繁的順序?yàn)槠矫蠓ɑ蛑苯咏臃N法、培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法。

本次試驗(yàn)中復(fù)方伸筋洗劑含有地黃、川芎、紅花和荊芥等中藥材，有一定的抑菌作用，細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平皿法有干擾，但其抑菌作用較弱可采用培養(yǎng)基稀釋法就可消除抑菌活性。本次試驗(yàn)中樟腦苯酚洗劑(含樟腦和苯酚)、復(fù)方酮康唑洗劑(含酮康唑、苯甲酸、水楊酸)、止癢洗劑(含水楊酸、薄荷腦和苯酚)、復(fù)方間苯二酚洗劑(含間苯二酚、硼酸和苯酚)為抑菌作用較強(qiáng)的品種，細(xì)菌計(jì)數(shù)、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)采用平皿法和培養(yǎng)基稀釋法均有干擾，需要采用薄膜過濾法才能消除抑菌活性[4～6]。

表1　細(xì)菌計(jì)數(shù)、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證的回收率(%)

表2　控制菌驗(yàn)證的結(jié)果

控制菌檢查中因有增菌培養(yǎng)，很多在細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)有抑菌的品種(如復(fù)方伸筋洗劑)，在控制菌檢查中采用直接接種法就能檢出試驗(yàn)菌。對(duì)抑菌活性較強(qiáng)的品種(如樟腦苯酚洗劑、復(fù)方酮康唑洗劑、止癢洗劑、復(fù)方間苯二酚洗劑)，采用直接接種法和培養(yǎng)基稀釋法均有干擾，需要采用薄膜過濾法才能取得好的效果[7～10]。

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