簡述兔出血癥疫苗的生產(chǎn)流程

方金亮

（遼寧省綏中縣畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)察所125200）

簡述兔出血癥疫苗的生產(chǎn)流程

方金亮

（遼寧省綏中縣畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)察所125200）

目前用于預防兔出血癥的疫苗主要有兔病毒性出血癥組織滅活疫苗、兔出血癥-巴氏桿菌二聯(lián)滅活疫苗和兔出血癥-巴氏桿菌-魏氏梭菌三聯(lián)滅活疫苗。兔出血癥-巴氏桿菌二聯(lián)滅活疫苗最常用。

1 兔出血癥組織滅活疫苗

1.1 種毒

從自然發(fā)病死亡兔中分離鑒定。0.5ml能使青年兔100%死亡。HA效價14log2以上。具有兔病毒性出血癥的典型特征。

1.2 制造要點

選擇非免疫的健康青年兔，人工接種RHDV強毒，接種劑量0.5ml/只，肌肉注射。無菌采取死亡兔的肝臟、脾臟、肺臟，加10倍的滅菌10mmol/L，pH7.4PBS，用組織搗碎機粉碎攪拌，凍融3次。用3層滅菌紗布過濾，收集濾液，可重復1次。測定HA效價達到 1：210以上，加入 0.4%的甲醛（AR 級（， 37℃滅活 24h～48h， 中間每隔2h搖勻1次。獲得的濾液即為組織滅活疫苗。

1.3 質(zhì)量標準

除按 《成品檢驗的有關規(guī)定》檢驗外，進行以下檢驗。

安全檢驗：每批疫苗抽樣3瓶，等量混合后，選擇健康非免疫的青年兔8只，4只接種疫苗，每只接種4ml，皮下或肌肉注射，4只作對照，接種7d后應無不良反應。

效力檢驗：用疫苗免疫1.5～2kg健康青年兔4只，每只皮下或肌肉注射0.5ml，另4只作對照。免疫10～14d后用1：10強毒1ml攻擊，觀察7d，免疫兔應全部健康，對照兔至少死亡3只。

2 兔出血癥-巴氏桿菌二聯(lián)滅活疫苗

2.1 制造要點

RHDV取材、制造與單苗相同。巴氏桿菌選擇兔多殺巴氏桿菌，血清型為1：A型，凍干種毒 （強毒株C51-2或C51-12，中國獸藥監(jiān)察所（。制苗時，將種毒稀釋后接種血清肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，涂片鏡檢，應為純的巴氏桿菌作為種子菌液。取種子液涂布血液瓊脂培養(yǎng)基或血清瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h后，用滅菌的生理鹽水洗下菌苔，涂片純檢，合格后，用比濁法測定細菌數(shù)，再用滅菌生理鹽水將細菌調(diào)到1010/ml，加入0.2%甲醛，37℃滅活24～48h，即為巴氏桿菌滅活菌液。將滅活菌液與RHDV滅活組織液等量混合，即為兔出血癥-巴氏桿菌二聯(lián)滅活疫苗。

2.2 質(zhì)量標準

同兔出血癥組織滅活疫苗。

3 兔出血癥-巴氏桿菌-魏氏梭菌三聯(lián)滅活疫苗

3.1 制造要點

RHDV和巴氏桿菌制備與二聯(lián)苗相同，兔魏氏梭菌菌種接種鮮血瓊脂平板，37℃厭氧培養(yǎng)24h，挑選典型菌落接種厭氧肝湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24h，純檢合格后作為種子液。將種子液接種大瓶肝片肉湯厭氧培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h，鏡檢純度，合格后加入0.4%甲醛，37℃滅活72h，作為魏氏梭菌滅活菌液。將滅活的RHDV，巴氏梭菌和魏氏梭菌分別接種普通肉湯、厭氧肝湯和血液瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48h，無菌生長為合格。將合格的巴氏桿菌菌液和魏氏梭菌菌液等量混合，加入5%的強氧化鋁佐劑，充分混勻，靜置3d，棄1/2上清，再與等量RHDV滅活組織液混合，即為兔瘟-巴氏桿菌-魏氏梭菌三聯(lián)滅活疫苗。

3.2 質(zhì)量標準

無菌檢驗、安全檢驗與RHD組織滅活疫苗相同，效力檢驗增加巴氏桿菌和魏氏梭菌，即：選3月齡以上健康家兔9只，各皮下注射二聯(lián)苗或三聯(lián)苗2ml，經(jīng)21d，5只肌肉注射兔巴氏桿菌A型強毒菌液，4只靜脈注射致死量的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素，同時設立未免疫兔對照，觀察7d，對照組兔應全部死亡，巴氏桿菌組和產(chǎn)氣莢膜梭菌組都應保護3只，疫苗為合格。

3.3 保存與使用

疫苗與4℃保存10個月，10～15℃保存6個月，免疫2月齡以上兔，單苗每只皮下注射1ml，聯(lián)苗每只皮下注射2ml，每6個月進行1次免疫接種，保護期6個月。