趙春艷

（重慶市墊江縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，重慶 408300）

犬細(xì)小病毒病的免疫效果分析

趙春艷

（重慶市墊江縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，重慶 408300）

犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒（CPV）引起的一種高度接觸性急性傳染病，傳染性極強(qiáng)，死亡率極高。近年來(lái)，隨著免疫疫苗的增加，其發(fā)病比例有所下降，但其免疫效果并不理想，影響犬業(yè)發(fā)展。

1 疫苗類型

免疫犬細(xì)小病毒疫苗仍是控制本病的主要方法，選擇合理的疫苗是成功免疫的第一步。疫苗主要分類傳統(tǒng)疫苗和新型疫苗，在傳統(tǒng)疫苗研究上，貓泛白細(xì)胞減少癥病毒（FPV）滅活苗、弱毒苗免疫CPV，但免疫效果遠(yuǎn)不理想；1990年，徐漢坤等研制成細(xì)小病毒細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗并用于免疫試驗(yàn)，其安全性可靠，免疫效果較好。但近幾年，犬細(xì)小病毒出現(xiàn)了抗原漂移、亞型增多及毒株變異，使傳統(tǒng)疫苗免疫效果不理想，進(jìn)而轉(zhuǎn)向基因工程苗和核酸疫苗（NAVs）等新型疫苗的研究，在其研究上，主要集中在結(jié)構(gòu)蛋白VP2和VP1，以CPV的DNA為模板，應(yīng)用PCR 方法擴(kuò)增了全長(zhǎng)VP1 基因，構(gòu)建出CPV核酸疫苗，能使犬免受犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒的感染。

2 免疫程序

制定合理的免疫程序，才能獲得最佳的免疫效果。張加正等以貓?jiān)醇?xì)小病毒苗免疫犬，設(shè)4個(gè)免疫程序?qū)Ω?0只犬進(jìn)行探討，免疫程序1 為：30 日齡犬首次免疫，45 日齡第二次免疫，60 日齡第三次免疫，以后間隔6 個(gè)月一次；免疫程序2 為：60 日齡犬首次免疫，以后間隔6個(gè)月一次；免疫程序3 為：60 日齡犬首次免疫，75 日齡第二次免疫，以后間隔6 個(gè)月一次；免疫程序4 為：產(chǎn)仔前一個(gè)月對(duì)母犬免疫，所生仔犬60 日齡首次免疫，75日齡加強(qiáng)免疫，以后間隔6 個(gè)月一次。結(jié)果表明程序1：發(fā)病犬4只，發(fā)病率13.3%，保護(hù)率86.7%；程序2：發(fā)病數(shù)7只，發(fā)病率23.3%，保護(hù)率76.7%；程序3：發(fā)病犬5只，發(fā)病率16.7%，保護(hù)率83.3%；程序4：發(fā)病犬0只，發(fā)病率0，保護(hù)率100%，明顯優(yōu)于前三種免疫程序。目前臨床中多用犬五聯(lián)苗（或四聯(lián)、六聯(lián)苗）疫苗于42日齡進(jìn)行首免，每間隔3周進(jìn)行二免和三免，每隔半年再加強(qiáng)免疫一次的免疫程序，亦可獲得較好的免疫保護(hù)效果。

3 免疫佐劑

李六金等研究鋁佐劑、W/O油乳劑、W/O/W雙相油乳劑CPV弱毒疫苗對(duì)犬血清中和抗體滴度的影響，結(jié)果表明，雙相油乳劑CPV弱毒苗刺激犬血清抗體滴度最高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，明顯優(yōu)于鋁佐劑、W/O油乳劑的效果；趙世華等研究CPV細(xì)胞毒蜂膠佐劑滅活抗原對(duì)山羊的免疫效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以5 mL/只恒定劑量免疫4 次后，CPV 抗體水平為27（1∶128）；以5 mL/只遞增劑量免疫4次后抗體水平為29（1∶512），明顯高于前者2個(gè)滴度，這可能與蜂膠佐劑的劑量有關(guān)。陳芹等以 CPV VP2 基因?yàn)榛蛎庖叩哪康幕?，以pcDNA3和pcDNAK 質(zhì)粒為載體，以非甲基化的胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸（CpG）為核心的免疫刺激序列為免疫佐劑，構(gòu)建重組質(zhì)粒并免疫畢格犬，結(jié)果表明對(duì)經(jīng)CPV 滅活苗初次免疫的畢格犬，用pcDNAK-VP2C2（含2個(gè)拷貝CpG 基序）質(zhì)粒免疫產(chǎn)生的再次免疫應(yīng)答優(yōu)于pcDNA3-VP2C1（含1個(gè)拷貝CpG 基序）。

4 聯(lián)合免疫

近年來(lái)，犬病呈現(xiàn)多元化、復(fù)雜化的發(fā)生趨勢(shì)。為預(yù)防多種或同種不同血清型、不同周期傳染病，將兩種或兩種以上的抗原進(jìn)行聯(lián)合免疫，呈現(xiàn)出疫增強(qiáng)或無(wú)干擾作用。李六金等從國(guó)外引進(jìn)的犬瘟熱病毒、犬腺病毒-2 型、犬副流感病毒、犬細(xì)小病毒四聯(lián)弱毒疫苗樣品中，分離篩選良好的毒株傳代細(xì)胞培養(yǎng)制成犬五聯(lián)弱毒疫苗，并免疫犬，結(jié)果表明在15d內(nèi)產(chǎn)生免疫力免痊期不低于9個(gè)月，-20℃保存期不低于24個(gè)月，2～8℃保存期9個(gè)月，18～22℃保存60d，各種弱毒苗的抗體滴度無(wú)明顯降低，保護(hù)率達(dá)100%，免疫犬未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。謝之景等用CPV核酸疫苗（pVCPV-VP2）、CPV重組活載體疫苗（CAV2/ CPV）與CPV 弱毒疫苗對(duì)犬進(jìn)行了免疫試驗(yàn)，結(jié)果表明，CAV2/CPV 以及pVCPVVP2 和CAV2/CPV 聯(lián)合免疫犬的抗CPV體液免疫水平和細(xì)胞免疫水平均比用pVCPV-VP2 單獨(dú)免疫犬的體液免疫水平和細(xì)胞免疫水平高，但CAV2/CPV 誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗CPV特異性免疫反應(yīng)仍然比CPV 弱毒疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗CPV 特異性免疫反應(yīng)弱。鄭穎等用CDV囊膜糖蛋白H基因、CPV結(jié)構(gòu)蛋白VP1基因、犬Ⅱ型腺病毒（CAV- 2）F基因分別構(gòu)建了pIRCDV- H，pIRESVP1 和pcCAV-F3 個(gè)真核表達(dá)質(zhì)粒，制成CDV、CPV、CAV三聯(lián)DNA疫苗，經(jīng)純化后混合對(duì)犬進(jìn)行免疫，產(chǎn)生較高的抗體水平，并在一定程度上可抵抗強(qiáng)毒的攻擊。范泉水等研究用12只6月齡犬分別接種含犬瘟熱附著蛋白基因（H）、犬細(xì)小病毒VP1基因和犬腺病毒纖突基因的三個(gè)免疫質(zhì)粒以及三種混合質(zhì)粒，并在接種前和接種后采血，做CDV、CPV、CAV的中和抗體效價(jià)的測(cè)定，結(jié)果表明三種質(zhì)粒單獨(dú)或聯(lián)合肌肉接種犬后，均可刺激機(jī)體產(chǎn)生一定的中和抗體且無(wú)明顯的相互干擾現(xiàn)象。

5 結(jié)語(yǔ)

免疫接種是控制犬細(xì)小病毒病最有效的方法，養(yǎng)殖業(yè)主加強(qiáng)犬只的免疫。對(duì)于獲得最佳的免疫效果：除考慮最佳的免疫程序、疫苗間聯(lián)合使用、免疫佐劑的添加等因素外，還要考慮動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)答能力、疫苗的選擇、免疫途徑、品種差異等。

［1］張加正，董清平，張亞華，等.犬細(xì)小病毒腸炎最佳免疫程序的探討［J］.特產(chǎn)研 究，2000，（2）：50-51.

［2］謝之景，楊松濤，夏咸柱，等.犬細(xì)小病毒核酸疫苗、重組活載體疫苗與弱毒疫苗免疫犬實(shí)驗(yàn)研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，39 （11）：1562-1566.

［3］趙世華，孟憲龍，李向宇，等.犬細(xì)小病毒細(xì)胞毒蜂膠佐劑滅活抗原對(duì)山羊的免疫效果研究［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2010，31 （10）：175-176.