周虹妤裴 磊馮嘉林盛 瑜

（1.無(wú)錫市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇無(wú)錫 214000；2.無(wú)錫出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇無(wú)錫 214000）

禽流感疫苗研究進(jìn)展

周虹妤1裴 磊2馮嘉林1盛 瑜1

（1.無(wú)錫市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇無(wú)錫 214000；2.無(wú)錫出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇無(wú)錫 214000）

免疫預(yù)防是當(dāng)前防控禽流感的主要措施，禽流感疫苗分為全病毒滅活疫苗、減毒活疫苗、核酸疫苗、重組病毒載體疫苗、病毒樣顆粒疫苗和亞單位疫苗等。禽流感易發(fā)生變異和重組，因而，開放出安全有效的新型疫苗和研制先進(jìn)的免疫輔助物對(duì)于禽流感的防控至關(guān)重要。

禽流感疫苗 變異 免疫

禽流感（AI）是由甲型流感病毒引起的以輕微呼吸道癥狀或急性敗血癥為特征的禽類綜合病癥，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類動(dòng)物疫病。該病可感染多種禽類如：雞、鴨、鵪鶉、鴿子、白鷺等，還可感染豬、狗、小白鼠和豚鼠等多種動(dòng)物。禽流感給世界各國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)，對(duì)人類的健康安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。當(dāng)前，疫苗接種成為防治禽流感的主要手段，傳統(tǒng)疫苗有滅活疫苗和減毒活疫苗；新型疫苗有核酸疫苗、重組病毒載體疫苗、病毒樣顆粒疫苗和亞單位疫苗等。

1 傳統(tǒng)疫苗

1.1 全病毒滅活疫苗

滅活疫苗是應(yīng)用最廣泛的AI疫苗，具有免疫效果確實(shí)，持續(xù)期長(zhǎng)，生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)。疫苗株是利用反向遺傳技術(shù)，將經(jīng)特殊處理降低毒力的血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）基因與H1N1流感病毒PR8株的6個(gè)內(nèi)部基因重組而成。其中HA和NA基因來(lái)源于自然環(huán)境流行的禽流感病毒，隨著禽流感的不斷變異，疫苗株也定期更新，以確保動(dòng)物獲得足夠的免疫保護(hù)。當(dāng)前，疫苗毒株可在雞胚或MDCK細(xì)胞中繁殖擴(kuò)增以制備疫苗，細(xì)胞源滅活疫苗相比雞胚工藝，具有生產(chǎn)可控、批次均一、不易污染、制品安全有效以及成本低等特點(diǎn)。

1.2 減毒活疫苗

減毒活疫苗是將正常毒株在25℃～26℃的雞胚中連續(xù)傳代得到的減毒冷適應(yīng)株。此種病毒只能在25℃左右復(fù)制，因此減毒活疫苗只能感染上呼吸道，且不表現(xiàn)出明顯的流感癥狀，它通過鼻腔免疫刺激機(jī)體產(chǎn)生長(zhǎng)期持久的免疫應(yīng)答，并可產(chǎn)生交叉免疫保護(hù)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生分泌型IgA。缺點(diǎn)是可能通過基因突變和重配返強(qiáng)，因而臨床上暫未被采用。

2 新型疫苗

傳統(tǒng)疫苗在防治禽流感過程中發(fā)揮了重要作用，但是也受到制作工藝等的限制，疫苗保存、使用和副反應(yīng)等均影響最終的使用效果。因此，利用現(xiàn)代基因工程和分子生物學(xué)技術(shù)，研制新型疫苗已成為研究的熱點(diǎn)。

2.1 核酸疫苗

核酸疫苗（DNA疫苗）是將保護(hù)性抗原（HA基因和/或NA基因）插入真核表達(dá)載體，構(gòu)建DNA質(zhì)粒，該質(zhì)?？筛咚奖磉_(dá)保護(hù)性抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生更高水平的保護(hù)性抗體，提高免疫保護(hù)效果。DNA疫苗的優(yōu)點(diǎn)是可以快速刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答尤其是細(xì)胞免疫應(yīng)答，缺點(diǎn)是抗體水平低于滅活疫苗，且個(gè)體差異比較大，可通過優(yōu)化密碼子和啟動(dòng)子提高免疫應(yīng)答水平，增強(qiáng)保護(hù)效果。

2.2 重組活載體疫苗

重組活載體疫苗是選擇不能復(fù)制或者能復(fù)制但不致病的病毒作為載體，用以攜帶禽流感保護(hù)性抗原基因，構(gòu)建重組病毒，在免疫動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定表達(dá)保護(hù)性抗原，刺激機(jī)體發(fā)生CTL反應(yīng)和產(chǎn)生特異性抗體。常見的載體有痘病毒、腺病毒和新城疫病毒等。重組活載體疫苗能有效地激發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生中和抗體，缺點(diǎn)是易受母源抗體的干擾，動(dòng)物機(jī)體對(duì)活載體的免疫反應(yīng)也可限制再次免疫的效果。

2.3 病毒樣顆粒疫苗

病毒樣顆粒（VLP）是含有某種病毒一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的顆粒，它模擬了天然病毒的構(gòu)象表位，具有免疫原性可誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，但不含病毒核酸因而不能自主復(fù)制。其優(yōu)點(diǎn)是能有效避免因基因重組所帶來(lái)的生物安全隱患；同時(shí)免疫效果較好；生產(chǎn)成品低，制備簡(jiǎn)單；設(shè)計(jì)合理的病毒樣顆粒疫苗，還可借助診斷試劑盒區(qū)別野毒感染和疫苗免疫，有利于掌握飼養(yǎng)場(chǎng)的免疫水平，為科學(xué)防控提供指導(dǎo)。

2.4 亞單位疫苗

AIV亞單位疫苗是將具有免疫原性的基因通過真核或原核表達(dá)，將表達(dá)的蛋白進(jìn)行純化后加入佐劑制備而成。它本身不具有感染性，因而安全性高，能刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫力。目前HA、NA和核蛋白抗原（NP）蛋白是主要的研究對(duì)象。傳統(tǒng)的亞單位疫苗操作復(fù)雜且成本較高，制約了大規(guī)模生產(chǎn)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，可將抗原基因連接到質(zhì)粒上，隨后借助于各種表達(dá)系統(tǒng)獲得大量具有免疫原性的亞單位蛋白，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。缺點(diǎn)是抗原單一，誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫反應(yīng)強(qiáng)度還有待提高。

2.5 通用型流感疫苗

當(dāng)前，能夠?qū)Ω鞣N流感提供交叉保護(hù)的安全、有效且高效的通用流感疫苗成為研究熱點(diǎn)，其中針對(duì)HA和M2蛋白的研究最多。研究發(fā)現(xiàn)HA蛋白由一個(gè)三聚體組成，包括一個(gè)球狀頭部和一個(gè)莖部區(qū)域，莖部區(qū)域是保守的。針對(duì)該莖部產(chǎn)生的抗體能識(shí)別和中和多種流感毒株，這個(gè)研究成果為通用型流感疫苗的開發(fā)打下基礎(chǔ)。另外，流感病毒基質(zhì)蛋白M2胞外區(qū)M 2e 也具有極高的保守性，M 2e的24個(gè)氨基酸同源性極高，M 2e特異性抗體雖然不能中和病毒，但可以通過抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用清除受感染的細(xì)胞，減少病毒的復(fù)制，M 2e通用型流感疫苗現(xiàn)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

3 小結(jié)

近年來(lái)，受全球貿(mào)易的不斷加快以及區(qū)域地緣政治的不穩(wěn)定性增加，重大動(dòng)物疫病在全球傳播的趨勢(shì)有所加快，禽流感的防控形勢(shì)日趨嚴(yán)峻。禽流感亞型眾多且易發(fā)生變異，給防治工作造成了極大的困難。因此，研制出安全、高效且生產(chǎn)成本低的流感疫苗和疫苗輔助物具有十分重大的意義。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，以及人們對(duì)禽流感病毒的特性、蛋白構(gòu)造和致病機(jī)理等研究的不斷深入，有可能在不遠(yuǎn)的將來(lái)研制出符合要求的通用型禽流感疫苗。

［1］ 宋濤，胡建和.禽流感疫苗的研究現(xiàn)狀［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37（5）：178-180.

［2］ Chang GRL，Lai SY，Chang PC，et al. Production of immunogenic one-component avian H7-subtype influenza virus-like particles［J］. Process Biochemistry，2011，46（6）：1292-1298.