徐芳芳

（梅州市梅縣區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東梅州 514700）

羊感染牛病毒性腹瀉的診斷

徐芳芳

（梅州市梅縣區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東梅州 514700）

牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）屬于黃病毒科（Flaviridae）瘟病毒屬（Pestivirus），該病毒的宿主范圍廣泛，可以感染牛、豬、羊、鹿等野生動(dòng)物[1］，牛病毒性腹瀉病毒感染后可造成持續(xù)性感染和免疫抑制，持續(xù)性感染使病畜常年帶毒、排毒，成為畜群中的傳染源，免疫抑制使病畜免疫力下降，導(dǎo)致其他病原的混合感染或繼發(fā)感染[2］。牛病毒性腹瀉病毒的持續(xù)性感染和免疫抑制增加了牛病毒性腹瀉病毒感染診斷和防治的難度，使牛病毒性腹瀉病毒感染成為危害養(yǎng)殖業(yè)的一種重要的病毒性傳染病，每年都給我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)不斷有豬感染牛病毒性腹瀉病毒的報(bào)道[3］，羊感染牛病毒性腹瀉病毒的報(bào)道不多，但卻是導(dǎo)致山羊腹瀉的重要致病原因，應(yīng)該引起對(duì)該病的重視。2015年10月，廣東省梅縣區(qū)某羊場(chǎng)發(fā)生一起初生羔羊發(fā)熱、腹瀉、消瘦導(dǎo)致死亡的病例，通過(guò)對(duì)病死羔羊臨床癥狀、病理變化、RT-PCR檢測(cè)等綜合確診該羊場(chǎng)此次疫病為感染牛病毒性腹瀉病毒所致，現(xiàn)將整個(gè)診斷過(guò)程介紹如下。

1　發(fā)病情況

廣東省梅縣區(qū)某羊場(chǎng)初生一月齡的羔羊發(fā)生腹瀉死亡，病羊發(fā)病急，機(jī)體極度消瘦，發(fā)病后3 d內(nèi)死亡，同群羔羊陸續(xù)有發(fā)病和死亡，病死率在20 %左右，羊場(chǎng)曾使用慶大霉素、青霉素等抗生素進(jìn)行藥物治療，但效果不明顯。

2　臨床癥狀

發(fā)病羔羊病初體溫升高，精神沉郁，食欲不振，發(fā)生嚴(yán)重腹瀉，隨后開(kāi)始水瀉，后期帶有黏液和血絲，最后機(jī)體發(fā)生脫水、消瘦至死亡。

3　病理變化

取病死羔羊做解剖檢查，可見(jiàn)全身出血，淋巴結(jié)有多量出血點(diǎn)，淋巴結(jié)腫大，消化道有慢性卡他性炎癥，胃及腸黏膜潰瘍。主要病變?cè)谙篮土馨徒M織，消化道黏膜潰瘍，腸淋巴結(jié)腫大，腸黏膜表面有出血。

4　RT-PCR檢測(cè)

根據(jù)臨床癥狀和病理剖檢結(jié)果，初步懷疑為感染牛病毒性腹瀉病毒，按照參考文獻(xiàn)[4］合成牛病毒性腹瀉病毒的特異性檢測(cè)引物。取病死羊的淋巴結(jié)、消化道黏膜等病變組織添加3倍體積滅菌生理鹽水研磨，在-20 ℃至37 ℃反復(fù)凍融3次，12 000 r/min離心3 min，取上清液參照文獻(xiàn)[4］中的方法提取組織病料的基因組RNA。以提取的RNA為模板參照文獻(xiàn)[4］中的方法做RT-PCR檢測(cè)，RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1 %瓊脂糖核酸電泳觀察顯示，在位于約244bp處可見(jiàn)特異性擴(kuò)增條帶，與文獻(xiàn)[4］報(bào)道的大小相一致。

5　基因序列鑒定

將RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物利用膠回收試劑盒回收純化后連接至PMD18-T克隆載體，送生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果利用Blast在線軟件與GenBank中登錄的序列進(jìn)行同源性比較分析，結(jié)果表明該序列與登錄號(hào)為KJ620017的牛病毒性腹瀉病毒毒株序列同源性達(dá)100 %，從分子水平證實(shí)RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為牛病毒性腹瀉病毒特異性序列。

6　診斷

經(jīng)發(fā)病情況調(diào)查、臨床癥狀和病理變化觀察等臨床診斷以及RT-PCR檢測(cè)、基因序列鑒定等實(shí)驗(yàn)室診斷，綜合判定該羊場(chǎng)發(fā)生了牛病毒性腹瀉病毒的感染。

7　討論

臨床上，牛病毒性腹瀉病毒危害嚴(yán)重，牛病毒性腹瀉病毒感染可以導(dǎo)致病毒持續(xù)性感染和發(fā)生免疫抑制，牛病毒性腹瀉病毒呈世界性分布，特別是養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家更廣泛存在，牛群中牛病毒性腹瀉病毒普遍存在，有的僅導(dǎo)致病毒持續(xù)性感染而不發(fā)病，當(dāng)機(jī)體抵抗力降低時(shí)發(fā)病，它們成為牛病毒性腹瀉病毒的重要傳播來(lái)源，通過(guò)污染飼料和飲水導(dǎo)致其他的動(dòng)物感染牛病毒性腹瀉病毒。豬感染牛病毒性腹瀉病毒的報(bào)道時(shí)有發(fā)生，羊感染牛病毒性腹瀉病毒的報(bào)道不多，本研究從發(fā)病死亡的病羊體內(nèi)檢出牛病毒性腹瀉病毒，病羊發(fā)病期間腹瀉明顯，體溫升高，發(fā)病急，快速死亡，高度懷疑為牛病毒性腹瀉病毒感染，通過(guò)發(fā)病羊的臨床癥狀，病理解剖及實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)RT-PCR診斷和基因測(cè)序鑒定，綜合診斷判定該羊場(chǎng)發(fā)生了牛病毒性腹瀉病毒的感染。牛病毒性腹瀉病毒可以感染山羊和綿羊，牛病毒性腹瀉病毒感染母羊可以導(dǎo)致流產(chǎn)和產(chǎn)死胎，弱胎，胎兒畸形。文中所設(shè)計(jì)的牛病毒性腹瀉病毒檢測(cè)引物為特異性檢測(cè)引物，尚沒(méi)有對(duì)牛病毒性腹瀉病毒進(jìn)行分型鑒定，牛病毒性腹瀉病毒的分型鑒定和病毒分離有待進(jìn)一步研究。

羊場(chǎng)發(fā)生牛病毒性腹瀉病毒感染疫情后，迅速對(duì)飼養(yǎng)場(chǎng)的病羊隔離飼養(yǎng)，墊草、飲水和用具全部消毒處理，病死羊進(jìn)行無(wú)害化處理，深埋和消毒。為預(yù)防牛病毒性腹瀉病毒在羊場(chǎng)傳播，建議飼養(yǎng)場(chǎng)對(duì)所有羊進(jìn)行牛病毒性腹瀉病毒血清學(xué)和分子生物學(xué)調(diào)查，存在陽(yáng)性肝炎羊及時(shí)隔離和淘汰，防止病毒傳播擴(kuò)散。本病目前尚無(wú)有效治療藥物，可以應(yīng)用抗生素和磺胺類(lèi)藥物防止繼發(fā)細(xì)菌感染，加重病情，飼養(yǎng)場(chǎng)平時(shí)要加強(qiáng)本病的檢疫，及時(shí)做血清學(xué)或分子生物學(xué)篩查，引種時(shí)特別要加強(qiáng)牛病毒性腹瀉病毒的檢測(cè)，證明健康的才能留作種羊，可以應(yīng)用滅活疫苗來(lái)預(yù)防和控制本病。

[1]達(dá)熱瑪.牛病毒性腹瀉病毒的綜合診斷和防控[J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2015，31（8）：110-111.

[2]宮曉煒，曹小安，鄭福英，等.牛病毒性腹瀉病毒感染的免疫應(yīng)答研究進(jìn)展[J］.中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2012，42（11）：1200-1205.

[3]徐磊，曾亮明，王玉玲，等.福建省豬群感染牛病毒性腹瀉病毒的病原學(xué)檢測(cè)與分析[J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，45（12）：2006-2012.