王守旭 趙 冰 宋杏花 彭秀中

華佗國藥股份有限公司 安徽省亳州市 236800

HPLC法測定排石利膽片中芍藥苷的含量

王守旭 趙 冰 宋杏花 彭秀中

華佗國藥股份有限公司 安徽省亳州市 236800

目的：通過HPLC方法測定排石利膽片中芍藥苷的含量。方法：選擇Hypersil CN(4.6mm×250mm,5μm)為色譜柱，流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80），檢測波長：230nm，進(jìn)樣量10μl，1.0mL/min流速，柱溫為室溫（25℃）條件下進(jìn)行檢測。結(jié)果：芍藥苷在1.14ug·mL-1～57.00ug·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為：Y=238459X-334145（r=0.9992），平均回收率為100.02%，RSD 1.6%。結(jié)論：高效液相色譜方法操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，可有效評估排石利膽片中芍藥苷的含量。

HPLC法；芍藥苷；含量；排石利膽片

排石利膽片是由金錢草、茵陳、柴胡(醋炙)、龍膽、赤芍、郁金、蒲黃、五靈脂、大黃、芒硝10味藥制成的中藥復(fù)方制劑，具有舒肝理氣，利膽排石的功效，常用于膽囊炎，膽石癥的治療。目前就排石利膽片的質(zhì)量控制中高效液相測定僅以綠原酸為主，對于其他成分多停留在薄層檢測[1]，赤芍是處方臣藥，芍藥苷是其主要成分之一。本文由此出發(fā)，考察高效液相法在排石利膽片中芍藥苷的含量測定中的應(yīng)用，結(jié)果報道如下：

1 材料

儀器與試藥：島津10A-vp型高效液相色譜儀；AS3120A型超聲波清洗器；甲醇、磷酸、乙腈由MERCK公司提供為色譜醇；芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號：160417）；排石利膽片（陜西合生醫(yī)藥研究發(fā)展有限公司，批號為：151022、160214、160423）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與樣品制備

2.1.1 色譜條件

芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品加甲醇適量稀釋至澄清，以甲醇為空白對照，在200-400nm波長下對芍藥苷對照品溶液進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果顯示在230nm處有最大吸收，故確定檢測波長230nm。

色 譜 柱 選 擇Hypersil CN(250mm×4.6mm,5μm)， 流 動 相： 乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80），檢測波長：230nm，進(jìn)樣10μl，流速1.0mL/min，柱溫為25℃。

2.1.2 溶液的制備

（1）供試品制備。取20顆排石利膽片，精密稱定后，研細(xì)，取0.15g置于25ml容量瓶中，加入甲醇15ml稀釋，稱重，超聲8min，放冷至室溫，稀釋至對應(yīng)刻度，取適量溶液經(jīng)0.25um微孔濾膜過濾，待用。

（2）對照品制備。采用20ml容量瓶精密稱取10.19mg芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.3 方法學(xué)考察

（1）精密度測定。采用“2.1.1”項色譜條件，取芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)進(jìn)樣（n=6），進(jìn)樣量10ul，測定每次峰面積，并計算標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果RSD=1.4%<2.0%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)[2]，可見，本法精密度良好。

（2）重復(fù)性測定。取相同批號排石利膽片（n=6），按照“2.1.2（1）”項操作制備，采用“2.1.1”項色譜條件測定6份樣品峰面積并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果RSD=1.3%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)[2]，可見，本法重復(fù)性良好。

（3）穩(wěn)定性測定。選擇不同放置時間（0h、4h、8h、12h、24h）分別取供試品，采用“2.1.1”項色譜條件測定色譜峰面積，并相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果RSD=1.6%<2.0%，可見供試品溶液在24h內(nèi)較為穩(wěn)定。

（4）回收率測定。取已知含量樣品（n=9），分為3組，每組均依次加芍藥苷對照品5.17mg、10.46mg和20.29mg，按照“2.1.2（1）”項供試品制備過程制備供試液，采用“2.1.1”項色譜條件測定色譜峰面積，計算回收率并相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，測得回收率為：100.06%、100.04%和99.96%，平均100.02%，RSD 1.6%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)[2]。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察

采用10ml容量瓶精密量取不同體積對照品溶液（0.20ml、0.50ml、0.80ml、 1ml、2ml、5ml），加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過有機(jī)濾膜后，采用“2.1.1”項色譜條件測定色譜峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)和濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=238459X-334145（r=0.9992），提示，芍藥苷濃度在1.14ug?mL-1～57.00ug?mL-1范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

2.2 樣品中芍藥苷含量測定

結(jié)合“2.1.1項”下色譜條件，分別測定3批排石利膽片供試品溶液，供試品制備同“2.1.2（1）”項操作，采用自身對照法對供試品內(nèi)含有的芍藥苷含量進(jìn)行測定。

3 結(jié)果

排石利膽片中芍藥苷平均含量為（4.29±0.28）mg/g，見表1。

表1：排石利膽片中芍藥苷含量（,mg/g）

表1：排石利膽片中芍藥苷含量（,mg/g）

批號 芍藥苷含量 平均含量1510224.29±0.28 4.29±0.28 1602144.31±0.32 1604234.27±0.26

4 討論

通過本文結(jié)果我們可知，高效液相色譜法測定排石利膽片中芍藥苷含量，準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求?？梢?，對于排石利膽片中芍藥苷含量測定，高效液相法不失為一個較好的測定方法。

[1]陳世虎,陳志成.高效液相色譜法測定排石利膽片中芍藥苷的含量[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(02):57-58.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010.