王荻，廉超，劉紅柏

（1.中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.即墨市海洋與漁業(yè)局，山東 青島 266200）

中草藥添加劑對施氏鱘生長及血液生化指標的影響

王荻1，廉超2，劉紅柏1

（1.中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.即墨市海洋與漁業(yè)局，山東 青島 266200）

在22℃下，采用口灌法研究當歸、魚腥草及自制中草藥復方（方四）的水煎劑對1+齡施氏鱘Acipenser schrenckii生長及血清中酶活性及活性物質含量的影響。將施氏鱘飼養(yǎng)在循環(huán)水族箱中，每組兩個平行，每個平行30尾魚，按照當歸、魚腥草及方四分別為0.3g/kg、0.54g/kg、0.8g/kg體質量的給藥劑量每日口灌給藥1次，連續(xù)給藥14d，以口灌蒸餾水為對照組。停藥24h后，每組取半數(shù)鱘在高溫30℃下熱刺激2h，然后與常溫組同時尾動（靜）脈采血，測定血清中總膽紅素、甘油三酯含量及谷丙轉氨酶等酶的活性及魚的體質量。結果表明：當歸及魚腥草不能有效促進鱘生長；高溫熱刺激加重了鱘肝腎的負擔，損傷了肝功能；而方四顯著提高了鱘的生長性能，在高溫熱刺激下，仍能顯著降低鱘血液中尿素、肌酐等物質的含量，具有一定的保肝護腎功能，可作為鱘抗熱應激中草藥添加劑的備選方劑。

當歸；魚腥草；方四；施氏鱘

中草藥富含生物堿、多糖、皂甙、蒽類、揮發(fā)油、有機酸等多種物質，可有效調節(jié)機體健康狀況，改善機體免疫功能[1]，具抗病和營養(yǎng)的雙重作用。天然藥用植物具有來源豐富、低毒、低殘留、耐藥性不顯著等優(yōu)點[2]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中已廣泛應用[3]。中草藥種類繁多、配伍多樣，可針對不同物種及作用目的采用多種單方或復方。

鱘是現(xiàn)存魚類中最古老、最原始的種類之一，素有“活化石”之稱[4]，加之體態(tài)優(yōu)美、營養(yǎng)豐富，更有“黑色黃金”美譽的鱘魚籽醬，成為世界上利潤較高的產(chǎn)業(yè)之一[5]。中國作為世界上最大的鱘養(yǎng)殖國，2011年養(yǎng)殖量占世界鱘養(yǎng)殖總產(chǎn)量的84.97%，2012年鱘魚籽醬的產(chǎn)量高達28.88t[6]。

魚類是變溫動物，生理活動受水溫影響較大[7]，而目前養(yǎng)殖過程中環(huán)境污染、高溫運輸?shù)炔豢杀苊獾那闆r時有發(fā)生，故而篩選適用于鱘的中草藥添加劑具有切實的應用價值和廣闊的應用前景。當歸Angelica sinensis為《神農(nóng)本草經(jīng)》記載的無毒上品藥，富含苯酞類、酚酸類、多糖、黃酮等多種化學成分，具有補血調血、抗癌免疫功效[8]。魚腥草Houttuynia cordata是中國藥典收錄的具有清熱解毒、健胃消食等功效的草藥[9]?，F(xiàn)代藥理實驗表明，魚腥草還具有抗菌、抗病毒、提高機體免疫力等作用。本文選取當歸、魚腥草及自制復方中草藥方劑，采用口灌法研究這些中草藥水煎劑對1+齡施氏鱘Acipenser schrenckii生長及血清中酶活性及活性物質含量的影響，以篩選適于鱘使用的飼料添加劑。

1 材料與方法

1.1 材料

健康非免疫狀態(tài)的1+齡施氏鱘購自中國水產(chǎn)科學研究院鱘魚繁育技術工程中心；實驗用中草藥購自哈藥集團世一堂藥店，烘干粉碎后備用。

1.2 方法

1.2.1 中藥水煎劑的制備

準確計算、稱取魚腥草、當歸及自制復方方四（以黨參 Codonopsis pilosula、白術 Atractylodes macrocephala為主藥，茯苓Poria cocos、當歸等為輔藥），放入砂鍋中，加水浸泡30min，分別以45min和30min熬制兩次，合并所得藥汁后濃縮成100mL，1mL藥液相當于1g藥方（干物質），高壓滅菌后存放于4℃冰箱中備用。

1.2.2 實驗設計

每個受試組設兩個平行，每個平行30尾鱘，于室內(nèi)22℃循環(huán)水族箱中預飼兩周，每天按魚體質量的2.0%投喂全價基礎飼料。

預飼結束后，按當歸0.3g/kg、魚腥草0.54g/kg、方四0.8g/kg體質量的劑量給鱘連續(xù)口灌14d，期間定期測定鱘體質量。給藥結束時，取半數(shù)鱘于30℃控溫水族箱中熱刺激2h，尾動（靜）脈采血，4℃4000r/min離心10min分離血清后，立即保存于-80℃冰箱中。

1.2.3 指標檢測

用Beckman公司生產(chǎn)的CYNCHRON CH4PRO全自動生化分析儀檢測鱘血清中相關活性物質含量及酶活性。檢測指標包括：總蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、總膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、乳酸脫氫酶、尿素氮、肌酐、尿酸，及谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶比值（谷丙∶谷草）、尿素氮和肌酐比值（尿素氮∶肌酐）。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

測定數(shù)據(jù)用SPSS軟件最小顯著差數(shù)法（LSD）進行處理；生化指標采用SPSS統(tǒng)計軟件中的單因子方差分析進行統(tǒng)計，用鄧肯氏法進行多重比較。

表1 受試鱘體質量的增加Tab.1 The increase in body weight of the experimental Amur sturgeon

2 結果與分析

2.1 受試鱘體質量變化情況

實驗過程中，連續(xù)記錄受試鱘的體質量（表1）。鱘的終末體質量和給藥14d時增重率最大值均出現(xiàn)在方四組。初始體質量無顯著性差異的4個實驗組，經(jīng)連續(xù)口灌給藥14d后，終末體質量出現(xiàn)顯著性變化，對照組和方四組鱘體質量顯著高于當歸組和魚腥草組。方四組鱘7d時增重率顯著低于對照組，10d時兩組無顯著性差異，14d時顯著高于對照組。

2.2 受試鱘血清中酶活性變化

常溫下，各組鱘血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶活性，及谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶比值（谷丙∶谷草）的變化情況見表2。鱘血清中4種酶活性由高至低為：乳酸脫氫酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶和谷丙轉氨酶。谷草轉氨酶和乳酸脫氫酶的最高值均出現(xiàn)在方四組，谷丙轉氨酶和堿性磷酸酶的最大值均出現(xiàn)在當歸組，而各實驗組鱘血清中所測酶的活性均未呈顯著性差異。

高溫熱應激后，各組受試鱘血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶活性及谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶比值（谷丙∶谷草）的變化情況見表3。高溫熱應激2h后，鱘血清中谷草轉氨酶、堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶活性均略有上升，而谷丙轉氨酶活性則大幅下降，谷丙∶谷草值顯著上升。當歸組及魚腥草組鱘血清中谷草轉氨酶、乳酸脫氫酶均顯著或極顯著高于對照組，而堿性磷酸酶則顯著低于對照組。方四組鱘4種酶活性均與對照組差異顯著。

2.3 受試鱘血清中活性物質含量的變化

常溫下，各組鱘血清中總膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、尿素氮、肌酐、尿酸含量，及尿素氮和肌酐比值（尿素氮∶肌酐）的變化情況見表4。方四組僅尿素氮含量顯著低于對照組；當歸組除尿素氮含量顯著低于對照組外，總膽紅素、尿酸含量均顯著高于對照組；魚腥草組甘油三酯、總膽固醇、肌酐含量均顯著低于對照組。

表2 常溫組受試鱘血清中酶活性變化Tab.2 The changes in enzyme activities in serum of experimental fish at normal temperature

表3 熱應激組受試鱘血清中酶活性變化Tab.3 The changes in enzyme activities in serum of experimental fish at high temperature

表4 常溫組受試鱘血清中活性物質含量變化Tab.4 The changes in active substance contents in serum of experimental fish at normal temperature

表5 熱應激組受試鱘血清中活性物質含量變化Tab.5 The change of active substance contents in serum of experimental fish at high temperature

高溫熱應激后，各組鱘血清中總膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、尿素氮、肌酐、尿酸含量，及尿素氮和肌酐比值（尿素氮∶肌酐）的變化情況見表5。與常溫條件下相比，對照組、方四組和魚腥草組各項測定指標均有所上升；而當歸組甘油三酯、肌酐和尿酸含量略有下降。由表5可知，方四組甘油三酯含量顯著高于對照組，而尿素氮則顯著低于對照組；當歸組總膽紅素含量顯著高于對照組，而尿素氮和肌酐含量顯著低于對照組；而魚腥草組僅肌酐與對照組差異顯著。

3 討論

有學者認為“疾病是生物體內(nèi)‘生物反應調節(jié)物’（BRM）被致病因素破壞，導致動態(tài)平衡失調而引起的，若使機體BRM恢復正常即可痊愈”，并提出可通過體外補充、吸收藥物誘導或活化機體的BRM系統(tǒng)，使其恢復正常[10]。中草藥富含多種有效活性成分，其補益性質以雙向調節(jié)為主要特征，促進機體回復正常平衡[11]。

3.1 中草藥添加劑對施氏鱘生長的影響

中草藥添加劑含有多種營養(yǎng)成分和生物活性物質，可促消化，誘攝食，有效提高魚類的生長[12,13]；也可增加魚類肌肉粗蛋白含量，提高鮮味氨基酸和脂肪酸含量，增加肌肉風味，改善肌肉品質[3,14,15]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用廣泛。

當歸味甘、辛、微苦，魚腥草有腥臭味，單味草藥使用時，會影響鱘的攝食欲，因而2個實驗組鱘的增重率一直顯著或極顯著低于對照組。這與劉紅柏等[16]和宿斌等[17]報道的魚腥草與當歸對魚類生長無顯著促進作用相同。而復方制劑方四組中，鱘的增重率不斷提升，7d時顯著低于對照組，10d時持平，14d時已顯著高于對照組。這表明鱘適應方四后，生長顯著提高，但促生長機制還需進一步深入研究。

3.2 中草藥添加劑對施氏鱘血清中酶活性的影響

常溫下，3種中草藥方劑均未顯著影響鱘血清中各種酶的活性，維持了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。高溫熱刺激后，鱘各項指標受到中草藥方劑的影響，尤其是當歸組和魚腥草組顯著提高了鱘體內(nèi)谷草轉氨酶和乳酸脫氫酶活性，降低了堿性磷酸酶活性；而方四組則抑制了血清中2種轉氨酶活性的上升。谷丙和谷草轉氨酶活性及谷丙∶谷草值可作為肝損傷的指示物，魚體受到急性應激時，肝臟受損，血清中酶活力顯著上升，谷丙∶谷草值增大[18]。熱刺激下，灌服當歸、魚腥草可能進一步加重肝的代謝負擔，造成功能損傷，而方四在高溫應激下具有一定的保肝、護肝功能。

3.3 中藥方劑對施氏鱘血清中活性物質含量的影響

魚類對溫度變化有一定的適應能力，但過高或過低的溫度刺激依然會引起水產(chǎn)動物血液生理生化指標的變化[19,20]。膽紅素主要由衰老的紅細胞在肝、脾和骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)破壞降解生成，通過肝腸循環(huán)排出體外。血液中總膽紅素含量的變化可指示肝的受損情況[21]。尿素是蛋白質和氨基酸代謝的終產(chǎn)物，尿酸是嘌呤分解代謝產(chǎn)物，肌酐是肌肉組織中儲能物質肌酸的代謝終產(chǎn)物，血液中尿素、尿酸和肌酐含量均可用于指示腎臟功能的受損情況[22]。本實驗中，當歸組和魚腥草組未取得較好的保肝護腎效果，但方四組在常溫條件下能顯著降低鱘血清中尿素氮含量，高溫熱刺激下能有效抑制血清中尿素氮和肌酐含量的升高而保護腎臟。

綜上所述，自制中草藥復方四，能顯著提高鱘生長性能，在高溫刺激下，具有保肝護腎功能，可作為鱘抗熱應激中草藥添加劑的備選方劑。

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Effects of Chinese Herbal Additives on Growth and Serum Biochemical Parameters in Amur sturgeon（Acipenser schrenckii）

WANG Di1,LIN Chao2,LIU Hong-bai1
（1.Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China；2.Jimo Ocean and Fisheries Bureau,Qingdao 266200,China）

The effects of Chinese herbal additives including Angelica sinensis,Houttuynia cordata and prescription IV（PIV）on growth and serum biochemical parameters were investigated in 1+years old Amur sturgeon（Acipenser schrenckii）oral administration of the Chinese herbal decoction at water temperature of 22℃.The Amur sturgeon juveniles were reared in tanks at a rate of 30 fish per tank and orally administrated decoction of Angelica sinensis,Houttuynia cordata and PIV at a dosage of 0.3 g/kg,0.54 g/kg and 0.8 g/kg once a day with distilled water control group with duplication for 14 d.At the withdrawal of 24 h,half of fish in each group were thermally stimulated at 30℃for 2 h and then the blood samples were collected from caudal arteries（veins）together in the experimental groups at 22℃for detection of contents of total bilirubin and triglyceride in serum and the activities of glutamic-pyruvic transferase and other enzymes.The results showed that promoted growth was not observed in the experimental fish with oral administration of Angelica sinensis and Houttuynia cordata,and that disorder of liver and kidney function was found in the experimental fish under thermal stimulation.However,significantly good growth performance and lower contents of urea and creatinine in blood were observed in the fish with oral administration of PIV,indicating that the PIV led to protection of liver and kidney functions and could be used as the candidates of anti-thermal stress Chinese herbal additives.

Angelica sinensis;Houttuynia cordata;prescription IV;Amur sturgeon

S948

A

1005-3832（2016）03-0016-05

2016-03-22

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項經(jīng)費（201203085）.

王荻（1980-），女，助研，博士研究生，從事魚類病害及免疫研究.E-mail:wangdi_2014@163.com

劉紅柏.E-mail:liuhongbai@sina.com