石軼男，楊絨娟，扆妍妍，孫 娜，孫耀貴，李宏全

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院， 山西太谷 030801)

黨參多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞血清ND抗體水平、IgG及腸道SIgA含量的影響

石軼男，楊絨娟，扆妍妍，孫 娜，孫耀貴，李宏全*

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院， 山西太谷 030801)

為了研究黨參多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞免疫功能的影響。將300只羅斯308白羽肉仔雞分為黨參多糖可溶性粉高、中、低劑量組，陽(yáng)性藥對(duì)照組，疫苗對(duì)照組和空白對(duì)照組，每組50只。黨參多糖可溶性粉在每千克飲水中添加0.4、0.2和0.1 g藥物，陽(yáng)性藥對(duì)照組在每千克飲水中添加0.2 g黃芪多糖粉，疫苗對(duì)照組和空白對(duì)照組不添加任何藥物。除空白對(duì)照組外，7日齡首免用雞新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)滴鼻點(diǎn)眼，21日齡二免，在每次免疫的同時(shí)給藥，連續(xù)三天。結(jié)果顯示，黨參多糖可溶性粉可顯著增加肉仔雞胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)；顯著提高接種新城疫(ND)疫苗后肉仔雞血清中ND抗體水平、免疫球蛋白G(IgG)含量和腸道分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量(P<0.05)。此外，飲水中添加黨參多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞有明顯增重作用(P<0.05)。因此，黨參多糖可溶性粉不僅有增強(qiáng)肉仔雞免疫功能的作用，而且對(duì)肉仔雞體重增長(zhǎng)有一定促進(jìn)作用；其中以中劑量藥物組，即在每千克飲水中添加0.2 g黨參多糖可溶性粉效果最好。

黨參多糖可溶性粉；免疫調(diào)節(jié)；肉仔雞

黨參是桔梗科黨參屬多年生纏繞性草本，根供藥用。黨參之名，中國(guó)最早見(jiàn)于清吳儀洛著《本草從新》。中國(guó)東北、華北、西北各地都有分布，朝鮮及蘇聯(lián)遠(yuǎn)東地區(qū)也有，山西潞安(今長(zhǎng)治縣)栽培的“潞黨參”較為有名。黨參根含皂苷、糖類及微量生物堿[1]。多糖是廣泛存在于植物體內(nèi)，經(jīng)過(guò)提取分離得到的一類天然大分子活性物質(zhì)，由單糖之間脫水形成糖苷鍵，并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的多于20個(gè)糖基的鏈狀聚合物[2]，已被認(rèn)為有免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤的作用，其作用于免疫效應(yīng)細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，參與固有免疫和適應(yīng)性免疫[3-5]。黨參多糖可溶性粉的有效成分為多糖，本研究通過(guò)給肉仔雞飲用不同濃度的黨參多糖可溶性粉，觀察抗體效價(jià)、免疫器官指數(shù)、體重、免疫球蛋白G(IgG)和腸道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的變化，探討黨參多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞免疫功能的影響，為黨參多糖可溶性粉在臨床中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥物 黨參多糖可溶性粉：實(shí)驗(yàn)室自制。規(guī)格：每1 g含黨參多糖大于500 mg。

陽(yáng)性對(duì)照藥：黃芪多糖粉，規(guī)格100 g/袋，每1 g含黃芪多糖不得少于450 mg，北京生泰爾科技股份有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥字(2014)010635236，批號(hào)：1506181。新城疫疫苗及檢測(cè)抗原：雞新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)，青島易邦生物工程有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥生字 (2010)150132007，批號(hào)：150185001；新城疫檢測(cè)抗原，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥生字(2012)150138082，批號(hào)：2015001。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡羅斯308健康白羽肉仔雞450只，購(gòu)于文水縣錦繡農(nóng)牧發(fā)展有限公司。飼養(yǎng)于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技試驗(yàn)站實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房?jī)?nèi)。3層籠養(yǎng)、自由采食和飲水。

1.3 動(dòng)物分組處理 健康羅斯雞飼養(yǎng)至7日齡時(shí)，按體重相近的原則，取300只隨機(jī)分為6組，每組50只，分組與處理見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

1.4 檢測(cè)項(xiàng)目

1.4.1 血清ND抗體效價(jià) 分別于首免當(dāng)天(7日齡)及首免后第 7(14日齡)、14(21日齡)、21(28日齡)和28天(35日齡)，每組隨機(jī)抽取 10只，心臟采血，分離血清，用 β-微量法檢測(cè)血凝抑制抗體效價(jià)。

1.4.2 免疫器官指數(shù) 分別于首免后第14(21日齡)、28天(35日齡)，每組隨機(jī)抽取10只，稱取體重，剖殺，取胸腺、脾臟、法氏囊稱重。

計(jì)算器官指數(shù)=器官重量(mg)/體重(g)。

1.4.3 免疫球蛋白含量 分別于首免后第14(21日齡)、28天(35日齡)，每組隨機(jī)抽取10只，心臟采血并分離血清，屠宰后摘取十二指腸、空腸和回腸(各約3 cm)置于平皿中，縱行剖開(kāi)，刮取腸黏膜黏液，收集于同一離心管。內(nèi)容物與生理鹽水按 1∶1(W/V)稀釋，混勻后 3000 rpm，4 ℃，離心15 min，取上清液，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩２捎秒p抗夾心ELISA法檢分別檢測(cè)血清中免疫球蛋白G(IgG)和分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量。

1.4.4 平均體重 分別于免疫當(dāng)天(7日齡)、首免后第14(21日齡)、28天(35日齡)，每組隨機(jī)抽取10只，稱取體重，計(jì)算平均體重。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。以SPSS統(tǒng)計(jì)軟件ONE-WAY ANOVA程序計(jì)算各組各項(xiàng)指標(biāo)平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，用LSD(最小顯著級(jí)差)法和Duncan's多重比較對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。

2 結(jié)果

2.1 血清抗體效價(jià) 由表2可知，7日齡時(shí)，各組新城疫抗體效價(jià)無(wú)明顯差異(P>0.05)。除7日齡外不同時(shí)間點(diǎn)疫苗對(duì)照以及給藥組抗體效價(jià)均大于空白對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明新城疫疫苗免疫成功。14日齡，低劑量組、高劑量組與疫苗對(duì)照組抗體效價(jià)差異不明顯(P>0.05)；中劑量組抗體效價(jià)明顯高于疫苗對(duì)照(P<0.05)。21日齡、28日齡、35日齡，低劑量組抗體效價(jià)相比于疫苗對(duì)照組有升高趨勢(shì)但差異不明顯(P>0.05)；中劑量組、高劑量組抗體效價(jià)明顯高于疫苗對(duì)照組(P<0.05)。中劑量藥物組與陽(yáng)性藥物組抗體效價(jià)比較，差異不明顯(P>0.05)。

表2 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞血清新城疫抗體效價(jià)的影響(以log2表示，n=10)

同列字母相同者，表示差異不顯著(P>0.05)；字母不同者，表示差異顯著(P<0.05)，下同。

2.2 免疫器官指數(shù) 由表3可知，低劑量組胸腺指數(shù)在21日齡與空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)， 35日齡顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)；中劑量組胸腺指數(shù)均明顯高于空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P<0.05)；高劑量組胸腺指數(shù)在21日齡明顯高于空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P<0.05)，35日齡明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組無(wú)差異(P>0.05)。中劑量組胸腺指數(shù)與陽(yáng)性藥物組基本相似(P>0.05)。

表3 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞胸腺指數(shù)的影響(mg/g，n=10)

由表4可知，低劑量組脾臟指數(shù)在21日齡和35日齡顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組組無(wú)顯著差異(P>0.05)；中劑量組脾臟指數(shù)在21日齡和35日齡顯著高于空白對(duì)照組與疫苗對(duì)照組(P<0.05)。高劑量組在21日齡明顯高于空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P<0.05)；35日齡明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組無(wú)差異(P>0.05)。21日齡和35日齡，高劑量組與陽(yáng)性藥物組相比差異不顯著(P>0.05)；中劑量組在35日齡與陽(yáng)性藥物組差異不顯著(P>0.05)。

表4 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞脾臟指數(shù)的影響(mg/g，n=10)

由表5可知，低劑量組法氏囊指數(shù)在21日齡和35日齡與空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，中劑量組法氏囊指數(shù)在21日齡和35日齡顯著高于空白對(duì)照組與疫苗對(duì)照組(P<0.05)；高劑量組法氏囊指數(shù)在21日齡顯著高于空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P<0.05)，35日齡顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組無(wú)差異(P>0.05)；21日齡和35日齡，高劑量組與陽(yáng)性藥物組相比差異不顯著(P>0.05)；中劑量組在35日齡與陽(yáng)性藥物組差異不顯著(P>0.05)。

表5 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞法氏囊指數(shù)的影響(mg/g，n=10)

2.3 免疫球蛋白含量 由表6可知，低劑量組血清免疫球蛋白G(IgG)在21日齡與空白對(duì)照組和免疫對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，35日齡時(shí)明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)；中劑量組IgG在21日齡和35日齡明顯高于空白對(duì)照組與疫苗對(duì)照組(P<0.05)；高劑量組IgG在21日齡與空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組無(wú)差異(P>0.05)，35日齡均明顯高于空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P<0.05)；中劑量組和高劑量組與陽(yáng)性藥物組IgG含量差異不顯著(P>0.05)。

表6 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞血清免疫球蛋白G(IgG)的影響(g/L，n=10)

由表7可知，低劑量組腸道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)在21和35日齡顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組組無(wú)顯著差異(P>0.05)；中劑量、高劑量組在21日齡和35日齡均顯著高于空白對(duì)照組與疫苗對(duì)照組(P<0.05)；中劑量組與陽(yáng)性藥物組相比sIgA含量差異不顯著(P>0.05)。

表7 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞腸道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的影響(mg/g，n=10)

2.4 體重變化 由表8可知，7日齡時(shí)，各組之間體重差異不顯著(P>0.05)。低劑量組體重在21日齡與空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，35日齡時(shí)，低劑量組體重明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，與疫苗對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)；中劑量、高劑量組體重在21日齡和35日齡均明顯高于空白對(duì)照組與疫苗對(duì)照組(P<0.05)。中劑量組和高劑量與陽(yáng)性藥物組相比差異不顯著(P>0.05)。

表8 黨參多糖可溶性粉對(duì)雞體重的影響(g，n=10)

3 討論與小結(jié)

3.1 黨參多糖可溶性粉對(duì)ND抗體效價(jià)的影響 新城疫(newcastle disease，ND)是由新城疫病毒引起的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，又稱為禽副粘病毒1型(APMV-1)[6]，其特征是高熱、呼吸困難、下痢和出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。新城疫是危害雞和最嚴(yán)重的疫病之一，易感雞群一旦傳入新城疫，傳 播很快，于數(shù)天內(nèi)波及全群，造成毀滅性流行，發(fā)病率和死亡率可達(dá)90%以上，因此在集約化的養(yǎng)雞場(chǎng)提高新城疫疫苗的抗體效價(jià)顯得尤為必要。體液免疫是由B細(xì)胞介導(dǎo)通過(guò)分泌抗體來(lái)進(jìn)行免疫應(yīng)答，新城疫抗體水平是反應(yīng)新城疫疫苗免疫后雞特異性免疫反應(yīng)功能的指標(biāo)[7]，多糖通過(guò)與B淋巴細(xì)胞表面不同受體結(jié)合激活下游的信號(hào)通路，從而激活B淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及抗體[8]。刺五加多糖與B淋巴細(xì)胞表面的toll樣受體結(jié)合激活MAPKs(ERK2、JNK和p38)，從而激活B淋巴細(xì)胞[9]。本研究表明，ND抗體效價(jià)在7日齡到35日齡低劑量組與免疫對(duì)照組無(wú)顯著差異；中劑量組與免疫對(duì)照組相比抗體水平顯著升高；高劑量組在14日齡到35日齡與免疫對(duì)照組相比抗體水平顯著升高。表明黨參多糖可溶性粉與新城疫低毒力活疫苗配合使用，可顯著提高雞血清ND抗體效價(jià)，但黨參多糖與B細(xì)胞膜上的哪些受體結(jié)合，以及是否會(huì)使抗體效價(jià)維持在一個(gè)較高水平還有待研究。

3.2 黨參多糖可溶性粉對(duì)免疫球蛋白(IgG)的影響 免疫球蛋白G(IgG)在脾臟和淋巴結(jié)中合成，主要分布在血清和組織液中，是抗細(xì)菌、抗毒素和抗病毒抗體的主要組成部分，也是機(jī)體抗感染免疫的過(guò)程中的重要物質(zhì)基礎(chǔ),血清中的免疫球蛋白水平的檢測(cè)是檢驗(yàn)機(jī)體免疫狀況的常用指標(biāo)。多糖的添加可刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而使血清中IgG含量升高[10]。在 21日齡中劑量組與疫苗對(duì)照組相比血清中IgG有顯著升高，21日齡、38日齡中劑量、高劑量與疫苗對(duì)照組相比顯著升高。表明黨參多糖可溶性粉可以明顯增加血清中IgG的含量，從整體上看中劑量黨參多糖可溶性粉免疫增強(qiáng)效果最好，提示中藥多糖的生物活性不是劑量越大越好。

3.3 黨參多糖可溶性粉對(duì)免疫器官指數(shù)及體重的影響 胸腺、脾臟和法氏囊是雞主要的免疫器官。胸腺與細(xì)胞免疫有關(guān)，脾臟與細(xì)胞和體液免疫均有關(guān)系，法氏囊是禽類的中樞免疫器官，可產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞從而產(chǎn)生特異性抗體來(lái)完成特定的免疫應(yīng)答。大量研究表明，多糖可提高雞免疫器官指[11-13]。本研究表明，免疫器官指數(shù)在21日齡、35日齡中劑量組和高劑量均顯著高于對(duì)照組；在7日齡各藥物組肉仔雞體重與疫苗對(duì)照組對(duì)照組無(wú)顯著差異，21、35日齡中劑量組和高劑量顯著高于對(duì)照組。表明黨參多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞免疫器官發(fā)育及肉仔雞體重增長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，且中劑量和高劑量黨參多糖粉效果比較明顯。

3.4 黨參多糖可溶性粉對(duì)泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影響 腸消化管內(nèi)含有彌散淋巴組織、孤立淋巴小結(jié)、集合淋巴小結(jié)以及淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和漿細(xì)胞等，它們參與構(gòu)成機(jī)體免疫防御的第一道防線，當(dāng)消化管的黏膜受到抗原的作用后，其黏膜內(nèi)的淋巴組織隨即產(chǎn)生免疫應(yīng)答并向消化管內(nèi)分泌免疫球蛋白，即分泌型免疫球蛋白A(SIgA)[14]。SIgA作為粘膜免疫的主要效應(yīng)因子，不僅能抗細(xì)菌抗病毒，而且在腫瘤的發(fā)生中也起著重要作用[15-16]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，植物多糖可調(diào)節(jié)腸道粘膜免疫。張芳毓[17]等人證明人參莖葉多糖可提高雛雞小腸SIgA的分泌量；烏賊墨多糖可增加小鼠腸道內(nèi)SIgA的分泌量[18]。本研究表明，SIgA 在21日齡、35日齡中劑量和高劑量明顯高于對(duì)照組，且疫苗對(duì)照組明顯高于空白組，證明疫苗免疫后可提高SIgA的分泌量，配合黨參多糖可溶性粉使用則可使分泌量提高。提示黨參多糖可溶性粉可明顯提高肉仔雞腸內(nèi)sIgA的分泌量，表明黨參多糖可溶性粉可增強(qiáng)肉仔雞的腸粘膜免疫功能。

黨參多糖可溶性粉與新城疫疫苗配合使用可增強(qiáng)疫苗效果，并且對(duì)免疫系統(tǒng)有一定的調(diào)節(jié)作用，且中劑量推薦為最適臨床用量。

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(編輯：陳希)

Effects of Codonopsis Pilosula Polysaccharides Soluble Powder on Broiler Serum Antibody Level of ND, IgG and Intestinal SIgA Content

SHI Yi-nan, YANG Rong-juan, YI Yan-yan, SUN Na, SUN Yao-gui, LI Hong-quan*

(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi030801 ,China)

The effects of codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder on immune function of broilers. 308 Ross 300 broilers were divided into codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder high, medium and low dose group, positive control group, immune control group and blank control group, 50 broilers in each group. The codonopsis pilosula polysaccharides soluble high, medium and low dose group added 0.1, 0.2 and 0.4 g drugs per kilogram drinking water. In positive drug control group, 0.2 g astragalus polysaccharide in astragalus was added per kilogram drinking water, and in the immune control group and blank control group ,there were added no drugs. Except for the blank group, at the age of 7 d the others were the first intranasal immunized with Newcastle disease virus live vaccine (La Sota), and at 21 d of age were immunized again according to the first immuninzation, moreover the durgs were simultaneously administrated with the immunization for three consecutive days. The results showed that the drinking water added codonopsis pilosula polysaceharides soluble powder has obvious enhanced the indexes of thymus, spleen and bursa of fabricius and the contents of anti-ND antibody, IgG and SIgA in serum were significantly increased(P<0.05). In addition, were also increased the weight gain of broilers in the codonopsis pilosula polysaceharides soluble powder treatment group(P<0.05). Hence, codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder enhanced the immune function of broilers and promoted the body weight growth, and 0.2 g codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder added in per kilogram drinking water was the best.

codonopsis soluble powder; immune regulation; broilers

農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目(2014GB2A300003)

石軼男，碩士研究生，從事中藥調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能及其分子機(jī)制方面研究。

李宏全。E-mail: livets@163.com

2016-07-15

A

1002-1280 (2016) 09-0047-06

S853.7