趙 紅，宋玉竹

（1.昆明理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，云南昆明 650500；2.中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所，云南昆明 650500）

醋酸鉛對(duì)人和小鼠瞬時(shí)受體電位A1離子通道的抑制作用

趙 紅1，2，宋玉竹1

（1.昆明理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，云南昆明 650500；2.中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所，云南昆明 650500）

目的 研究醋酸鉛對(duì)瞬時(shí)受體電位A1（TRPA1）通道的影響。方法 應(yīng)用細(xì)胞內(nèi)鈣熒光成像系統(tǒng)檢測(cè)原代培養(yǎng)的小鼠背根神經(jīng)節(jié)（DRG）神經(jīng)元上TRPA1（mTRPA1）通道和外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的人源TRPA1（hTRPA1）和mTRPA1通道介導(dǎo)的細(xì)胞外鈣內(nèi)流；應(yīng)用雙電極電壓鉗技術(shù)記錄外源性表達(dá)在爪蟾卵母細(xì)胞上的hTRPA1通道介導(dǎo)的電流。結(jié)果 醋酸鉛3.0和10.0 μmol·L-1對(duì)TRPA1介導(dǎo)的小鼠DRG神經(jīng)元外鈣內(nèi)流的抑制率分別為（36.7±4.1）%和（79.4±3.1）%；醋酸鉛濃度依賴性地抑制爪蟾卵母細(xì)胞上hTRPA1通道介導(dǎo)的電流，醋酸鉛0.3，1.0，3.0，10.0和30.0 μmol·L-1對(duì)+80 mV處電流的抑制率分別為（1.0±0.7）%，（11.6±0.8）%，（57.7±3.2）%，（93.6±2.6）%和（93.2±2.7）%，其IC50為2.4 μmol·L-1。結(jié)論 TRPA1通道是鉛的內(nèi)源性作用靶點(diǎn)，低濃度醋酸鉛可抑制TRPA1通道。

醋酸鉛；背根神經(jīng)節(jié)；神經(jīng)元；瞬時(shí)受體電位A1通道；電壓鉗技術(shù)；鈣成像

鉛作為一種常見的工業(yè)毒物和環(huán)境污染物，對(duì)人體健康危害很大。人長期接觸低濃度鉛造成體內(nèi)蓄積，會(huì)導(dǎo)致造血、泌尿、生殖、免疫、神經(jīng)、心血管和消化等系統(tǒng)長期慢性的損傷。血鉛水平1 mg·L-1時(shí)即可表現(xiàn)出行為改變。鉛的神經(jīng)毒性可導(dǎo)致包括感覺功能、運(yùn)動(dòng)能力、注意力、視聽記憶和情感狀態(tài)等在內(nèi)的神經(jīng)功能變化［1-2］。鉛主要影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)［3］，而外周神經(jīng)系統(tǒng)是慢性鉛中毒最主要的靶器官之一［4］。鉛中毒性外周神經(jīng)疾病的臨床研究也較多，在臨床鉛中毒案例中，有很大比例的患者出現(xiàn)了觸痛覺障礙［5］。

瞬時(shí)受體電位（transient receptor potential，TRP)A1通道是位于外周神經(jīng)系統(tǒng)上的離子通道，屬于TRP通道中的一種。TRPA1通道可被多種刺激性化學(xué)物質(zhì)所激活，如異硫氰酸丙酯（propyl iso?thiocyanate，AITC）和甲醛等［6］，被認(rèn)為是人體的一個(gè)化學(xué)感受器［7］。環(huán)境污染物中也有多種成分能激活TRPA1通道，如丙烯醛、直徑≤2.5 μm的可入肺顆粒物和某些重金屬離子等［8］。作為一個(gè)組織傷害感受器的通道，敲除TRPA1通道基因小鼠對(duì)傷害性化學(xué)刺激的感受顯著降低［9-10］，表明此通道與痛覺感受相關(guān)。此外，TRPA1通道還與溫度感受和機(jī)械感受相關(guān)，參與多種重要的生理和病理過程［11］。

鉛的神經(jīng)毒性涉及到多種信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)和離子通道。鉛作用于神經(jīng)元細(xì)胞上多種離子通道，如鉀、鈉和鈣通道等，但是關(guān)于鉛對(duì)TRPA1通道的作用國內(nèi)外未見報(bào)道。本研究集體已觀察到鉛對(duì)小鼠背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion，DRG）神經(jīng)元上TRPA1通道的抑制作用。本研究進(jìn)一步將小鼠TRPA1（mTRPA1）和人TRPA1（hTRPA1）通道在HEK293細(xì)胞和爪蟾卵母細(xì)胞中表達(dá)，研究醋酸鉛對(duì)TRPA1通道的作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、細(xì)胞、試劑和主要儀器

C57BL/6新生小鼠，中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所，動(dòng)物許可證號(hào)：11401300006046；非州爪蟾，中國科學(xué)院上海生命科學(xué)學(xué)院贈(zèng)送。HEK293細(xì)胞：中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所。mTRPA1和hTRPA1重組質(zhì)粒，中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所楊建研究員實(shí)驗(yàn)室。醋酸鉛（西隴化工股份有限公司）；DMEM和DMEM/F12（美國Corning公司）；膠原蛋白酶P（瑞士Roche公司）；Hanks平衡鹽溶液（HBSS，北京索萊寶科技有限公司）；胰蛋白酶和青/鏈霉素（德國BI公司）；小牛血清和胎牛血清（美國Gibco公司）；NaCl，KCl，MgCl2，HEPES和CaCl2（中國生工生物公司）；Fura-2，F(xiàn)-127和G418（美國Invitrogen公司）；轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000（美國Life Technology公司）；AITC（美國Sigma公司）；辣椒素和三卡因（中國阿拉丁公司）。CSMZ-168型解剖鏡（德國Motic公司）；5702型水平離心機(jī)和5424R型超速離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；IX71型鈣熒光成像系統(tǒng)（日本Olympus公司）；230V細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國Thermo公司）；LS-172細(xì)菌培養(yǎng)箱（菲律賓LabServ公司）；鈣離子熒光激發(fā)顯微系統(tǒng)（Flexstation3，美國Molecular Devices公司）；1440A雙電極電壓鉗（美國Axon公司）。

1.2 醋酸鉛溶液配制

稱取3.25 g醋酸鉛，溶于100 mL超純水中，配制成醋酸鉛100 mmol·L-1儲(chǔ)存液，室溫保存。臨用時(shí)用含鈣的生理溶液（mmol·L-1：NaCl 140，KCl 4.25，MgCl21.7，HEPES 8.5，CaCl22）進(jìn)行相應(yīng)的濃度梯度稀釋。

1.3 小鼠DRG神經(jīng)元和HEK293細(xì)胞培養(yǎng)

分離C57BL/6新生小鼠DRG置于HBSS中，用膠原蛋白酶P 0.5 μg·L-1于37℃消化20 min；用胰蛋白酶2 g·L-1于37℃消化2 min；終止酶消化吹打分散后，按109L-1密度將神經(jīng)元分入96孔板培養(yǎng)，48 h后進(jìn)行鈣成像實(shí)驗(yàn)。

HEK293細(xì)胞培養(yǎng)于含有10%小牛血清、青霉素100 kU·L-1和鏈霉素100 mg·L-1的DMEM，置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。穩(wěn)轉(zhuǎn)系細(xì)胞在培養(yǎng)基中另外加入的抗生素G418 0.2 μg·L-1。

1.4 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染［6］

采用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法。HEK293細(xì)胞傳代24 h之內(nèi)，細(xì)胞密度為80%進(jìn)行轉(zhuǎn)染。將hTRPA1和mTRPA1重組質(zhì)粒1.5 μg與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑混合在DMEM中，靜置15~20 min后加入HEK293細(xì)胞中開始轉(zhuǎn)染，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48 h后將細(xì)胞酶解后進(jìn)行鈣熒光成像實(shí)驗(yàn)。

1.5 細(xì)胞鈣熒光成像實(shí)驗(yàn)［6］

DRG神經(jīng)元和表達(dá)外源性通道的HEK293細(xì)胞在含有10 μmol·L-1Fura-2和0.04%F-127的無鈣生理溶液（mmol·L-1：NaCl 140，KCl 4.25，MgCl21.7，HEPES 8.5）中37℃染色1 h，無鈣生理溶液洗滌2次，加入上述含鈣生理溶液。DRG神經(jīng)元在加入醋酸鉛3和10 μmol·L-12 min之后加入AITC 100 μmol·L-1，進(jìn)行熒光檢測(cè)；陽性對(duì)照組為無醋酸鉛處理、直接加入AITC 100 μmol·L-1灌流。HEK293細(xì)胞直接進(jìn)行熒光檢測(cè)。使用IX71型鈣熒光成像系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞鈣熒光采集，Metafluor軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。通過檢測(cè)DRG神經(jīng)元和HEK293細(xì)胞加入相應(yīng)的離子通道特異性激動(dòng)劑后熒光值的變化，確定醋酸鉛對(duì)特定離子通道的作用。

1.6 RNA制備

將hTRPA1重組質(zhì)粒載體用限制性內(nèi)切酶將其線性化；然后用PCR試劑盒將DNA進(jìn)行純化；使用T7 RNA聚合酶體系（5×T7聚合酶緩沖液20 μL+0.1 mol·L-1二硫蘇糖醇10 μL+RNA酶重組核糖核酸酶抑制劑2 μL+25 mmol·L-1rNTPs 10 μL+ 40 U·μL-1T7 RNA聚合酶1 μL+m7G帽子10 μL+水47 μL，共100 μL）體外合成2 h，然后進(jìn)行mRNA純化；最后用水將RNA溶解，置于-80℃保存。

1.7 卵母細(xì)胞制備和TRPA1通道表達(dá)及電流記錄

非洲爪蟾用3%三卡因麻醉，腹部取卵母細(xì)胞放入生理溶液OR2（mmol·L-1：NaCl 82.4，KCl 2.5，MgCl21，HEPES 5），加入0.15 μg·L-1膠原蛋白酶A振蕩消化1.5 h，OR2振蕩洗滌2次，每次15 min，放入含有青霉素100 kU·L-1和鏈霉素100 mg·L-1的生理溶液ND96（mmol·L-1：NaCl 96，KCl22.5，MgCl21，HEPES 5，CaCl21.8）中進(jìn)行培養(yǎng)，顯微注射hTRPA1的RNA，每個(gè)卵母細(xì)胞50.6nL，表達(dá)后進(jìn)行電流記錄。

雙電極電壓鉗電流記錄：記錄時(shí)電極電阻為2~ 10 MΩ，采樣頻率為5 kHz。鉗位電壓為-80 mV，給予指令電位從-100持續(xù)至+100 mV，時(shí)程為100 ms，用pClamp 10.2軟件處理資料。記錄液（mmol·L-1：NaCl 100，KCl 2.5，MgCl21，HEPES 5）。電極內(nèi)液：KCl 3 mol·L-1。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均以x±s表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用方差分析和配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。劑量效應(yīng)曲線的擬合采用Logistic方程。

2 結(jié)果

2.1 醋酸鉛抑制小鼠DRG神經(jīng)元TRPA1通道激動(dòng)劑AITC引起的鈣離子內(nèi)流

小鼠DRG神經(jīng)元用Fura-2染色后進(jìn)行鈣熒光檢測(cè)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，97%表達(dá)TRPA1通道的DRG神經(jīng)元同時(shí)表達(dá)TRPV1［6］。在本研究條件下，給神經(jīng)元依次灌流TRPA1通道特異性激動(dòng)劑AITC和TRPV1激動(dòng)劑辣椒素。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入AITC后部分神經(jīng)元的鈣熒光信號(hào)增強(qiáng)（圖1）；隨后加入辣椒素，這些對(duì)AITC起反應(yīng)的神經(jīng)元均對(duì)辣椒素有反應(yīng)，對(duì)AITC有反應(yīng)的神經(jīng)元占到對(duì)辣椒素有反應(yīng)神經(jīng)元的（14.0±1.0）%。加入醋酸鉛后，對(duì)辣椒素有反應(yīng)的神經(jīng)元數(shù)量穩(wěn)定，而對(duì)AITC有反應(yīng)的神經(jīng)元數(shù)量明顯降低（P< 0.01）。加入醋酸鉛3和10 μmol·L-1后，對(duì)AITC有反應(yīng)的神經(jīng)元所占的比例由（14.0±1.0）%分別降至（8.9±1.12）%和（3.0±0.2）%，與陽性對(duì)照組之間存在顯著差異（P<0.01，n=5）。由此可見，醋酸鉛抑制了TRPA1通道特異性激動(dòng)劑AITC引起的鈣熒光信號(hào)的增加，醋酸鉛濃度越高，抑制作用越強(qiáng)，提示DRG神經(jīng)元上的TRPA1通道可能被醋酸鉛抑制。

Fig.1 Propyl isothiocyanate（AITC）induced external calcium influx in dorsal root ganglion（DRG）neurons inhibited by lead acetate（×200）.The representative ratio?metric calcium images of DRG neurons activated by AITC 100 μmol·L-1in the presence（lead acetate 10 μmol·L-1for 2 min）or absence（control）of lead acetate，the duration of AITC perfusion was 1 min.

2.2 醋酸鉛抑制外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞的TRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流

mTRPA1通道基因在HEK293細(xì)胞過表達(dá)后進(jìn)行活細(xì)胞鈣成像實(shí)驗(yàn)。TRPA1通道特異性激動(dòng)劑AITC 100 μmol·L-1可引起過表達(dá)mTRPA1通道的HEK293細(xì)胞內(nèi)鈣熒光信號(hào)增加，醋酸鉛3 μmol·L-1可抑制mTRPA1通道介導(dǎo)的鈣信號(hào)（圖2A），抑制比例為（47.2±2.8）%。在過表達(dá)hTRPA1通道的HEK293細(xì)胞中得到類似結(jié)果。醋酸鉛對(duì)hTRPA1通道介導(dǎo)的鈣熒光信號(hào)具有濃度依賴性抑制作用（圖2B），醋酸鉛3.0，5.0，10.0和30.0 μmol·L-1對(duì)鈣熒光信號(hào)的抑制分別為（30.6±6.0）%，（34.9±4.6）%，（60.2±0.9）%和（62±1.1）%（n=5，P<0.01）。由此可見，醋酸鉛能抑制外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞上mTRPA1和hTRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流，此結(jié)果與醋酸鉛對(duì)神經(jīng)元的作用一致。

Fig.2 Inhibitory effect of lead acetate on mouse and human transient receptor potential A1（mTRPA1 and hTRPA1）mediated calcium influx，which was expressed in HEK293 cells.A：lead acetate 3 μmol·L-1on mTRPA1 mediated calcium influx（n=8）；B：lead acetate 10 μmol·L-1on hTRPA1 mediated calcium influx（n=6）.HEK293 cells were perfused with AITC 100 μmol·L-1for 1 min，and then perfused with AITC 100 μmol·L-1and lead acetate 10 μmol·L-1for 100 s.

2.3 醋酸鉛抑制外源性表達(dá)在爪蟾卵母細(xì)胞中的hTRPA1通道介導(dǎo)的電流

為了進(jìn)一步定量分析醋酸鉛對(duì)hTRPA1通道的抑制作用，將hTRPA1通道過表達(dá)在爪蟾卵母細(xì)胞后運(yùn)用雙電極電壓鉗技術(shù)進(jìn)行電流記錄。AITC 30 μmol·L-1可引起hTRPA1通道介導(dǎo)的全細(xì)胞電流，加入醋酸鉛可抑制hTRPA1通道介導(dǎo)該電流。醋酸鉛抑制hTRPA1通道介導(dǎo)的電流呈濃度依賴性，濃度越高抑制比例越大。醋酸鉛10 μmol·L-1可將AITC 30 μmol·L-1引起的電流抑制85.9%（圖3A）。醋酸鉛0.3，1.0，3.0，10.0和30.0 μmol·L-1對(duì)+80 mV處電流的抑制率分別為（1.0±0.7）%，（11.6±0.8）%，（57.7±3.2）%，（93.6±2.6）%和（91.2±2.0）%（n≥4）。分析不同濃度醋酸鉛對(duì)hTRPA1介導(dǎo)的電流的抑制率，以Logistic方程擬合，得出醋酸鉛引起電流抑制的濃度效應(yīng)曲線關(guān)系，其IC50為2.4 μmol·L-1（圖3 B）。

Fig.3 Inhibitory effect of lead acetate on hTRPA1-mediated current，which was exogenously expressed inXenopusoocytes.A：inhibitory effect of lead acetate 10 μmol·L-1on hTRPA1-mediated current in the presence of 30 μmol·L-1AITC，the duration of AITC and lead acetate perfusion were 50 s and 90 s，respectively，currents were recorded with the protocol（top）.After treatment with lead acetate 10.0 μmol·L-1，currents were decreased by 85.9%at+80 mV（medium）.B：concentrationresponse curve of lead acetate on hTRPA1-mediated current at+80 mV.The smooth curves were generated from fit of the data using a Logistic equation，and IC50is 2.4 μmol·L-1.x±s，n≥4.

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，醋酸鉛對(duì)于外周神經(jīng)系統(tǒng)的TRPA1通道具有抑制作用。據(jù)報(bào)道，包括Cr2+和Hg2+在內(nèi)的多種二價(jià)重金屬離子對(duì)TRPA1通道有激活作用［12-14］。與這些重金屬離子作用不同的是，本研究結(jié)果則表明，醋酸鉛對(duì)TRPA1通道有抑制作用。首先，利用鈣熒光成像技術(shù)發(fā)現(xiàn)醋酸鉛抑制TRPA1通道的特異性激動(dòng)劑AITC可引起的DRG神經(jīng)元細(xì)胞外鈣內(nèi)流產(chǎn)生鈣熒光。細(xì)胞鈣熒光是由于細(xì)胞外鈣離子流入細(xì)胞內(nèi)與染料Fura-2結(jié)合所發(fā)出的熒光，鈣熒光被抑制表明小鼠DRG神經(jīng)元上的TRPA1通道可能被醋酸鉛所抑制。為證明醋酸鉛對(duì)TRPA1通道的作用，在HEK293細(xì)胞中外源性表達(dá)mTRPA1和hTRPA1通道基因，檢測(cè)醋酸鉛對(duì)TRPA1通道介導(dǎo)的HEK293細(xì)胞鈣熒光的影響。結(jié)果表明，醋酸鉛的確能抑制mTRPA1和hTRPA1通道介導(dǎo)的HEK293細(xì)胞鈣熒光，該熒光被抑制表明醋酸鉛抑制了mTRPA1和hTRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流。進(jìn)一步在爪蟾卵母細(xì)胞中外源性過表達(dá)hTRPA1通道，對(duì)醋酸鉛抑制hTRPA1的作用進(jìn)行進(jìn)一步的定量分析。結(jié)果表明，醋酸鉛濃度依賴性地抑制hTRPA1通道介導(dǎo)的電流。以上結(jié)果均表明，醋酸鉛對(duì)TRPA1通道具有抑制作用。

TRPA1通道廣泛分布于DRG、三叉神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)，這些神經(jīng)廣泛支配著皮膚、呼吸道和胃腸道等組織器官。TRPA1通道的生理功能與疼痛和機(jī)械感受相關(guān)，其受到抑制可使皮膚對(duì)外界的機(jī)械感受能力下降。鉛是一種親神經(jīng)性毒物，體內(nèi)蓄積到一定水平可引起神經(jīng)組織損害，鉛中毒重癥病例導(dǎo)致鉛麻痹，出現(xiàn)垂腕、垂足等癥狀。李穎等［5］臨床研究表明，在124例鉛中毒患者中，92例出現(xiàn)了觸痛覺障礙，比例高達(dá)74.2%。觸痛覺障礙表明外周神經(jīng)系統(tǒng)與觸痛覺感受相關(guān)的途徑出現(xiàn)了障礙，TRPA1通道是外周神經(jīng)系統(tǒng)與觸痛覺相關(guān)的離子通道。本研究結(jié)果表明，醋酸鉛對(duì)TRPA1通道具有抑制作用，提示醋酸鉛對(duì)TRPA1通道的抑制作用可能是其外周神經(jīng)系統(tǒng)毒性的重要組成部分。

日常生活中接觸到的大氣、土壤、塵埃、水、裝飾材料、日用品、玩具和學(xué)習(xí)用品都可能含有鉛。鉛在人體內(nèi)長期積累對(duì)人體危害極大，鉛抑制hTRPA1通道介導(dǎo)的電流的IC50僅為2.4 μmol·L-1，而人體內(nèi)血鉛濃度>100 μg·L-1（約0.5 μmol·L-1），即視為鉛中毒，這個(gè)濃度接近鉛抑制TRPA1通道的濃度。

研究表明，我國人口的鉛中毒比例約10%。杜靜等［15］研究大慶地區(qū)兒童鉛中毒的比例，城區(qū)兒童血鉛濃度≥100 μg·L-1的比例高達(dá)21.1%，農(nóng)村兒童則為18.4%，且隨著年齡的增長，鉛中毒的比例逐漸增高。隨著現(xiàn)代化工業(yè)、交通、運(yùn)輸業(yè)的快速發(fā)展，鉛污染的危害可能會(huì)日益加重，研究鉛中毒機(jī)制從而尋求有效的治療方法已成為重要的課題。本研究發(fā)現(xiàn)，醋酸鉛對(duì)TRPA1通道有抑制作用，為醋酸鉛對(duì)TRPA1通道的抑制作用機(jī)制及其外周神經(jīng)系統(tǒng)毒性作用的研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Inhibitory effect of lead acetate on TRPA1 channel in mice and humans

ZHAO Hong1，2，SONG Yu-zhu1
（1.Academy of Life and Science，Kunming University of Science and Technology，Kunming 650500，China；2.Kunming Institute of Zoology，Chinese Academy of Sciences，Kunming 650500，China）

OBJECTIVE To investigate the inhibitory effect of lead acetate on transient receptor potential A1（TRPA1）channel.METHODS TRPA1-mediated calcium influx in mice dorsal root ganglion（DRG）neurons and HEK293 cells expressing nouse TRP1（mTRPA1）and human TRPA1（hTRPA1）wasrecorded by intracellular calcium imaging.TRPA1-mediated currents were detected by two-electrode voltage clamp.RESULTS Lead acetate 3.0 and 10.0 μmol·L-1inhibited external calcium influx in DRG neurons by（36.7±4.1）%and（79.4±3.1）%（n=5），respectively.The inhibitory effect of lead acetate on hTRPA1-mediated current was concentration-dependent.Lead acetate 0.3，1.0，3.0，10.0 and 30.0 μmol·L-1inhibited the amplitudes of currents by（1.0±0.7）%，（11.6±0.8）%，（57.7±3.2）%，（93.6± 2.6）%and（91.2±2.0）%（n≥4），respectively，with the IC502.4 μmol·L-1.CONCLUSION TRPA1 channel may be an endogenous target of lead.Lead acetate inhibits TRPA1 channel at a very low concentration.

lead acetate；dorsal root ganglion；neuron；transient receptor potential A1 channel；two-electrode voltage clamp；calcium imaging

SONG Yu-zhu，E-mail：yuzhusong@kmust.edu.cn

R995

A

1000-3002-（2016）09-0949-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2016.09.007

2015-11-07接受日期：2016-07-15）

（本文編輯：齊春會(huì)）

趙 紅，碩士研究生，主要從事神經(jīng)毒理學(xué)研究。

宋玉竹，E-mail：yuzhusong@kmust.edu.cn