王小梅

免疫組織化學(xué)技術(shù)常見問題分析及改進(jìn)措施

王小梅

目的 探討分析免疫組織化學(xué)技術(shù)中比較常見的問題，對這些問題進(jìn)行解決。方法 根據(jù)2010年1月～2012年12月我院的80例患者進(jìn)行分析，按照不同切片方式分成A、B兩組，對比兩組的切片質(zhì)量，分析問題。 結(jié)果 A組使用傳統(tǒng)操作方式，共出現(xiàn)了15例問題切片，2例脫片、5例弱陽性、2例染色過強、6例非特異性染色；B組有40例切片合格。兩組切片成功率差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 免疫組織化學(xué)技術(shù)包含的環(huán)節(jié)多，存在的問題多，需要對其進(jìn)行研究分析，尋找解決方案，對該技術(shù)進(jìn)行完善。

免疫組織；化學(xué)技術(shù)；改進(jìn)措施

免疫組織化學(xué)檢驗對切片的要求比較高。切片的制作比較復(fù)雜，有很多的環(huán)節(jié)，所以臨床中常常出現(xiàn)問題，一個環(huán)節(jié)的誤差將會對整個結(jié)果產(chǎn)生影響[1]。因此對醫(yī)務(wù)人員的技術(shù)要求比較高，要嚴(yán)格管控好每個細(xì)節(jié)，獲得最精確的結(jié)果。此次筆者根據(jù)自己的工作經(jīng)驗進(jìn)行了分析探討，總結(jié)常見問題，給出改進(jìn)意見，現(xiàn)進(jìn)行以下報道。

1　資料與方法

1.1一般資料

2010年1月～2012年12月我院選取了80例接受病理分析診斷的患者，按照不同切片方式分組為A、B兩組，兩組一般資料差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2方法

本次研究中A組（40例）依據(jù)傳統(tǒng)操作方法切片，（1）利用中性10.0%福爾馬林進(jìn)行切片固定；（2）對行觀測的載玻片進(jìn)行浸泡、沖洗、涂膠操作；（3）選取效果較好的組織塊，制作切片；（4）對切片進(jìn)行染色；（5）選擇同切片最為敏感且無其他干擾影響的檢測系統(tǒng)；（6）利用性能優(yōu)良的顯色劑實施顯色。

B組（40例）依據(jù)改進(jìn)后的操作方法切片，在傳統(tǒng)操作的基礎(chǔ)上在染色后選擇最為恰當(dāng)?shù)男迯?fù)液以及方法增加抗原修復(fù)步驟；并在檢測系統(tǒng)選定后進(jìn)行預(yù)實驗，以確定適合實驗操作的各項指標(biāo)最佳值。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

研究中兩組患者的切片數(shù)據(jù)使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 11.0進(jìn)行分析，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

A組使用傳統(tǒng)操作方式，共出現(xiàn)了15例問題切片，2例脫片、5例弱陽性、2例染色過強、6例非特異性染色；B組有40例切片合格。兩組切片成功率差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3　討論

3.1切片常見問題

檢測過程中遇到的一些常見問題：（1）脫片。這個是免疫組織化學(xué)檢測對于細(xì)節(jié)處理不當(dāng)?shù)葘?dǎo)致的常見問題之一；（2）弱陽性。沒有對陰性對照染色而使得陽性標(biāo)本顯弱陽性；（3）染色過強?？贵w濃度過高或者孵育時間過長和溫度過高導(dǎo)致的染色過強；（4）非特異性染色。

3.2常見問題的改進(jìn)

（1）防止脫片。在制作免疫組織化學(xué)切片的時候，因為，切片太厚、玻片不潔凈而會出現(xiàn)脫片，為了防止該情況，應(yīng)該做好如下準(zhǔn)備：①清潔玻片。先置于洗潔精水中浸泡然后沖洗，再放入防脫劑浸泡，最后烘干。②切片以2～3 μm最佳，固定組織要及時，讓其脫水充分，適當(dāng)浸蠟，只要操作規(guī)范合理就能夠避免脫片發(fā)生[2-4]。（2）防止弱陽。弱陽是在反應(yīng)良好和不反應(yīng)之間的狀態(tài)，主要原因如下：①抗原修復(fù)方式引起的，石蠟是切片固定劑，抗原封閉抗原，所以要特殊處理，常用的是抗原熱修復(fù)或者酶消化法，有時也可以將兩種方法混合使用，后者是溶解蛋白進(jìn)行修復(fù)，也是最早的方式。一般廠商對實驗試劑會進(jìn)行適用范圍說明，在使用時要根據(jù)梯度測試來選擇濃度。②沖洗液殘留問題，切片上殘留的沖洗液會導(dǎo)致抗體加入后備稀釋。孵育時要讓切片水平放置，否則會導(dǎo)致抗體流失。（3）正確操作使染色適度。過度染色是沒有控制好抗體的濃度以及孵育的時間所導(dǎo)致的，現(xiàn)在的抗體都是高濃縮性抗體，其相應(yīng)的孵育時間需要保證在1 h，溫度為4℃，這樣可避免不利反應(yīng)出現(xiàn)，當(dāng)溫度超過37℃，就會有促進(jìn)抗體反應(yīng)，所以一般我們免疫組織化學(xué)處理問題要控制在20～28℃[5-6]。（4）防止非特異性免疫。內(nèi)源性酶和生物素要去除，血清的選取應(yīng)該避免出血和壞死血清，選擇的抗體純度要達(dá)標(biāo)，可適當(dāng)采取針對性單抗體處理方式[7]。

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Analysis and Improvement Measures of the Common Problems in the Immunohistochemical Technique

WANG Xiaomei Department of Pathology, The Fourth Hospital of Daqing, Daqing Heilongjiang 163712, China

Objective To explore and analyze the common problems in the immunohistochemical technique, and to solve these problems. Methods 80 cases in our hospital were analyzed from January 2010 to December 2012, according to the different sections of the two groups were divided into groups, compared with the two groups of the quality of the section, the analysis of the problem. Results A group using the traditional operation method, a total of 15 cases of the problem, 2 cases took off, 5 cases of weak positive, 2 cases of dyeing too strong, 6 cases of non-specific staining; B group of 40 cases of biopsy. There was significant difference in the success rate of the two groups (P＜0.05). Conclusion The immune tissue chemistry technology contains many links, there are many problems, which need to be studied and analyzed, looking for solutions, to improve the technology.

Immune tissue, Chemical technology, Improvement measures

R446

A

1674-9308（2016）30-0050-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.30.030

大慶市第四醫(yī)院病理科，黑龍江 大慶 163712

3.3進(jìn)行預(yù)實驗

觀察切片前要進(jìn)行預(yù)實驗，獲得最佳的抗體修復(fù)方式、稀釋度、孵育時間，這樣可以提升檢驗的準(zhǔn)確度。預(yù)實驗要按照試劑廠家的對照片來進(jìn)行試驗，如果沒有對照片，則應(yīng)該查閱文獻(xiàn)了解何種組織表達(dá)高。不進(jìn)行預(yù)實驗很容易導(dǎo)致標(biāo)本和藥劑的浪費[8]。

此次研究中我們對各個細(xì)節(jié)進(jìn)行了管控，避免了問題的出現(xiàn)，現(xiàn)在實驗越來越多，技術(shù)也越來越成熟，但是免疫組織化學(xué)實驗對各步驟的精確度要求比較高，所以需要我們對每個環(huán)節(jié)都重視才能夠獲得比較好的效果，為臨床診斷提供精確的參考依據(jù)。免疫組織化學(xué)常見問題比較多，我們對其進(jìn)行探討分析，希望能夠為臨床檢驗提供參考，提升診斷的準(zhǔn)確度。