趙達卓,杜秋明,張　穎,許龍春

(吉林省延邊州動物疫病預防控制中心，吉林 延邊 133000)

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豬場環(huán)境測定及對敏感抗生素的篩選

趙達卓,杜秋明,張穎,許龍春

(吉林省延邊州動物疫病預防控制中心，吉林 延邊 133000)

豬舍環(huán)境不衛(wèi)生是誘發(fā)疫病的重要因素之一，目前環(huán)境因素不被養(yǎng)殖戶所重視，導致豬群疫病暴發(fā)，從而給養(yǎng)殖戶造成經(jīng)濟損失。通過對豬場空氣中以及飲用水中的細菌數(shù)進行檢測，與國家規(guī)定的標準進行比較，對比是否符合環(huán)境養(yǎng)殖標準,通過藥敏試驗檢測空氣中常在的細菌對何種抗生素敏感，為養(yǎng)殖戶合理用藥提供理論依據(jù)。

豬場；環(huán)境測定；敏感抗生素；篩選

我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，近幾年來養(yǎng)豬模式由傳統(tǒng)的分散養(yǎng)殖快速向規(guī)?；⒓s化和產(chǎn)業(yè)化方向發(fā)展，但是隨著規(guī)模的不斷擴大，新的制約因素不斷出現(xiàn)，尤其是在豬場衛(wèi)生防御體系上，衛(wèi)生防御體系脆弱，易受外界環(huán)境的干擾；豬場的飼養(yǎng)環(huán)境惡劣，限制新技術(shù)的應用[1]，使豬的生產(chǎn)性能難以發(fā)揮；出現(xiàn)這些因素的原因在于豬場內(nèi)外環(huán)境的污染和生態(tài)系統(tǒng)的破壞。規(guī)模豬場產(chǎn)生的糞便和污水量較大，并且集中，超出周圍環(huán)境的消納能力[2]，生態(tài)環(huán)境變的極為脆弱與歐盟國家相比有很大的差距。

歐盟國家對畜禽廢棄物的先進管理超過很多國家，不僅擁有農(nóng)牧混合發(fā)展的歷史傳統(tǒng)和現(xiàn)代技術(shù)，畜牧業(yè)也相當發(fā)達，在農(nóng)業(yè)產(chǎn)品中占很重要的位置。同時，也是世界環(huán)境保護領(lǐng)域的帶頭人[3]，尤其是農(nóng)業(yè)環(huán)境保護政策的涉及范圍廣、支持力度大、農(nóng)民和消費者環(huán)保意識強，作為先進工業(yè)化的地區(qū)，歐盟各國起初也受到環(huán)境問題的困擾，起初實行的單一養(yǎng)殖模式給農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境帶來巨大的影響。糞尿的肆意排放、無序處理對地表水及地下水造成很大污染[4]，雖然養(yǎng)殖模式向著集約化、規(guī)?；a(chǎn)，但是同樣也對土壤造成了嚴重的損害。歐盟成立后在畜禽養(yǎng)殖廢棄物的管理上出臺了一系列政策法規(guī)、管理規(guī)定、生態(tài)補償標準等，不但改善了起初的現(xiàn)狀，在對畜禽糞尿的處理上也有很大改觀[5]。中國與之相比較畜禽污染防治法較為粗放，大多數(shù)畜禽養(yǎng)殖場沒有污染治理措施，畜禽糞便未經(jīng)處理就地排放。畜禽的糞便和尿中有大量的病原微生物、寄生蟲卵，直接威脅環(huán)境和人類的健康。嚴重時還會導致人畜共患病的傳播，給人畜帶來災難性的危害，例如每年春季的流行豬瘟、豬丹毒、口蹄疫。在傳統(tǒng)的一家一戶養(yǎng)豬模式的轉(zhuǎn)化過程中由于對環(huán)境的重視不夠[6]，導致養(yǎng)豬環(huán)境惡化，進而引起疾病的流行，豬的生產(chǎn)性能、健康狀況和肉的品質(zhì)都受到影響，進而給養(yǎng)殖戶帶來經(jīng)濟損失，所以養(yǎng)殖環(huán)境是制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素。環(huán)境是防控疾病的首要因素，豬生長在適宜的環(huán)境中，機體抵抗力增強，減少疾病的發(fā)生。不良的環(huán)境可直接導致疫病的發(fā)生和傳播[7]，同時可促使疫病的暴發(fā)。如豬舍內(nèi)的濕度過高可影響新陳代謝，引起仔豬黃白痢;寒冷對仔豬的間接影響更大，是仔豬黃白痢和傳染性胃腸炎等腹瀉性疾病的主要誘因，還能引起呼吸道疾病。

環(huán)境是提高生產(chǎn)效率的關(guān)鍵。豬生長在適宜的環(huán)境中能充分發(fā)揮其遺傳潛力，各項生產(chǎn)性能均能發(fā)揮正常[8]。不良的環(huán)境嚴重制約著豬的各項生產(chǎn)性能。比如：高溫高濕環(huán)境下，豬食欲減退、體溫升高、精神不振;公豬性欲減退;空懷母豬不發(fā)情或發(fā)情異常，妊娠母豬胚胎死亡率高，臨產(chǎn)母豬在溫度過高的情況下甚至還可能造成死亡[9]。

由此可見，豬舍環(huán)境的好壞決定豬場的成敗，做好豬舍內(nèi)外的環(huán)境評價、環(huán)境監(jiān)測是很有必要的，夏季對成年豬做好防暑降溫工作，冬季提高新生仔豬和斷奶豬環(huán)境溫度。豬舍的濕度也是引發(fā)豬病的因素之一，為了防止?jié)穸冗^高，首先要減少豬舍內(nèi)水汽的來源，盡量不用大量的水沖刷圈舍，避免積水造成濕度過高，還要設(shè)置通風設(shè)備，經(jīng)常開啟門窗以降低室內(nèi)濕度，為美化豬場的環(huán)境可以在豬場周圍植草種樹，不但具有綠化環(huán)境的作用，夏季還能發(fā)揮遮陽的作用，適當?shù)慕档蜏囟萚10]。

不單是這些自然因素可以影響豬的生長，養(yǎng)殖場內(nèi)部的水質(zhì)也是影響豬只的重要因素，而影響水質(zhì)的不僅是水中的細菌，還有一些藻類，水藻是污染水源的微生物之一，有些水藻能夠產(chǎn)生對豬有毒的化合物，在極端的情況下，藻類能產(chǎn)生具有異味的物質(zhì)，使豬肉有塑料味或泥腥味[11]。被細菌和藻類污染的水會引起豬的疾病，有時會抑制其免疫系統(tǒng)，從而危害生產(chǎn)性能，還有些非致病的細菌和藻類會使水出現(xiàn)難聞的氣味和滋味，豬不愿飲水或采食導致生產(chǎn)性能下降。防止水質(zhì)污染的有效措施是對水管采取沖擊處理，采用有機酸和清潔劑進行清潔處理，隨后添加艾菌清，但是使用有機酸和清潔劑時要注意避免有機酸和清潔劑進入眼中或呼吸道造成生命危險[12]。近年來養(yǎng)殖戶不注重豬舍環(huán)境和養(yǎng)殖場飲用水的質(zhì)量，不合理的應用抗生素導致疫病的暴發(fā)，給養(yǎng)殖戶帶來經(jīng)濟損失，因此本實驗從圈舍內(nèi)細菌和水中微生物的檢測入手，為養(yǎng)殖戶解決圈舍和飲用水中微生物超標的問題，并且通過藥敏試驗為養(yǎng)殖戶在殺菌消毒用藥方面提供合理依據(jù)。

1　材料

1.1試驗用的藥品

抗生素：萬古霉素、萘啶酸、強力霉素、妥布霉素、乙酰螺施霉素、慶大霉素、四環(huán)素、紅霉素、新霉素、卡那霉素、壯觀霉素、痢特靈、新生霉素、林克霉素、氯霉素、氟哌酸、呋喃妥因、復方新諾明、利福平、多粘菌素B、先鋒霉素V、氨芐青霉素、頭孢曲松、先鋒孟多、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素、頭孢他定、頭孢拉定、頭孢拉定、青霉素G、鏈霉素、頭孢噻肟、丁胺卡那、麥迪霉素、世福素、環(huán)丙沙星、阿莫西林、奧復星、優(yōu)立新、洛美沙星、米諾環(huán)素、頭孢噻吩、頭孢哌酮、頭孢呋肟。

1.2試驗用的儀器

血液瓊脂培養(yǎng)基，藥敏試紙，溫度計，鑷子，移液器(10uL)，刻度尺，濕度計，豬舍飲用水，無菌注射器，高壓蒸汽滅菌器，干熱滅菌箱，37℃恒溫培養(yǎng)箱，菌落計數(shù)器。

2　方法

2.1試驗步驟

樣品的采集在豬舍內(nèi)養(yǎng)殖床的下方15cm區(qū)域內(nèi)采樣，取11個培養(yǎng)基平均放置在養(yǎng)殖場角落、中心、窗，放置2min后蓋上培養(yǎng)皿蓋收回，然后采用無菌注射器抽取豬舍飲用水1mL與培養(yǎng)基一并帶回。

實驗室檢測：采用藥敏試驗檢測法步驟如下,將取回的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10～18h;用移液器吸取培養(yǎng)好的菌落2uL注入培養(yǎng)平板上，用涂菌環(huán)涂抹均勻;用鑷子夾取藥敏片分別放置在培養(yǎng)平板上兩紙片間距大于25mm，紙片離培養(yǎng)皿邊緣15mm分別在培養(yǎng)平板下部標記抗生素名稱和菌種名稱;將平板底部向上在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h后觀察。

圈內(nèi)常在菌和豬舍飲用水菌數(shù)的檢測：無菌操作的方法用無菌移液器吸取混合均勻水樣1mL注入另一個培養(yǎng)平皿中用涂菌環(huán)涂抹均勻;將融化后的瓊脂倒入無菌培養(yǎng)平皿中將水樣與其混合均勻，然后取瓊脂倒入另一個培養(yǎng)平皿中作對照;待瓊脂冷卻后將培養(yǎng)平皿底部向上，放入恒溫培養(yǎng)箱中24h后取出計算每個平皿的菌數(shù)。

2.2判定標準

藥物敏感性判定標準參照美國臨床試驗室標準化委員會(National Committee Clinical Laboratory Standards NCCLS)頒布的《抗微生物藥物敏感性執(zhí)行標準第14版信息增刊》的標準進行。

3　結(jié)果

3.1環(huán)境和水質(zhì)情況

由試驗得知圈舍內(nèi)細菌總數(shù)是8.9629萬個/m3，標準參考值≤5萬個/m3；超過標準值3.9629萬個/m3，水中微生物數(shù)量577mL，標準參考值≤100mL，超過國家標準477mL。因此圈舍內(nèi)常在菌和飲用水中細菌數(shù)目均超過國家標準。

3.2抗生素敏感性結(jié)果

在藥敏紙片含量為10μg時，先鋒孟多的抑菌圈直徑是34mm，強力霉素的抑菌圈直徑是20mm，氟哌酸抑菌圈直徑是18mm，新生霉素抑菌圈直徑是14mm，丁胺卡那的抑菌圈直徑是12mm，四環(huán)素的抑菌圈直徑是7mm，利福平抑菌圈直徑是4mm，其余藥物均不產(chǎn)生抑菌圈。

4　討論

實驗中可知圈舍內(nèi)細菌總數(shù)是8.9629萬個/m3，標準參考值≤5萬個/m3，水中微生物數(shù)量577mL，標準參考值≤100mL，可以得出圈舍內(nèi)細菌總數(shù)和飲用水中微生物數(shù)量均不符合國家標準，圈舍空氣中細菌超標79.26%，陽性菌較多，霉菌陰性菌均存在。造成圈舍內(nèi)菌落超標的原因是由于豬舍通風設(shè)施不夠完善，對于封閉式豬舍夏季通風較好，冬季隨著天氣寒冷通風次數(shù)不斷減少而造成空氣中菌落超標。由于水源的管理不當導致水中微生物超標。

藥敏試驗得知：圈舍內(nèi)常在的細菌敏感抗生素是強力霉素、阿莫西林、洛美沙星；對新霉素、慶大霉素、四環(huán)素、鏈霉素均耐藥。仔豬黃白痢病原的分離及藥敏試驗得出：卡那霉素、多粘菌素高敏；氨芐西林及氟苯尼考中敏，對新霉素、慶大霉素、鏈霉素、四環(huán)素均耐藥，本次試驗與該學者實驗結(jié)果基本相同[12]。之所以有耐藥菌落的產(chǎn)生是由于不合理應用抗生素所至。

5　防治措施

冬季由于溫度過低、封閉式養(yǎng)殖場的通風和溫度之間存在矛盾，所以養(yǎng)殖戶為了保證溫度而不注重通風，往往是導致豬發(fā)病的因素之一，所以冬季也該注重通風，對開放式豬舍采用局部保溫，大環(huán)境通風，對于封閉式豬舍采用自動控制風機進行通風，同時規(guī)范的消毒程序也是不可缺少的，做好通風和消毒控制圈舍細菌在標準范圍之內(nèi)，減少由環(huán)境中細菌引起的疾病給養(yǎng)殖戶造成損失，同時找出水源菌落數(shù)超標的原因加以治理。

經(jīng)過藥敏試驗的檢測可知圈舍內(nèi)常在的細菌對大多數(shù)抗生素有耐藥性，造成這種耐藥性的原因是抗生素的不合理應用，在使用抗生素時應注重抗生素的選擇，避免大量應用易產(chǎn)生耐藥性的抗生素，避免圈舍內(nèi)耐藥菌株的增加，為養(yǎng)殖帶來潛在的風險。菌落對抗生素耐藥是一種自然的過程，在抗生素應用的過程中只要不大量應用耐藥性抗生素，并且有針對性的對某種菌應用某種藥物，從而減少耐藥菌株的存在，減少對養(yǎng)殖戶造成的風險。利用生物制劑替代日常養(yǎng)殖過程中投喂抗生素進行預防疫病的輔助功能。

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2015-11-30

趙達卓(1980-),女 ,碩士研究生,獸醫(yī)師。

許龍春(1964-),男 ,博士,研究員。

S816.73

A文章編號：2095-9737(2016)04-0007-02