李小玲，楊秀芳張掖市甘州區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，甘肅張掖734000；武威腫瘤醫(yī)院中醫(yī)科

?

丹參對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學(xué)機(jī)制研究

李小玲1，楊秀芳2
1張掖市甘州區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，甘肅張掖734000；2武威腫瘤醫(yī)院中醫(yī)科

查閱近幾年國內(nèi)關(guān)于丹參藥理作用的文獻(xiàn)，從藥理作用及分子生物學(xué)機(jī)制等方面進(jìn)行歸納、總結(jié)，旨在指導(dǎo)臨床應(yīng)用及研究。

再灌注損傷，肝臟；丹參；藥理作用

肝臟缺血再灌注損傷是肝移植和肝臟葉段切除術(shù)后不可避免的并發(fā)癥［1］，復(fù)流過程中多個(gè)器官損傷程序被激活，包括Kupffer細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，黏附分子表達(dá)的提高等易引起系列損害性的細(xì)胞反應(yīng)，繼而導(dǎo)致肝竇內(nèi)皮細(xì)胞壞死及肝細(xì)胞凋亡，由于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的損害而導(dǎo)致的微循環(huán)障礙，進(jìn)一步加重肝臟局部缺血［2］。中藥丹參具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰之功效［3］。其主要化學(xué)成分為脂溶性的二萜醌類化合物和水溶性的酚酸類化合物［4］。大量文獻(xiàn)報(bào)道，中藥丹參對(duì)肝臟缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，筆者現(xiàn)對(duì)其化學(xué)成分、藥理作用及分子生物學(xué)作用機(jī)制等方面進(jìn)行詳述。

1　清除氧自由基

丹參成分中的丹參酮類、丹參素、丹酚酸類化合物、原兒茶醛、咖啡酸及迷迭香酸均具有很強(qiáng)的抗氧化作用［5］。研究發(fā)現(xiàn)［6］，丹參酮ⅡA可抑制細(xì)胞膜上的NADH/NADPH氧化酶的激活，提高SOD的活性，清除氧自由基并抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。高國起等［7］研究結(jié)果表明，丹參可通過降低氧自由基水平，拮抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而減輕肝臟缺血再灌注損傷。Verzola等［8］等研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參注射液具有很強(qiáng)的抗氧化作用，能提高過氧化物歧化酶（SOD）活力，清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化和抗氧化損傷，從而對(duì)抗體內(nèi)氧自由基對(duì)組織細(xì)胞的損傷；同時(shí)它可以增加動(dòng)物對(duì)缺氧環(huán)境的耐受力。

2　抑制中性粒細(xì)胞的活化

大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，肝臟缺血后強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)是造成肝組織繼發(fā)性損傷的因素之一，在此炎癥反應(yīng)過程中，多因素相互作用，共同引起再灌注損傷［9］，許多細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子、IL-1、IL-8、氧自由基等多種趨化因子的共同參與，激活了多核中性粒細(xì)胞（PMN），此外在黏附分子作用下PMN及其他炎性細(xì)胞在肝組織缺血區(qū)聚集和浸潤，并通過脫顆粒作用釋放彈性蛋白酶、膠原酶、髓過氧化物酶（MPO）等多種蛋白酶，從而造成細(xì)胞功能障礙及結(jié)構(gòu)的破壞。當(dāng)中性粒細(xì)胞的耗氧量顯著增加，產(chǎn)生氧自由基，加重肝細(xì)胞損傷，即PMN的呼吸爆發(fā)或氧爆發(fā)。岳鵬飛等［10］研究發(fā)現(xiàn)，丹參對(duì)中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)效應(yīng)有抑制作用。郭偉強(qiáng)等［11］發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA能持續(xù)促進(jìn)IL-10含量的增加，IL-10被稱為細(xì)胞因子合成抑制因子，通過調(diào)節(jié)多種免疫活性細(xì)胞因子，間接地參與了Th1反應(yīng)，從而抑制了炎癥反應(yīng)，而且這種促進(jìn)作用是在炎性條件下的特異反應(yīng)。

3　抑制細(xì)胞凋亡

Yu等［12］研究發(fā)現(xiàn)，丹參提取物作用于缺血再灌注損傷肝細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平下降，半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表達(dá)下調(diào)，胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C，Bax/Bcl-2比值減小。崔小鵬等［13］研究表明，丹參可通過增強(qiáng)Bcl-2表達(dá)，抑制Bax表達(dá)，從而抑制肝臟缺血再灌注時(shí)肝細(xì)胞凋亡。李程等［14］研究丹參注射液預(yù)處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷中PI3K-AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響中發(fā)現(xiàn)丹參使該通路活化，激活p-Akt，進(jìn)而直接磷酸化前凋亡基因BAD和Bax，激活抗凋亡蛋白Bcl-2，防止線粒體釋放凋亡因子來促進(jìn)細(xì)胞存活和抑制細(xì)胞凋亡。

4　減輕線粒體的損傷

張文海等［15］對(duì)Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)組連續(xù)2天肌肉注射復(fù)方丹參注射液，對(duì)照組等量生理鹽水，第3天手術(shù)行肝左、中葉缺血再灌注，2組在肝缺血2小時(shí)后分別復(fù)流2、6和18小時(shí)測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、肝細(xì)胞線粒體和肝組織丙二醛（MDA）的含量，電鏡觀察肝細(xì)胞線粒體的形態(tài)改變，結(jié)果實(shí)驗(yàn)組復(fù)流6小時(shí)的ALT、肝細(xì)胞線粒體MDA以及復(fù)流2、6小時(shí)的肝組織MDA的含量均顯著降低［12］；對(duì)照組線粒體損傷程度隨著再灌注時(shí)間的延長而加重，表現(xiàn)為線粒體普遍腫脹，內(nèi)膜嵴斷裂，嚴(yán)重者線粒體內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊，內(nèi)膜嵴破壞明顯甚至消失，只殘留線粒體輪廓，說明復(fù)方丹參能夠減輕肝細(xì)胞線粒體的再灌注損傷。王靖等［16］研究表明丹參多酚酸預(yù)處理組線粒體Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性顯著高于缺血再灌注組。表明丹參多酚酸可以維持肝臟缺血時(shí)線粒體Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性。支文煜［17］研究表明，缺血再灌注后，線粒體大量自由基，攻擊線粒體，進(jìn)而破壞其結(jié)構(gòu)和功能，引起呼吸功能障礙，同時(shí)膜屏障的破壞，導(dǎo)致大量離子內(nèi)流，使線粒體腫脹，而丹參酮ⅡA可以阻斷這些途徑。

5　改善肝臟微循環(huán)

楊佳等［18］研究表明，丹酚酸B抑制正常大鼠血漿血小板黏聚性的作用機(jī)制可能與抑制TXA2合成有關(guān)，進(jìn)而起到改善微循環(huán)，保護(hù)血管內(nèi)皮作用。實(shí)驗(yàn)表明［19］，丹參中的有效成分丹參酮ⅡA磺酸鈉、丹參素能抑制體外血栓形成，通過抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，使血小板黏性降低。丹參素對(duì)細(xì)胞因子活化內(nèi)皮細(xì)胞的抑制及保護(hù)血管內(nèi)皮，減少白細(xì)胞黏附作用，可能是其發(fā)揮抗血栓形成作用的機(jī)制之一［20］。研究表明［21］，丹參可通過抑制白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，降低血小板的黏性，從而改善微循環(huán)。

6　抑制C a2+內(nèi)流

在肝臟缺血再灌注時(shí)肝細(xì)胞膜上鈉-鈣交換異常，導(dǎo)致Ca2+的被動(dòng)性彌散增加，細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度增加，形成鈣超載，導(dǎo)致肝細(xì)胞的不可逆性損傷。秦嵩［22］研究表明，丹參能明顯減少肝臟缺血再灌注時(shí)肝細(xì)胞Ca2+濃度，抑制Ca2+內(nèi)流，維持細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)定，保護(hù)細(xì)胞膜。盧綺萍等［23］研究發(fā)現(xiàn)，丹參注射液通過直接或間接的2個(gè)途徑鈣阻滯作用發(fā)揮肝缺血再灌注保護(hù)作用，一是抑制血小板聚集，改善微循環(huán)灌注，減少ATP消耗，改善肝細(xì)胞膜泵功能，增加鈣外排內(nèi)攝；二是直接作用于肝細(xì)胞膜ROC受體蛋自，增強(qiáng)鈣泵主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，加速鈣外排內(nèi)攝，使再灌注期肝細(xì)胞內(nèi)Ca2+維持在生理許可范圍內(nèi)，由此阻斷肝細(xì)胞內(nèi)鈣超載這一再灌注損傷的始動(dòng)環(huán)節(jié)，減少黃嘌呤脫氫酶向黃嘌呤氧化酶的轉(zhuǎn)化，鈣依賴蛋白水解酶的水解及脂質(zhì)過氧化自由基的生成，減輕肝細(xì)胞膜、細(xì)胞器膜損傷，保持其結(jié)構(gòu)功能完整性。

7　免疫調(diào)節(jié)

齊艷艷等［24］研究表明，丹參酮ⅡA可抑制肝臟缺血再灌注后TNF-α、IL-6等前炎癥因子的表達(dá)，從而減輕肝臟損傷。研究表明，丹參注射液通過減少動(dòng)物體內(nèi)IC和抗體數(shù)量，進(jìn)而減輕免疫損傷，起到防止免疫性肝纖維化的作用［25］。丹參酮Ⅱa對(duì)人白細(xì)胞的游走趨化有明顯的抑制作用，其抑制作用在一定劑量范圍內(nèi)呈明顯的劑量依賴性，并且有較強(qiáng)的直線相關(guān)性［26］。蘇志良等［27］研究表明，丹參能增加離體保存再灌注肝臟的IL-10 mRNA表達(dá)，對(duì)肝臟再灌注損傷可能具有一定防治作用。

8　抑制應(yīng)激狀態(tài)下蛋白表達(dá)

高傳長等［28］研究表明，丹參能上調(diào)同種異體大鼠移植肝臟中血紅素氧合酶1 mRNA及其蛋白表達(dá)，減輕肝缺血-再灌注損傷，保護(hù)移植大鼠肝臟。于超等［29］研究表明，丹參可能通過調(diào)控HIF-la，降低凋亡因子的表達(dá)，減輕肝臟損傷。徐志廣等［30］研究表明，大鼠肝臟缺血再灌注時(shí)應(yīng)用丹參預(yù)處理，可能通過使活化轉(zhuǎn)錄因子-6α（ATF-6α）適度表達(dá)及下調(diào)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）蛋白的過度表達(dá)，調(diào)節(jié)肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激穩(wěn)態(tài)，減少細(xì)胞凋亡，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。廖喜望等［31］研究表明，STAT1在大鼠肝缺血再灌注損傷中被激活，丹參可能通過抑制STAT1的表達(dá)減輕缺血再灌注對(duì)肝的損傷。

9　討論

丹參通過其活性成分從以上諸多方面發(fā)揮著對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，可影響其病理生理過程中的自由基損傷、炎癥反應(yīng)、線粒體結(jié)構(gòu)、微循環(huán)及肝細(xì)胞的凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)，作用呈現(xiàn)出多環(huán)節(jié)、多途徑、多靶點(diǎn)、多效性，但目前的研究主要集中在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)層面，僅涉及少部分臨床實(shí)驗(yàn)。由于肝臟缺血再灌注病理過程的復(fù)雜性及丹參活性成分的多樣性，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)僅能表明丹參的某個(gè)活性成分在肝臟缺血再灌注的某個(gè)病理環(huán)節(jié)上發(fā)揮著諸多作用。因此中藥丹參對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學(xué)機(jī)制研究應(yīng)從丹參活性成分間的相互作用、總體活性成分效應(yīng)著手，來闡明丹參對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學(xué)機(jī)制。

［1］王陽陽，于惠玲，李田陽，等.H O-1介導(dǎo)芒果苷對(duì)大鼠肝臟缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2015，31（5）：736-737.

［2］Rougem ont O，D ut kow ski P，Cl avi en PA.Bi ol ogi cal m odul at i on of l i ver i schem i a-reperfusi oni nj ury［J］.Curr O pi n O rgan Transpl ant，2010，15：183-189.

［3］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2015版：一部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：76-77.

［4］李巧玉，劉楊，包華音.近5年丹參化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.食品與藥品，2014，16（2）：145-146.

［5］馬丙祥，董寵凱.丹參的藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2014，25（7）：663-665.

［6］Fu，H uang，Li u，et al.Tanshi none IIA prot ect s cardi ac m yocyt es agai nst oxi dat i ve st ress-t ri ggered dam age and apopt osi s［J］.European j ournal of pharm acol ogy，2007，568（1-3）：213-221.

［7］高國起，蘆鑫.丹參對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的抗氧化作用［J］.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2007，24（3）：48-49.

［8］V erzol a，Bert ol ot t o，V i l l aggi o，etal.O xi dat i ve stress m edi at es apopt ot i c changes i nduced by hypergl ycem i a i n hum an t ubul ar ki dney cel l s［J］.Journal of t he A m eri can Soci et y of N ephrol ogy：2004，15（1）：S85-87.

［9］杜秋國.丹參預(yù)處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注時(shí)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78/94表達(dá)的影響［D］.廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2013.

［10］岳鵬飛，唐劍彬，鄭琴，等.基于抑制中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)效應(yīng)的復(fù)方丹參緩釋片體外釋放行為評(píng)價(jià)研究［J］.中草藥，2010，41（6）：885-888.

［11］郭偉強(qiáng)，陳曦，曹婷婷，等.丹參酮Ⅱ-A對(duì)抗炎癥因子IL-10的調(diào)節(jié)作用時(shí)效關(guān)系［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2009，25（5）：697-698.

［12］Y u，Y ao，Zhou，et al.N europrot ect i on agai nstA bet a25-35-i nducedapopt osi sbysal vi am i l t i orrhi zaext racti n SH-SY 5Y cel l s［J］.N eurochem i st ry i nt ernat i onal，2014，75（7）：89-95.

［13］崔小鵬，李厚祥，沈洪薰，等.丹參對(duì)大鼠肝細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的影響［J］.南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，23（4）：410-413.

［14］李程，畢旭東，趙國偉.丹參對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷PI3KA K T信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響［J］.中國老年學(xué)雜志，2012，32（5）：992-994.

［15］張文海，周勇，王金生.復(fù)方丹參對(duì)肝細(xì)胞線粒體再灌注損傷的影響［J］.肝膽外科雜志，2002，10（6）：476-477.

［16］王靖，甄江濤，田志輝，等.丹參多酚酸對(duì)大鼠缺血心肌線粒體酶的影響［J］.天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，18（3）：295-298.

［17］支文煜.腦缺血再灌注損傷引起的線粒體功能障礙及丹參酮ⅡA的保護(hù)作用研究［J］.實(shí)用心腦肺血管病雜志，2010，18（10）：1389-1391.

［18］楊佳，張毅，秦彩玲，等.丹參、三七的有效部位對(duì)正常大鼠血小板黏聚性及TX A-2、PG I-2的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（5）：21-24.

［19］鄧惠英.丹參及其有效成分的藥理研究概況［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，23（12）：1812-1813.

［20］陳少軍，陳宏降，郭章華，等.丹參中抗血栓活性成分的虛擬篩選［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（6）：103-106.

［21］G uo，Sun，W ang.Prot ect i ve effect s of di hydroxyl phenyl l act i c aci d and sal vi anol i c aci d B on LPS-i nduced m esent eri cm i croci rcul at orydi st urbancei nrat s［J］.Shock，2008，29（2）：205-211.

［22］秦嵩.丹參對(duì)肝臟缺血-再灌注損傷的防護(hù)作用［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2001，29（6）：37-38.

［23］盧綺萍，史陳讓，吳在德，等.丹參防治肝缺血再灌注期肝細(xì)胞內(nèi)鈣超載的實(shí)驗(yàn)與臨床研究［J］.中華外科雜志，1996，34（2）：98-101.

［24］齊艷艷，史永照，梅怡，等.丹參酮ⅡA減輕肝臟缺血再灌注損傷的作用及分子機(jī)制研究［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，38（2）：60-64.

［25］馬雪梅，王寶恩，尤紅.丹參對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2000，7（7）：25-26.

［26］李國章.丹參中丹參酮Ⅱa提取純化技術(shù)［D］.長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006：250.

［27］蘇志良，趙浩亮，曹燕，等.丹參對(duì)大鼠離體保存再灌注肝臟IL-10 m RN A的影響［J］.中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2013，16（10）：766-768.

［28］高傳長，李冬盛，王愷，等.丹參對(duì)大鼠移植肝血紅素氧合酶1表達(dá)的影響［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15（31）：5722-5725.

［29］于超，盧綺萍，李德忠.大鼠肝臟缺血再灌注不同時(shí)限H IF-1α表達(dá)的變化及其意義的探討［J］.腹部外科，2008，21（2）：119-122.

［30］徐志廣，盧綺萍.丹參對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注時(shí)活化轉(zhuǎn)錄因子-6α表達(dá)的影響［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2013，30（6）：1235-1238.

［31］廖喜望，盧綺萍，李德忠，等.大鼠肝臟缺血再灌注過程中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子的表達(dá)變化及其意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2009，26（10）：1327-1331.

Molecular Biological Mechanism of DanShen on Ischemia Reperfusion Injury of Liver

LI Xiaoling1，YANG Xiufang2
1 Pharmaceutical Preparation Department of Ganzhou District People's Hospital，Zhangye 734000，China；2 TCM Department of Wuwei Cancer Hospital

By consulting the literature about pharmacological action of DanShen（Radix Salviae Miltiorrhizae）at home in recent years，the actions of Danshen were concluded and summarized from pharmacological action，molecular biological mechanism and others，in order to guide clinical application and the research.

reperfusion injury，liver；DanShen；pharmacological action

R575

A

1004-6852（2016）06-0163-03

2016-01-22

李小玲（1974—），女，主管藥師。研究方向：中藥制劑。