梅毒血清固定患者細胞免疫功能及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶表達水平分析

袁軍 楊祖慶 田麗閃 羅珍胄

梅毒血清固定患者細胞免疫功能及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶表達水平分析

袁軍 楊祖慶 田麗閃 羅珍胄

目的檢測梅毒血清固定患者細胞免疫功能, 分析其外周血單個核細胞中的DNA甲基化和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)水平。方法67例梅毒患者, 其中一期梅毒26例(一期梅毒組), 二期梅毒22例(二期梅毒組), 梅毒血清固定19例(梅毒血清固定組), 選取同期健康人25例作為對照組。比較各組Th1/Th2細胞因子、DNA甲基化及DNMT表達水平。結(jié)果四組干擾素-γ(TFN-γ) 、白細胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-4(IL-4)及白細胞介素-10(IL-10)水平比較差異具有統(tǒng)計學意義 (F=7.435、8.577、5.688、5.578、7.658, P＜0.05)。四組DNA甲基化及DNMT表達水平比較差異具有統(tǒng)計學意義 (F=16.456、9.467, P＜0.05)。結(jié)論Th1 /Th2 細胞免疫平衡失調(diào)在梅毒血清固定患者中發(fā)揮了重要的作用, 其機制可能與DNA甲基化具有密切關(guān)系。

梅毒血清固定；Th1/Th2；DNA甲基化

梅毒是一種由蒼白螺旋體感染所導致的, 可以侵犯全身多個系統(tǒng)、器官的慢性性傳播疾病, 流行病學研究顯示, 近年來, 我國梅毒的發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年上升的趨勢, 嚴重影響了人類健康。一般認為梅毒患者在通過多個療程的正規(guī)驅(qū)梅治療后, 由于藥物和機體之間的相互作用, 可能會使患者外周血在2年內(nèi)基本陰轉(zhuǎn), 而部分梅毒患者即使進行了多個療程正規(guī)驅(qū)梅治療, 但梅毒快速血漿反應素試驗(RPR)仍然持續(xù)陽性, 很長時間不能轉(zhuǎn)陰, 形成血清固定［1］。有研究表明,血清固定的原因與T細胞亞群分化失調(diào)導致的細胞免疫功能異常密切相關(guān), 而T細胞亞群在分化過程中, 有多種細胞因子伴有DNMT位點的變化及基因表達水平的變化［2］。因此,本研究對梅毒血清固定患者細胞免疫功能進行了檢測, 并對DNMT表達水平進行探究, 具體結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月～2016年4月本院梅毒患者67例, 其中一期梅毒26例(一期梅毒組), 男15例, 女11例, 年齡27～57歲, 平均年齡(42.14±8.37)歲；二期梅毒22例(二期梅毒組), 男13例, 女9例, 年齡27～56歲, 平均年齡(43.31±9.62)歲；梅毒血清固定19例(梅毒血清固定組),男11例, 女8例, 年齡27～58歲, 平均年齡(43.17±8.81)歲；選取同期本院體檢健康人25例作為對照組, 男13例, 女12例, 年齡22～59歲, 平均年齡(42.91±7.62)歲。四組年齡、性別等一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 細胞因子檢測 所有研究對象均在清晨空腹狀態(tài)下抽取靜脈血5 ml, 離心處理后采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗測定TFN-γ 、 IL-2、 TNF-α、 IL-4及 IL-10水平。

1.2.2 DNA甲基化以及DNMT表達水平 抽取靜脈血20 ml,進行單個細胞分離處理, 提取RNA和DNA, 甲基化定量試劑盒檢測外周血單個核細胞中基因組DNA甲基化水平, 利用實時定量聚合酶鏈式反應(PCR)法測定DNMT表達水平。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗,多組間比較采用方差分析；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Th1/Th2細胞因子比較 四組TFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4及IL-10水平比較差異具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。在Th1因子中, TFN-γ、IL-2及TNF-α在對照組中最高, 在梅毒血清固定組中最低；在Th2因子中, IL-4及IL-10在對照組中最低, 在梅毒血清固定組中最高。見表1。

2.2 DNA甲基化及DNMT表達水平比較 四組DNA甲基化及DNMT表達水平比較差異具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。對照組DNA甲基化及DNMT表達水平最高, 梅毒血清固定組最低。見表2。

表1 四組Th1/Th2細胞因子比較(±s)

表1 四組Th1/Th2細胞因子比較(±s)

注：四組比較, P＜0.05

組別 例數(shù) Th1因子 Th2因子TFN-γ(pg/ml) IL-2(ng/L) TNF-α(pg/ml) IL-4(ng/L) IL-10(pg/ml)一期梅毒組 26 3.56±0.34 482.12±32.27 4.09±1.21 309.24±41.31 14.66±1.33二期梅毒組 22 3.01±0.19 452.12±29.29 3.67±0.88 334.12±42.98 15.82±1.09梅毒血清固定組 19 2.12±0.27 308.14±18.23 2.27±0.76 427.17±36.26 16.25±1.21對照組 25 4.33±0.26 514.22±34.87 5.67±1.17 265.45±18.93 9.54±0.34 F 7.435 8.577 5.688 5.578 7.658 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 四組DNA甲基化及DNMT表達水平比較(±s)

表2 四組DNA甲基化及DNMT表達水平比較(±s)

注：四組比較, P＜0.05

組別 例數(shù) DNA甲基化(%) DNMT水平一期梅毒組 26 21.2±5.12 12.78±2.25二期梅毒組 22 14.31±3.34 9.89±1.61梅毒血清固定組 19 8.22±1.84 8.23±1.66對照組 25 27.55±3.62 15.76±2.17 F 16.456 9.467 P 0.000 0.000

3 討論

大量的研究已經(jīng)證實, 人體在抵抗梅毒治病以及保護機體免遭梅毒感染過程中, 細胞免疫在機體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用, 并被認為是是清除體梅毒的主要方式［3］。目前, 臨床中驅(qū)梅治療的效果在很大程度上是與T細胞分泌的細胞因子有關(guān)系。胸腺內(nèi)分化成熟的 T 細胞, 根據(jù)體內(nèi)細胞表面抗原 CD 分子表達的不同分為 CD4+和 CD8+T 細胞,根據(jù)以往的研究, 梅毒固定患者外周血中CD4 +/ CD8 +的失衡導致免疫應答, Th細胞分化在梅毒清除過程中發(fā)揮著重要的作用［4］。

本研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn), TFN-γ、IL-2、TNF-α在對照組中最高, 在梅毒血清固定組中最低, TFN-γ、IL-2、TNF-α是由Th1 細胞分泌, 并在機體中發(fā)揮各自的作用, Th1細胞因子的降低表明體內(nèi)中的NK細胞、 中性粒細胞的吞噬殺傷能力低下, 不能有效清除梅毒螺旋體；IL-4及IL-10因子對照組中最低, 在梅毒血清固定組中最高, IL-4及IL-10因子是由Th2分泌的, 其可以在介導體液免疫反應, 又可以在一定程度上抑制Th1的增殖, Th2因子的升高可以從側(cè)面反映病情的加重。大量研究發(fā)現(xiàn), 梅毒患者早期的免疫應答主要以Th1細胞因子為主, 但隨著病程加重, Th2 型免疫應答會被逐漸的激活, 進一步抑制 Th1 型免疫反應。當Th1 /Th2平衡向 Th2 型轉(zhuǎn)向時, 表明機體細胞免疫防御能力降低, 轉(zhuǎn)陰能力變?nèi)酰?］。梅毒血清固定的細胞免疫功能異?？赡芘cDNA低甲基化具有密切的關(guān)系。

綜上所述, Th1 /Th2 細胞免疫平衡失調(diào)在梅毒血清固定患者中發(fā)揮了重要的作用, 其機制可能與DNA甲基化具有密切關(guān)系。

［1］包圖雅, 于娜沙, 曾抗, 等.梅毒血清固定患者細胞免疫功能研究.實用預防醫(yī)學, 2006, 13(2):254-255.

［2］謝海莉, 趙進, 李偉, 等.梅毒血清固定患者細胞免疫功能檢測分析.中國皮膚性病學雜志, 2013, 27(1):49-51.

［3］關(guān)楊, 楊帆, 莫衍石, 等.54例梅毒血清固定患者臨床分析及細胞免疫功能檢測.中國熱帶醫(yī)學, 2013, 13(10):1266-1268.

［4］何大保, 袁軍, 李真, 等.梅毒患者外周血T淋巴細胞表觀遺傳學DNA甲基化及組蛋白修飾的研究.海南醫(yī)學院學報, 2012, 18(11):1533-1536.

［5］任悅, 付蓉, 王化泉, 等.免疫相關(guān)性血細胞減少癥患者外周血CD4+T細胞DNA甲基化異常的分析.中華醫(yī)學雜志, 2014, 94(28):2165-2168.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.15.009

2016-05-18］

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