子宮內(nèi)膜異位癥中OPN、VEGF的表達(dá)及意義

陳曼詩(shī) 王冰 陳燦 陳衡 陳春瑩

子宮內(nèi)膜異位癥中OPN、VEGF的表達(dá)及意義

陳曼詩(shī) 王冰 陳燦 陳衡 陳春瑩

目的研究子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中骨橋蛋白(OPN)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá),及在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用。方法采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法檢測(cè)30例子宮內(nèi)膜異位癥患者(研究組)、30例因子宮平滑肌瘤、卵巢良性腫瘤手術(shù)患者(對(duì)照組)血清中OPN、VEGF的表達(dá)情況,觀察其表達(dá)的意義及兩者之間的關(guān)系。結(jié)果研究組血清OPN、VEGF表達(dá)高于對(duì)照組(P＜0.05)。子宮內(nèi)膜異位癥患者血清OPN與VEGF呈正相關(guān)(r=0.411,P＜0.05)。結(jié)論OPN、VEGF的改變與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展緊密相連,OPN可上調(diào)VEGF使其表達(dá)增強(qiáng),而VEGF也可通過某種機(jī)制促進(jìn)OPN酶切,兩者共同誘發(fā)新生血管的形成,這表明OPN與VEGF在血管生成方面或許存在相關(guān)的協(xié)同作用。

子宮內(nèi)膜異位癥；骨橋蛋白；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

骨橋蛋白(osteopontin,OPN)在粘附、侵襲和惡性腫瘤轉(zhuǎn)移等方面中起著非常重要的作用［1］。OPN在腫瘤方面研究較多,其與結(jié)直腸癌、乳腺癌［2］等腫瘤中均存在異常,但與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性的研究卻較少,故OPN成為近來子宮內(nèi)膜異位癥探索的熱點(diǎn)之一。血管的生成不但在正常子宮內(nèi)膜的生長(zhǎng)修復(fù)中起重要的作用,而且在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展過程中也起著至關(guān)重要的角色［3］。血管的生成與促進(jìn)血管生成的因子有著緊密的聯(lián)系,是在多種細(xì)胞因子的協(xié)調(diào)控制下完成的,這些細(xì)胞因子中又以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)為主。已有大量實(shí)驗(yàn)報(bào)道,OPN與VEGF的關(guān)聯(lián)性在胃癌、肺腺癌等探索較密［2］,可用于輔助治療,并且兩者在惡性腫瘤中也呈現(xiàn)著高表達(dá),而子宮內(nèi)膜異位癥在臨床上具有類似惡性腫瘤的種植、擴(kuò)散及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等能力。故本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用ELASE方法測(cè)定子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中OPN、VEGF含量,來探索這兩種因子在子宮內(nèi)膜異位癥中演進(jìn)發(fā)展的過程,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年7月～2014年1月在福田區(qū)人民醫(yī)院予手術(shù)治療并術(shù)后病理確診：子宮內(nèi)膜異位癥患者30例為研究組,平均年齡(29.8±7.1)歲；選取同期子宮平滑肌瘤、卵巢良性腫瘤(卵巢成熟畸胎瘤、漿液性囊腺瘤)手術(shù)患者30例為對(duì)照組,平均年齡(31.7±7.6)歲。兩組患者一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。兩組患者術(shù)后均由病理證實(shí),各組患者肝腎功能均正常,同時(shí)排除自身免疫性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等)患者、近期服用激素類藥物及惡性腫瘤者。

1.2 標(biāo)本采集與制備及檢測(cè) 術(shù)前清晨空腹抽取肘靜脈血5ml,室溫靜置,離心機(jī)3000r/min,離心10min,取血清,-70℃凍存?zhèn)溆?。同時(shí)取腹腔鏡/開腹直視下抽取直腸子宮陷凹腹腔液3ml,處理同肘靜脈血,所有標(biāo)本污染者棄之。采用 OPN酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,VEGF酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(上海研輝生物科技有限公司)分別測(cè)定 OPN和VEGF含量,嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),測(cè)定 450nm吸光度(A)值。根據(jù) ELISA實(shí)驗(yàn)所得的標(biāo)準(zhǔn)品的OD值,相應(yīng)濃度,應(yīng)用Excel軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)血清樣本的 OD值分別求出OPN、VEGF濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清OPN、VEGF水平比較 研究組血清OPN、VEGF表達(dá)高于對(duì)照組(t=21.013、12.771,P＜0.05)。見表1。

表1 兩組血清OPN、VEGF水平比較(±s)

表1 兩組血清OPN、VEGF水平比較(±s)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

組別例數(shù)OPN(ng/ml) VEGF(pg/ml)研究組 3058.73±7.78a84.86±19.81a對(duì)照組 3018.27±7.1236.44±6.23P <0.05<0.05

2.2 子宮內(nèi)膜異位癥患者血清OPN與VEGF關(guān)系 子宮內(nèi)膜異位癥患者血清OPN與VEGF呈正相關(guān)(r=0.411,P＜0.05)。

3 討論

Cho等［4］用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和ELISA方法檢測(cè)79例病理為子宮內(nèi)膜異位癥者為研究組和43例正常子宮內(nèi)膜者為對(duì)照組,在子宮內(nèi)膜異位癥患者中OPN mRNA的水平高比正常內(nèi)膜者(P=0.010＜0.05)；且OPN的平均血漿表達(dá)在子宮內(nèi)膜異位癥者和正常內(nèi)膜者中分別為(407.31±37.80)ng /mL和(165.84±19.29)ng/mL。D'Amico等［5］通過測(cè)定OPN與CD133兩者的mRNA和蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥患者中的血清OPN mRNA蛋白的高表達(dá),OPN可通過促進(jìn)細(xì)胞間的黏附和細(xì)胞游走,從而提高異位子宮內(nèi)膜的侵襲、增殖及生存能力,這與本研究結(jié)果相一致。本研究結(jié)果表明,研究組子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中VEGF的表達(dá)高于對(duì)照組,OPN與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病有一定的相關(guān),其可通過某種機(jī)制促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化、粘附和遷移,參與其免疫反應(yīng),誘發(fā)新生血管的生成,產(chǎn)生抗凋亡信號(hào),使異位的子宮內(nèi)膜細(xì)胞更易于存活,有利于其持續(xù)侵襲。故OPN為子宮內(nèi)膜異位癥的診斷提供了一個(gè)可靠的檢測(cè)指標(biāo),其可作為子宮內(nèi)膜異位癥的一個(gè)有用的診斷標(biāo)記。研究顯示VEGF在腫瘤靶向藥物的開發(fā)及腫瘤輔助診斷等方面有重要意義［6］,如VEGF的多態(tài)性的具體機(jī)制在神經(jīng)膠質(zhì)瘤及胃腸道腫瘤,乳腺癌中的重要作用［7,8］,而VEGF是血管生成的一個(gè)重要因子,VEGF將激發(fā)和維持子宮內(nèi)膜異位中的新生血管,促進(jìn)其生成和增殖。VEGF水平在可能起到兩方面的作用：①可能是一個(gè)有利于有活性的內(nèi)膜組織植入其他部位的重要的病原學(xué)病因,高濃度的VEGF可導(dǎo)致腹膜的血管化；②VEGF可進(jìn)行血管重塑,其是一種肝素結(jié)合蛋白的家族成員,VEGF通過增加血管的通透性,影響內(nèi)皮細(xì)胞的生理功能,使凋亡細(xì)胞的數(shù)目明顯下降,使大量的纖維素和纖維蛋白等溢出,形成膠樣物質(zhì)沉積于細(xì)胞間質(zhì)內(nèi),為血管生成提供基質(zhì),誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,更易于異位內(nèi)膜的存活。

本研究結(jié)果表明,子宮內(nèi)膜異位癥患者血清OPN與VEGF呈正相關(guān)(r=0.411,P＜0.05)。OPN和VEGF能共同促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的活性,誘發(fā)血管生成。這表明OPN與VEGF之間或許存在某種必然的協(xié)同作用,其共同刺激內(nèi)皮細(xì)胞的遷移,誘發(fā)血管的活性,使異位內(nèi)膜更易于侵襲、種植與發(fā)展。有研究認(rèn)為OPN可通過活化的轉(zhuǎn)錄因子上調(diào)VEGF使其表達(dá)增強(qiáng),誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞粘附和遷移,誘發(fā)新生血管的生成,共同促進(jìn)侵襲、轉(zhuǎn)移的發(fā)生［9］；同時(shí),VEGF也可刺激新生血管的形成,增加血管的通透性,易于激活外源性凝血途徑,產(chǎn)生凝血酶,促進(jìn)OPN酶切,同時(shí)刺激內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂,誘發(fā)新生血管的生成,協(xié)同促進(jìn)異位內(nèi)膜的侵襲與生長(zhǎng)。

內(nèi)異癥的病理機(jī)制需要三個(gè)步驟：粘附、侵襲和血管形成。血管形成是其重要的一個(gè)種植和生長(zhǎng)的環(huán)節(jié)。腹腔鏡雖可作為子宮內(nèi)膜異位癥診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但因其價(jià)格和有創(chuàng)性,臨床應(yīng)用存在局限性［10］,而血清OPN、VEGF可作為非侵入性診斷標(biāo)志,且兩者在血管生成等方面具有許多類似的生物學(xué)效應(yīng),在子宮內(nèi)膜異位癥中起到一定的作用,但具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.18.016

2016-08-10］

廣東省深圳市福田區(qū)公益性科研項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：FTWS201361)

518000深圳福田區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科