侯曉琳　尚坤

【摘 要】 目的：延冰片是由延胡索、冰片以及輔料制成的片劑，臨床用于冠心病、心絞痛的治療。研究通過(guò)對(duì)流動(dòng)相、峰形、分離度以及出峰時(shí)間等做比較，旨在制定延冰片中延胡索乙素的含量限度。方法：以延胡索乙素為延冰片的指標(biāo)成分，利用高效液相色譜法測(cè)定其含量，以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH值6.0）（55∶45）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。結(jié)果：延胡索乙素可以作為延冰片的定性鑒別；為本制劑制定了含量限定，而每克含胡索乙素不低于5.20mg。結(jié)論：采用高效液相色譜法測(cè)定延胡索乙素的含量，該方法精確、快速，可行性良好，適用于延冰片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 延冰片；延胡索乙素；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）22-0011-03

延胡索為罌粟科紫堇屬多年生草本植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖，民間又稱為玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山東、江蘇、浙江、內(nèi)蒙古等地[1]，與山芥、將離、浙貝等并稱“浙八味”。延胡索是活血止痛、利氣之良藥，是活血化瘀，理氣止痛，鎮(zhèn)靜和催眠之佳品，尤以止痛、鎮(zhèn)痛之功效著稱于世[2-3]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，中藥制劑延胡索醇提物可以降低心肌耗氧量，同時(shí)可以有效地緩解心絞痛和刺激引起的疼痛、失眠、焦慮等[4]。依據(jù)延冰片處方中藥材有效成分的化學(xué)性質(zhì)研究[5]，采用高效液相色譜法測(cè)定三批延冰片試樣中延胡索乙素的含量，同時(shí)制定延冰片片劑中延胡索乙素的含量限度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀；EL-204十萬(wàn)分之一分析天平。

1.2 試劑 延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)：0726-200208，中國(guó)藥品生物制品研究院）；延胡索藥材均由長(zhǎng)春宏檢藥材公司提供；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吸收波長(zhǎng)（λmax）的選擇 精密移取延胡索乙素對(duì)照品溶液和供試品溶液，以無(wú)水乙醇溶液為空白，在190～350nm處進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果見圖1、2。

2.2 色譜條件的確定 參考相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn)，使用Agilent1260 高效液相色譜儀，以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH值至6.0）（55∶45）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。[1]

2.3 溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含46μg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約0.5g（過(guò)三號(hào)篩），置錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，冷浸1h后加熱回流1h，冷卻至室溫，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，過(guò)濾膜即得。

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果見圖3、4。

2.4 不同提取方法對(duì)延胡索乙素含量的影響 按照2010版《中國(guó)藥典》一部中決明子含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備中，延胡索采用回流提取的方法，同時(shí)選擇超聲提取與其對(duì)比，提取時(shí)間為30min，后續(xù)分離純化方法相同。將延胡索乙素對(duì)照品與兩個(gè)不同方法處理的供試品溶液注入液相色譜儀10μl，結(jié)果見表1。

由表1可知，回流提取與超聲提取延胡索乙素含量無(wú)較明顯差異，為使提取方法簡(jiǎn)單省時(shí)，實(shí)驗(yàn)采用超聲提取30min的方法對(duì)供試品粉末進(jìn)行提取。

2.5 中試藥材的延胡索乙素含量測(cè)定

2.5.1 藥材的制備 取本品粉末約1g，過(guò)三號(hào)篩，電子天平精密稱定，置燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，超聲處理30min后，冷卻至室溫，定容，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液15ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)濾膜即得[1]。

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果見圖5、表2。

由表2可知，三批藥材延胡索乙素的平均含量為0.65mg/g。按2010版《中國(guó)藥典》延胡索含量的規(guī)定，本品按干燥品計(jì)算，含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于0.050%，所以三批藥材均為合格藥材。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性范圍的考察 分別精密吸取濃度為0.044mg/ml的延對(duì)照品溶液4、8、12、16、22、24μl，設(shè)定序列，注入液相色譜儀，橫坐標(biāo)以對(duì)照品進(jìn)樣量為參數(shù)，縱坐標(biāo)以峰面積為參數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：y=41.346x+2，1924，R2=1。表明進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。見表3、圖6。

2.6.2 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.044mg/ml的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為10μl，測(cè)定其峰面積。計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，由表4數(shù)據(jù)可知，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 取6份與重現(xiàn)性試驗(yàn)同批次的片劑，即已知含量為5.01mg/g，精密稱定，分別精密加入濃度為0.044mg/ml的延胡索乙素對(duì)照品0.25g，按含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果片劑的回收率均在95%～105%之間，平均回收率是99.04%，均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表7。

2.7 延冰片中延胡索乙素的含量測(cè)定 按延冰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法，制備三批供試品溶液。進(jìn)樣量為10μl，注入色譜儀，結(jié)果三批延冰片片劑樣品中延胡索乙素的平均含量為5.435mg/g。見表8。

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相的篩選做了大量嘗試，試用了不同溶劑及不用比例、不同pH的溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果以本文中所述的流動(dòng)相為最佳，峰形、分離度、出峰時(shí)間等較好。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)含量測(cè)定成分的分析：考慮延胡索中延胡索乙素的含量、轉(zhuǎn)移率、加速與長(zhǎng)期穩(wěn)定性均符合要求。參照2010版《中國(guó)藥典》一部延胡索含量測(cè)定項(xiàng)，確定延冰片的檢測(cè)成分為延胡索乙素。根據(jù)三批延冰片片劑樣品中延胡索乙素的平均含量為5.435mg/g，在平均含量的基礎(chǔ)上，總含量下浮20%制定本制劑含量限度，即本品每克中含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于5.20mg，為本品制定了含量限度。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 劉芳，羅躍娥.延胡索研究概況[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24（4）：240-242.

[3] 黃云，陳華師.中藥延胡索的研究進(jìn)展[C]//中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥炮制分會(huì).2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集，2011.

[4] Corey E J， Cheng X M. The logic of chemical synthesis[M].New York： John Wiley&Sons， 1989.

[5] 張萍.延胡索提取物治療冠心病室性心律失常的機(jī)理研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

（收稿日期：2015.08.05）

2.6.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取濃度為0.044mg/ml的對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10μl。結(jié)果表明，延胡索乙素對(duì)照品溶液和供試品溶液穩(wěn)定性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.46%和2.64%，說(shuō)明二者在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2.6.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20131101的片劑樣品，精密稱量，平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為10μl，結(jié)果延冰片片劑中延胡索乙素的平均含量5.01mg/g，其相應(yīng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.89%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表6。