姜蕾

(濮陽(yáng)市油田總醫(yī)院　河南 濮陽(yáng)　457001)

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手足口病不同標(biāo)本類型病原檢出率對(duì)比分析

姜蕾

(濮陽(yáng)市油田總醫(yī)院河南 濮陽(yáng)457001)

【摘要】目的對(duì)比分析手足口病患兒咽拭子和肛周拭子標(biāo)本的病原檢出率。方法采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)310例手足口病患兒的咽拭子和肛周拭子標(biāo)本進(jìn)行腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A組16型(CoxA16)、腸道通用型病毒檢測(cè)。結(jié)果310例患兒的咽拭子、肛周拭子標(biāo)本中，腸道通用型病毒陽(yáng)性率分別為73.87%、89.68%，EV71陽(yáng)性率分別為14.52%、20.00%，CoxA16陽(yáng)性率分別為6.45%、9.35%。兩種類型標(biāo)本中腸道病毒通用型、腸道病毒EV71型、柯薩奇病毒CoxA16型陽(yáng)性檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論手足口病患兒肛周拭子病原標(biāo)本檢出率高，提倡及時(shí)優(yōu)先采集肛周拭子標(biāo)本。

【關(guān)鍵詞】手足口病；腸道病毒；檢出率

手足口病是一種兒童常見(jiàn)傳染病，可由多種腸道病毒引起，其中EV71易引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病，導(dǎo)致病情加重甚至死亡。目前，監(jiān)測(cè)手足口病原體的方法主要為實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)手足口病患者的咽拭子、肛周拭子標(biāo)本分別進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)監(jiān)測(cè)EV71，CoxA16和腸道病毒通用型，篩選最有效的標(biāo)本類型，為手足口病臨床診斷提供有效的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1材料和方法

1.1標(biāo)本來(lái)源選取2015年1月1日至2015年7月1日濮陽(yáng)市油田總醫(yī)院收治的310例手足口病患兒，其中男230例，女80例，年齡0～5歲。采集咽拭子310份、肛周拭子310份，所有標(biāo)本采集時(shí)間均控制在發(fā)病3 d內(nèi)，并在抗病毒治療前。手足口診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《手足口病防控指南(2010年版)》。

1.2檢測(cè)方法

1.2.1儀器和試劑美國(guó)ABI 7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。腸道病毒71型(EV71)核酸檢測(cè)試劑盒、CoxA16核酸檢測(cè)試劑盒、腸道病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于湖南圣湘生物技術(shù)有限公司。

1.2.2標(biāo)本采集采集患者發(fā)病3 d內(nèi)咽拭子和肛周拭子樣本，用專用采樣棉簽采集后，迅速將棉簽放入裝有3～5 ml生理鹽水的15 ml外螺旋蓋采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，-20 ℃以下低溫冷凍保存。

1.2.3病毒核酸提取取1.5 ml滅菌離心管，每管加入600 μl RNA提取溶液1-mix，加入200 μl待測(cè)樣本或陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，蓋上管蓋，震蕩混勻10 s，瞬時(shí)離心。每管加入100 μl RNA提取溶液2(充分混勻后吸取)，震蕩混勻10 s后置于60 ℃ 10 min，再置于4 ℃ 10 min。瞬時(shí)離心后將離心管置于分離器上，3 min后緩慢將溶液吸出，每管加入600 μl RNA提取溶液3和200 μl提取溶液4，震蕩混勻5 s，瞬時(shí)離心后將離心管再次置于分離器上。3 min后將管底殘余液體完全吸出丟棄，離心管置于新的1.5 ml離心管上，加入30 μl洗脫液洗脫RNA。

1.2.4RT-PCR反應(yīng)吸取已處理的樣本RNA，陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各5 μl加入45 μl PCR-mix中，蓋好管蓋，上機(jī)進(jìn)行PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。

1.2.5結(jié)果判讀對(duì)于Ct<35的樣本，報(bào)告為病毒檢測(cè)陽(yáng)性。

1.3數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定性資料采取率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同類型標(biāo)本腸道病毒陽(yáng)性率比較310份咽拭子標(biāo)本中，腸道病毒陽(yáng)性229例，陽(yáng)性率為73.87%；肛周拭子標(biāo)本中，腸道病毒陽(yáng)性278例，陽(yáng)性率為89.68%。肛周拭子標(biāo)本陽(yáng)性檢出率高于咽拭子標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2不同類型標(biāo)本的不同腸道病毒陽(yáng)性率比較310例患兒的咽拭子、肛周拭子標(biāo)本中，腸道通用型病毒陽(yáng)性率分別為73.87%(229/310)、89.68%(278/310)，EV71陽(yáng)性率分別為14.52%(45/310)、20.00%(62/310)，CoxA16陽(yáng)性率分別為6.45%(20/310)、9.35%(29/310)。兩種類型標(biāo)本中腸道病毒通用型、EV71、CoxA16陽(yáng)性檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

手足口病是由多種腸道病毒引起的常見(jiàn)傳染病之一，近年來(lái)在5歲以下兒童中流行，表現(xiàn)為發(fā)熱和手、足、口腔等皮疹、潰瘍，個(gè)別引起心肌炎、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等并發(fā)癥[1]。近年來(lái)，我國(guó)發(fā)生了多次以EV71型為主的手足口病爆發(fā)和流行。腸道病毒的常規(guī)病原學(xué)檢測(cè)是病毒分離培養(yǎng)后進(jìn)行血清學(xué)中和實(shí)驗(yàn)定型，盡管中和試驗(yàn)對(duì)確定腸道病毒的血清型比較特異且可靠，但是這種方法費(fèi)時(shí)耗力、靈敏度不高，目前實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)為快速診斷腸道病毒的重要手段。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)技術(shù)發(fā)現(xiàn)，肛周拭子標(biāo)本陽(yáng)性檢出率高于咽拭子標(biāo)本，咽拭子標(biāo)本中陽(yáng)性率為73.87%；肛周拭子標(biāo)本中陽(yáng)性率為89.68%。

本實(shí)驗(yàn)咽拭子、肛周拭子標(biāo)本中，腸道通用型病毒陽(yáng)性率分別為73.87%、89.68%，EV71陽(yáng)性率分別為14.52%、20.00%，CoxA16陽(yáng)性率分別為6.45%、9.35%。兩種標(biāo)本中腸道病毒通用型、EV71、CoxA16陽(yáng)性檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，顯示肛周拭子比咽拭子更敏感，檢出率更高。這與廖英等[2]報(bào)道一致。然而，李亮等[3]研究認(rèn)為咽拭子的腸道病毒通用型和EV71陽(yáng)性檢出率最高，肛周拭子的CoxA16陽(yáng)性檢出率最高。綜上所述，在今后的手足口病防治工作中，為了提高檢出率，提倡及時(shí)優(yōu)先采集肛周拭子標(biāo)本。

參考文獻(xiàn)

[1]吳亦棟,尚世強(qiáng),陳志敏,等.手足口病病原體流行特征分析及臨床意義[J].中華兒科雜志,2010,48(7):535-539.

[2]廖英,謝鴻恩.手足口病病原學(xué)檢測(cè)及臨床特點(diǎn)相關(guān)性研究[J].吉林醫(yī)學(xué),2010,31(24):4075-4076.

[3]李亮,汪華,史智揚(yáng),等.江蘇省手足口病病原陽(yáng)性檢出率相關(guān)因素及病原學(xué)特征[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2010,(1):128-133.

(收稿日期：2015-12-17)

【中圖分類號(hào)】R 446.5

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.03.052