禹崇飛，番云華，王水花，金相倫

(云南省德宏傣族景頗族自治州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 678400)

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·臨床研究·

T-SPOT.TB在肺部疾病結(jié)核感染篩查中的應(yīng)用

禹崇飛，番云華，王水花，金相倫

(云南省德宏傣族景頗族自治州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 678400)

目的 評(píng)價(jià)結(jié)核分枝桿菌(后簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌)感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)診斷肺部疾病感染結(jié)核的價(jià)值。方法 回顧性分析405例肺部疾病患者資料，所有患者均行外周血T-SPOT.TB，血清結(jié)核抗體(TB-Ab)、痰液涂片抗酸菌檢測(cè)，結(jié)核DNA檢測(cè)，并對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，比較各指標(biāo)的陽性率。結(jié)果 T-SPOT.TB陽性率為39.26%，遠(yuǎn)高于TB-Ab(10.86%)、痰液涂片(1.23%)、TB-DNA(3.95%)的陽性率。結(jié)論 T-SPOT.TB在結(jié)核病中具有較好的輔助診斷價(jià)值，其敏感性顯著高于其他檢測(cè)方法，可有效檢出結(jié)核潛伏感染，幫助臨床鑒別診治疾病，具有較高推廣應(yīng)用價(jià)值。

肺部疾??； 潛伏性結(jié)核； T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)； 結(jié)核分枝桿菌

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(后簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌)感染引起的慢性傳染病，可侵及許多臟器，以肺部結(jié)核感染最為常見。排菌者為其重要傳染源。人體感染結(jié)核桿菌后不一定立刻發(fā)病，當(dāng)?shù)挚沽档突蚣?xì)胞介導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)增高時(shí)，才可能引起臨床發(fā)病。若能及時(shí)診斷并予合理治療，大多可獲臨床痊愈。結(jié)核桿菌的實(shí)驗(yàn)室檢查有多種，常規(guī)采用痰液涂片查抗酸桿菌、血清檢測(cè)查結(jié)核抗體(TB-Ab)、痰液查結(jié)核DNA(TB-DNA)等，最新檢測(cè)方法為抗凝血提取淋巴細(xì)胞，用結(jié)核桿菌特異抗原刺激后檢查γ干擾素釋放情況，即結(jié)核桿菌感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)。筆者通過分析405例肺部疾病患者資料探討上述4種試驗(yàn)對(duì)結(jié)核感染的篩查陽性率，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年9月至2015年12月德宏傣族景頗族自治州人民醫(yī)院收治的405例肺部疾病患者，均進(jìn)行T-SPOT.TB、TB-Ab、TB-DNA和痰液涂片檢測(cè)，臨床診斷包括肺炎、肺部感染、肺占位性病變等；年齡1～87歲；女性155例，男性250例。

1.2 儀器與試劑 儀器：日本Sysmex XT1800i血細(xì)胞分析儀，美國(guó)ABI7500聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增儀。試劑：檢測(cè)試劑采用英國(guó)Oxford Immunotec公司T-SPOT.TB檢測(cè)試劑。

1.3 方法 所有研究對(duì)象清晨空腹，抽取外周靜脈血3 mL和肝素抗凝血5 mL，應(yīng)用酶法檢測(cè)血清TB-Ab，應(yīng)用T-SPOT.TB，PCR方法檢測(cè)痰液TB-DNA，痰液涂片抗酸染色查杭酸桿菌。

1.4 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) 陽性結(jié)果：(1)空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0～5個(gè)時(shí)，抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù)-空白對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)≥6。(2)空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為6～10個(gè)時(shí)，抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù)≥2×空白對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)，提示患者體內(nèi)存在針對(duì)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞，患者存在結(jié)核感染，但是否為活動(dòng)性結(jié)核病，需結(jié)合臨床癥狀及其他檢測(cè)指標(biāo)綜合判斷。陰性結(jié)果：上述標(biāo)準(zhǔn)不符合且陽性質(zhì)控對(duì)照孔正常時(shí)檢測(cè)結(jié)果為“陰性”，提示患者體內(nèi)不存在針對(duì)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel工作表進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié) 果

405例患者中，T-SPOT.TB陰性246例，TB-Ab陰性361例，痰液涂片陰性400例，TB-DNA<1 000 copy/mL 389例。T-SPOT.TB陽性159例，陽性率為39.26%；TB-Ab陽性44例，陽性率為10.86%；痰液涂片僅有5例陽性，陽性率為1.23%；TB-DNA陽性16例，陽性率為3.95%。在159例T-SPOT.TB陽性中，有25例TB-Ab陽性，4例痰液涂片陽性，16例TB-DNA陽性。在44例TB-Ab陽性中，有26例T-SPOT.TB陽性，1例痰液涂片陽性，6例TB-DNA陽性。在5例痰液涂片陽性中，有4例T-SPOT.TB陽性，1例TB-Ab陽性，1例TB-DNA陽性。在16例TB-DNA陽性中，有16例T-SPOT.TB陽性，6例TB-Ab陽性，1例痰液涂片陽性。T-SPOT.TB陽性率最高。

3 討 論

1882年，有學(xué)者證明結(jié)核桿菌為結(jié)核病病原菌。結(jié)核桿菌可侵犯全身各組織器官，但以肺部感染最多見。隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和病死率曾一度大幅下降。20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，世界目前約有20億人感染結(jié)核桿菌，每年約有 880萬新發(fā)患者，200萬人因結(jié)核病而死亡[1]。在某些發(fā)展中國(guó)家，成人中結(jié)核桿菌攜帶率高達(dá)80%，其中約5%～10%攜帶者可發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病。

結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法多，常用有結(jié)核桿菌素試驗(yàn)、TB-Ab檢測(cè)、痰液涂片抗酸染色、結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)等。結(jié)核桿菌素試驗(yàn)是應(yīng)用結(jié)核桿菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)，測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌是否能引起超敏反應(yīng)的1種試驗(yàn)，受卡介苗接種影響大，感染初期、老年人、細(xì)胞免疫低下者會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。感染結(jié)核桿菌后，體內(nèi)可產(chǎn)生特異性抗體；將結(jié)核桿菌抗原包被在固相載體上，與待測(cè)血清反應(yīng)，其與血清中相應(yīng)抗體結(jié)合，再以膠體金(或酶)標(biāo)記，顯示反應(yīng)，可檢出血清中結(jié)核桿菌抗體。由于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法缺乏對(duì)極低信號(hào)的檢測(cè)能力，結(jié)核特異的細(xì)胞免疫應(yīng)答會(huì)被體內(nèi)本身存在的固有免疫應(yīng)答所稀釋，檢測(cè)的敏感性會(huì)受到影響，出現(xiàn)一定的假陰性、假陽性反應(yīng)。痰結(jié)核桿菌陽性率較低，僅為30%～50%。TB-DNA檢測(cè)是1種敏感試驗(yàn)，通過PCR方法擴(kuò)增，可在短時(shí)間內(nèi)檢出結(jié)核桿菌，但受限于標(biāo)本取材和提取。

近年來，1種基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)(ELISPOT)，快速檢測(cè)結(jié)核病的血液診斷方法開始被應(yīng)用[2]。國(guó)外已將ELISPOT作為常規(guī)檢測(cè)結(jié)核病，尤其是早期和潛伏結(jié)核感染的方法之一[3-4]。T細(xì)胞γ干擾素釋放分析是經(jīng)結(jié)核特異性抗原刺激后釋放γ干擾素的定量檢測(cè)試驗(yàn)，是用于診斷結(jié)核潛伏感染的最新手段。由于結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞再次受結(jié)核抗原刺激時(shí)，會(huì)分泌多種細(xì)胞因子(包括γ干擾素)。T-SPOT.TB使用結(jié)核桿菌特異的RD1區(qū)編碼早期分泌靶向抗原ESAT-6和培養(yǎng)濾過蛋白CFP-10作為抗原刺激，不受卡介苗接種的影響，而絕大多數(shù)非結(jié)核桿菌缺乏RD1區(qū)基因[5]，特異性和敏感性均較高[6-7]，目前已成為歐洲國(guó)家篩查肺結(jié)核的主要方法[8]。

T-SPOT.TB檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)成為結(jié)核桿菌感染的快速診斷新工具，特別在潛伏性結(jié)核的篩查中有較高應(yīng)用價(jià)值，臨床醫(yī)師可根據(jù)篩查結(jié)果，結(jié)合臨床資料綜合分析，對(duì)結(jié)核感染早診斷、早治療。

[1]Iglionmc R.The global plan to stop TB[J].Int J Tuberc Lung Dis,2006,10(3):238-239.

[2]葉魏,章琪,方筠,等.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)在出入境人員結(jié)核分枝桿菌快速檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志,2008,31(3):185-187.

[3]Janssens JP,Roux-Lombard P,Perneger T,et al.Quantitative scoring of an interferon-gamma assay for differentiating active from latent tuberculosis[J].Eur Respir J,2007,30(4):722-728.

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[6]雷建平.菌陰肺結(jié)核病診斷思考[J].中國(guó)防癆雜志,2011,33(12):820-821.

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[8]祁燕偉,白勁松,萬榮,等.T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在人類免疫缺陷病毒合并肺結(jié)核感染中不同T細(xì)胞水平臨床診斷價(jià)值[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,32(9):63-67.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.052

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