Tdo2在大鼠圍著床期子宮中的表達(dá)規(guī)律研究

岳　巍，王勝軒，方　園，馬興紅

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030)

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Tdo2在大鼠圍著床期子宮中的表達(dá)規(guī)律研究

岳巍，王勝軒，方園，馬興紅

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030)

摘要：深入研究哺乳動物胚胎著床的分子機(jī)理對提高動物繁殖率具有重要意義。本文以大鼠為動物模型，利用原位雜交技術(shù)研究了Tdo2基因在大鼠圍著床期的表達(dá)規(guī)律，探討了Tdo2基因在大鼠胚胎著床過程中可能發(fā)揮的作用。

關(guān)鍵詞：胚胎著床；Tdo2；大鼠

資助項(xiàng)目：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生SIPT計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號：201510224206)

胚胎著床是指在卵巢激素的影響下，胚胎與子宮建立物理及生理聯(lián)系的過程[1]。胚胎著床是胚胎在子宮中進(jìn)一步發(fā)育的基礎(chǔ)。目前胚胎工程技術(shù)雖然已經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中，但是通過胚胎工程技術(shù)最后得到的動物出生率低，其主要原因是胚胎著床失敗[2]。因此，深入研究哺乳動物胚胎著床的機(jī)理對提高動物繁殖率，加快動物良種繁育具有重要意義。

色氨酸是5-羥色胺生物合成的前體，5-羥色胺作為激素和神經(jīng)遞質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脈管系統(tǒng)、胃腸道中發(fā)揮各種不同的作用。5-羥色胺也在雌性生殖系統(tǒng)如卵巢、子宮、胎盤以及輸卵管、卵泡液中檢測到。色氨酸的代謝是調(diào)節(jié)5-羥色胺水平的重要機(jī)制。色氨酸的代謝與哺乳動物妊娠緊密相關(guān)，參與色氨酸代謝的酶主要是TDO和IDO[3]。Tdo2參與小鼠蛻膜化過程[4]，但Tdo2在大鼠早期妊娠中的表達(dá)調(diào)節(jié)與功能還未見報(bào)道。本研究利用原位雜交技術(shù)研究了Tdo2在大鼠早期妊娠中的表達(dá)規(guī)律，發(fā)現(xiàn)其可能參與調(diào)節(jié)大鼠蛻膜化過程。

1材料與方法

1.1大鼠早期妊娠取材

下午3：00將性成熟雌性與雄性大鼠合籠，次日早晨檢查陰道涂片，將發(fā)現(xiàn)精子的當(dāng)天計(jì)為妊娠第1天。分別取妊娠第1～9天大鼠子宮組織。

1.2原位雜交

根據(jù)大鼠Tdo2序列(GenBank系列號：NM_022403.2)合成引物-CCTTTCCAGTTGCTGACCTC和TGGACCACAACATCACGTCT，PCR擴(kuò)增片段長428 bp。擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到PGEM-T 載體，測序驗(yàn)證克隆的方向與正確性，利用Roche公司的RNA標(biāo)記試劑盒標(biāo)記cRNA探針，原位雜交方法按文獻(xiàn)進(jìn)行[5]。

2結(jié)果與討論

由圖1可見，在妊娠1～6 d大鼠子宮未見Tdo2原位雜交信號。在妊娠第7天的子宮著床位點(diǎn)處系膜對側(cè)上皮下基質(zhì)細(xì)胞檢測到非常強(qiáng)的Tdo2雜交信號。隨著妊娠的進(jìn)行，Tdo2表達(dá)向系膜側(cè)擴(kuò)展，在妊娠第8天在整個(gè)胚胎周圍的子宮初級蛻膜區(qū)檢測到較強(qiáng)的Tdo2雜交信號，在次級蛻膜區(qū)有弱的信號。妊娠第9天，Tdo2雜交信號開始減弱，表達(dá)的模式與妊娠第8天類似。

大鼠早期妊娠1～3 d胚胎在輸卵管中成熟，妊娠第4天胚胎進(jìn)入子宮，妊娠第5天胚胎在子宮中進(jìn)一步發(fā)育，直到妊娠第6天胚胎著床。妊娠第7～9天，胚胎進(jìn)一步侵入到子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，基質(zhì)細(xì)胞發(fā)生復(fù)雜的形態(tài)及生理生化變化，變?yōu)橥懩ぜ?xì)胞，這個(gè)過程稱為蛻膜化[6]。蛻膜細(xì)胞能保護(hù)胚胎免受母體免疫系統(tǒng)攻擊及提供胚胎早期發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)[6]。Hoxa-10是蛻膜化的重要調(diào)節(jié)分子，Hoxa-10基因敲除小鼠蛻膜化失敗，小鼠不育[7]。最近的研究顯示，Hoxa-10調(diào)節(jié)子宮Tdo2的表達(dá)[8]。Tdo2在大鼠的蛻膜組織中表達(dá)，表明Tdo2可能與大鼠子宮蛻膜化密切相關(guān)。Tdo2在小鼠的蛻膜組織表達(dá)，抑制Tdo2的功能干擾蛻膜化發(fā)生[4]。這些研究表明Tdo2可能在不同物種的蛻膜化過程中具有保守的功能。

圖1　Tdo2基因在大鼠早期妊娠中的表達(dá)

D1-D9代表早期妊娠第1～9天，D6NI代表早期妊娠第6天非著床位點(diǎn)，D6IN代表早期妊娠第6天著床位點(diǎn)。星型標(biāo)記胚胎位置，AM代表系膜對側(cè)，M代表系膜側(cè)。棕黑色斑點(diǎn)代表陽性雜交信號。

3參考文獻(xiàn)

[1]Wang H，Dey SK.Roadmap to embryo implantation：clues from mouse models[J].Nat Rev Genet 2006；7 (3)：185-99.

[2]Diskin MG，Murphy JJ，Sreenan JM.Embryo survival in dairy cows managed under pastoral conditions[J].Anim Reprod Sci 2006；96 (3-4)：297-311.

[3]Stone TW，Darlington LG.Endogenous kynurenines as targets for drug discovery and development[J].Nat Rev Drug Discov 2002；1 (8)：609-20.

[4]Li DD，Gao YJ，Tian XC，etal.Differential expression and regulation of Tdo2 during mouse decidualization[J].J Endocrinol 2014；220 (1)：73-83.

[5]Ma XH，Hu SJ，Yu H，etal.Differential expression of transcriptional repressor snail gene at implantation site in mouse uterus[J].Mol Reprod Dev 2006；73 (2)：133-41.

[6]Ramathal CY，Bagchi IC，Taylor RN，etal.Endometrial decidualization：of mice and men[J].Semin Reprod Med 2010；28 (1)：17-26.

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作者簡介：岳巍(1995-)，女，本科。

收稿日期：2016-01-16

中圖分類號：S814.3

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1005-2739(2016)02-0014-02