高鶴麗，周　娜，孫　昭，竇雪琳，管　梅，白春梅

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院　北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院　北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，北京 100730

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·論著·

結(jié)直腸癌組織中KLF17的表達(dá)水平及臨床意義

高鶴麗，周娜，孫昭，竇雪琳，管梅，白春梅

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，北京 100730

摘要：目的檢測KLF17在結(jié)直腸癌(CRC)組織的表達(dá)，評價(jià)其對CRC預(yù)后的影響。方法免疫組織化學(xué)法檢測KLF17在CRC腫瘤組織及瘤旁正常組織中的表達(dá)，分析KLF17表達(dá)對CRC患者無病生存期的影響。結(jié)果73例CRC患者中，32例(43.8%)腫瘤組織中KLF17表達(dá)為陽性，41例(56.2%)表達(dá)為陰性；53例(72.6%)癌旁正常組織中KLF17表達(dá)為陽性，20例(27.4%)表達(dá)為陰性；KLF17在腫瘤組織中的表達(dá)陽性率明顯低于癌旁正常組織(χ2=12.418，P=0.001)。在Ⅲ期CRC患者中，KLF17陽性患者的無病生存期為(56.3±7.2)個(gè)月(95% CI：42～70個(gè)月)，明顯長于KLF17陰性患者的(32.3±5.5)個(gè)月(95% CI：22～43個(gè)月)(P=0.039)。結(jié)論KLF17在CRC中表達(dá)水平明顯低于正常結(jié)直腸組織，KLF17表達(dá)陽性與Ⅲ期CRC患者的無病生存相關(guān)。

關(guān)鍵詞：KLF17；結(jié)直腸癌；無病生存期

ActaAcadMedSin，2016,38(1)：69-72

結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)是威脅人類生命健康的主要疾病之一，其發(fā)病率在我國男女惡性腫瘤中分別居第5位和第3位，全國每年有近10萬名患者診斷為CRC，診斷時(shí)約有20%患者已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。因此，研究CRC發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制及預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)記物是研究之重。Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子(Krüppel-like factors，KLFs) 家族屬于鋅指轉(zhuǎn)錄因子，其典型結(jié)構(gòu)特征是在羧基端具有3個(gè)C2H2鋅指結(jié)構(gòu)。KLFs家族在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，包括腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、分化等過程[2- 3]。KLF17是2006年才被證實(shí)的KLF家族新成員[4]。有研究顯示，作為抑癌基因，KLF17在肺癌[5]、肝癌[6]等惡性腫瘤的表達(dá)水平明顯減低，且低水平的KLF17與臨床預(yù)后差相關(guān)。本研究測定了KLF17在CRC中的表達(dá)水平，初步探討了KLF17基因與CRC的關(guān)系。

對象和方法

對象2005年1月至2010年1月在北京協(xié)和醫(yī)院基本外科行標(biāo)準(zhǔn)CRC根治術(shù)R0切除、經(jīng)病理科確診為CRC、有明確隨訪結(jié)果、病理組織可進(jìn)行檢測的CRC患者73例，其中，男39例，女34例，中位年齡61歲(44～76歲)；結(jié)腸癌52例，直腸癌21例；卡氏功能狀態(tài)(Karnofsky Performance Status，KPS)評分均≥80分；美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network，NCCN)腫瘤分期Ⅱ期 25例(34.2%)，Ⅲ期48例(65.8%)。Ⅲ期患者均采用含奧沙利鉑標(biāo)準(zhǔn)方案化療，其中使用FOLFOX方案(奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶/四氫葉酸)39例，XELOX方案(奧沙利鉑聯(lián)合卡培他濱)化療9例；Ⅱ期患者3例未化療，3例采用5-FU/LV(氟尿嘧啶/四氫葉酸)方案化療，19例采用FOLFOX方案化療。隨訪截止至2013年1月30日，中位隨訪時(shí)間36.5個(gè)月(6～84個(gè)月)。對所有患者的病理重新閱片，分別選取腫瘤組織和瘤旁組織蠟塊。

免疫組織化學(xué)方法石蠟組織切片常規(guī)脫蠟，檸檬酸鹽緩沖液微波修復(fù)，過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，山羊血清封閉，加抗KLF17抗體(1∶50，美國Genetex公司)4℃過夜。加生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育60 min。加鏈霉素抗生物素，室溫下孵育30 min。DAB顯色，封片，在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞。免疫組織化學(xué)結(jié)果由2名醫(yī)生分別閱片并判讀結(jié)果，如果兩人結(jié)果不一致將由第3名醫(yī)生重新閱片。染色評分標(biāo)準(zhǔn)按照細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核染色強(qiáng)度以及陽性細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行：-：沒有著色；±：淡黃色；+：黃色；++：棕黃色；+++：棕色。細(xì)胞無陽性著色(-、±)或≤10%的癌細(xì)胞著色被認(rèn)為是陰性表達(dá)；>10%的癌細(xì)胞著色(+、++、+++)被認(rèn)為是陽性表達(dá)。免疫組織化學(xué)評估時(shí)采用盲法處理。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)量資料組間比較采用成組t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)或四格表確切概率檢驗(yàn)；生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Meier法，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)；對影響生存預(yù)后的聯(lián)合效應(yīng)采用Cox回歸模型進(jìn)行多因素分析；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一般臨床病理特點(diǎn)73例CRC患者中，腺癌68例(93.1%)，黏液腺癌4例(5.5%)，印戒細(xì)胞癌1例(1.4%)。3例黏液腺癌和1例印戒細(xì)胞癌未描述分化程度，其余69例患者中，病理低分化10例(14.5%)，中分化29例(42%)，高分化30例(43.5%)。截止隨訪復(fù)發(fā)36例，無復(fù)發(fā)37例。

KLF17在腫瘤組織和瘤旁組織中的表達(dá)水平73例CRC患者中，32例(43.8%)腫瘤組織中KLF17表達(dá)為陽性，41例(56.2%)表達(dá)為陰性；53例(72.6%)癌旁正常組織中KLF17表達(dá)為陽性，20例(27.4%)表達(dá)為陰性；KLF17在腫瘤組織中的表達(dá)陽性率明顯低于癌旁正常組織(χ2=12.418，P=0.001)。進(jìn)一步亞組分析結(jié)果顯示，25例Ⅱ期CRC患者中，10例腫瘤組織中KLF17表達(dá)為陽性，15例表達(dá)為陰性；20例癌旁正常組織中KLF17表達(dá)為陽性，5例表達(dá)為陰性；KLF17在腫瘤組織中的表達(dá)陽性率明顯低于癌旁正常組織(χ2=8.333，P=0.009)。48例Ⅲ期CRC患者中，22例腫瘤組織中KLF17表達(dá)為陽性，26例表達(dá)為陰性；33例癌旁正常組織中KLF17表達(dá)為陽性，15例表達(dá)為陰性；KLF17在腫瘤組織中的表達(dá)陽性率明顯低于癌旁正常組織(χ2=5.151，P=0.038)。

腫瘤組織中KLF17表達(dá)與臨床病理因素關(guān)系將CRC組織中KLF17表達(dá)與73例患者的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后結(jié)果顯示，CRC患者正常結(jié)腸黏膜組織中KLF17的表達(dá)情況和臨床病理因素均不相關(guān)(P均>0.05)，患者腫瘤組織中KLF17表達(dá)水平也與患者的性別、年齡、有無脈管侵潤、病理組織類型、TNM分期、分化程度、術(shù)中淋巴結(jié)數(shù)目和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無關(guān)(P均>0.05)(表1)。

表 1　結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中KLF17表達(dá)與臨床病理因素關(guān)系[n(%)]

KLF17表達(dá)水平對CRC患者DFS的影響在所有CRC患者中，KLF17陰性和陽性患者的無病生存期(disease free survival，DFS)分別為(42.8±4.7)個(gè)月(95%CI：34～52個(gè)月)和(53.9±5.8)個(gè)月(95%CI：43～65個(gè)月)，兩者相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.454)(圖1A)。在Ⅲ期CRC患者中，KLF17陽性患者的DFS為(56.3±7.2)個(gè)月(95%CI：42～70個(gè)月)，明顯長于KLF17陰性患者的(32.3±5.5)個(gè)月(95%CI：22～43個(gè)月)(P=0.039)(圖1B)。

Ⅲ期CRC患者根治性手術(shù)后的預(yù)后影響因素采用Cox回歸分析分析了性別、年齡、有無脈管侵潤、腫瘤部位、病理組織類型、T分期、N分期、分化程度、術(shù)中淋巴結(jié)數(shù)目、KLF17表達(dá)等因素對患者DFS的影響，單因素分析結(jié)果顯示T分期(P=0.038)、N分期(P=0.032)及KLF17表達(dá)情況(P=0.039)與患者的DFS預(yù)后相關(guān)。多因素分析結(jié)果顯示，KLF17(P=0.034)及N分期(P=0.039)是影響Ⅲ期CRC患者的獨(dú)立預(yù)后因素。

A.全部患者；B.48例Ⅲ期患者

A.all patients；B.48 stage Ⅲ patients

圖1KLF17表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者無病生存期的關(guān)系

Fig1Relationship between KLF17 expression and disease-free survival in colorectal cancer patients

討論

KLF17屬于特化蛋白/Krüppel 樣因子(specificity protein/Krüppel-like factor，Sp/KLF)鋅指蛋白家族，該家族包含功能各異的轉(zhuǎn)錄因子，通過結(jié)合不同的啟動(dòng)子或細(xì)胞蛋白，在各種細(xì)胞過程中發(fā)揮激活子或抑制子的作用。近來研究顯示，KLF17表達(dá)下調(diào)參與腫瘤的多種生物學(xué)功能，如侵襲、生長，并與腫瘤患者的預(yù)后相關(guān)[5- 6]。

研究表明，KLF17為抑癌基因，其表達(dá)水平在多種常見腫瘤中明顯減低，如肺癌[5]、肝癌[6]、乳腺癌[7- 8]。但也有研究發(fā)現(xiàn)，KLF17在子宮內(nèi)膜癌 (endometrioid endometrial cancer，EEC)中過度表達(dá)，并起到致癌作用[9]。本研究檢測了KLF17在CRC中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示CRC腫瘤組織的KLF17表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織，與KLF17在其他消化系統(tǒng)腫瘤中的表達(dá)情況相近。

有研究提示，KLF17的表達(dá)與腫瘤的某些臨床病理因素存在負(fù)相關(guān)，如腫瘤大小、淋巴血管侵潤和N分期[5- 6]。但本研究未發(fā)現(xiàn)KLF17與CRC的臨床病理因素之間有相關(guān)性，推測可能與本組病例數(shù)目較少有關(guān)，也有可能是因?yàn)镵LF17在CRC中的作用機(jī)制可能不同于其他腫瘤，尚需進(jìn)一步明確KLF17在CRC中的分子學(xué)機(jī)制。

KLF17表達(dá)異常對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要作用。KLF17表達(dá)下調(diào)與腫瘤的生長、侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在乳腺癌[8]和肝癌[6]的相關(guān)研究中均發(fā)現(xiàn)過KLF17在腫瘤組織中表達(dá)水平明顯減低，KLF17表達(dá)減低可促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。KLF17水平升高可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長[5]。同時(shí)KLF17可促進(jìn)腫瘤的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transitions，EMT)過程，在乳腺癌[7]、肝癌[6]細(xì)胞系中，抑制KLF17表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的EMT，從而促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移。此外，KLF17與腫瘤患者的預(yù)后有關(guān)，在肝癌[6]、肺癌[5]、胃癌[10]中，KLF17的表達(dá)水平減低是腫瘤患者較差預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究亦發(fā)現(xiàn)，KLF17的表達(dá)水平與Ⅲ期CRC患者的DFS相關(guān)，KLF17表達(dá)陽性患者的DFS較長。但在Ⅱ期患者中未發(fā)現(xiàn)KLF17與DFS的關(guān)系，推測其原因可能是：(1)Ⅱ期患者的病例數(shù)較少；(2)Ⅱ期患者大多DFS長，在研究時(shí)尚有2/3的Ⅱ期患者處于DFS期，影響了生存分析結(jié)果。今后的研究將增加Ⅱ期患者數(shù)量，延長隨訪時(shí)間，以明確KLF17與Ⅱ期CRC患者的DFS關(guān)系。此外，由于本研究患者死亡數(shù)目也較少，無法計(jì)算OS，仍需繼續(xù)隨訪，以研究KLF17表達(dá)和OS的關(guān)系。

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KLF17 Expression in Colorectal Carcinoma and Its Clinical Significance

GAO He-li，ZHOU Na，SUN Zhao，DOU Xue-lin，GUAN Mei，BAI Chun-mei

Department of Oncology，PUMC Hospital，CAMS and PUMC，Beijing 100730,China Corresponding author：BAI Chun-meiTel：010- 69158315，E-mail：baichunmei1964@163.com

ABSTRACT：ObjectiveTo detect KLF17 expression in colorectal carcinoma (CRC) and to evaluate its effect on the prognosis of colorectal carcinoma. MethodsImmunohistochemistry was performed to detect the expression of KLF17 in CRC and matched pericarcinous tissue，and the relationship between KLF17 expression and disease-free survival(DFS)was analyzed. ResultsOf 73 CRC patients，KLF17 expression was positive in 32 patients and negative in 41 patients. KLF17 expression rate was significantly lower in CRC tissue than in pericarcinous tissue (χ2=12.418，P=0.001). The DFS of KLF17-positive stage Ⅲ colon cancer patients was (56.3±7.2) months (95% CI：42- 70 months)，which was significantly longer than that [(32.3±5.5) months (95% CI：22- 43 months)] of KLF17-negative patients (P=0.039). ConclusionKLF17 expression decreases in CRC tissue，and a positivie KLF17 expression predicts a better prognosis in stage Ⅲ CRC patients.

Key words：KLF17；colorectal carcinoma；disease-free survival

(收稿日期：2015- 03- 30)

DOI：10.3881/j.issn.1000- 503X.2016.01.012

中圖分類號:R735.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號：1000- 503X(2016)01- 0069- 04

通信作者：白春梅電話：010- 69158315，電子郵件：baichunmei1964@163.com

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金(81472785) Supported by the National Natural Sciences Foundation of China(81472785)