紫花苜蓿提取物對(duì)慢性腎小球腎炎的保護(hù)作用

于波，孫英蓮，王英軍

(1．吉林油田總醫(yī)院藥劑科，吉林?松原?138000；?2．吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春?130012)

苜蓿(Medicago)隸屬于豆科，分布于地中海區(qū)域，西南亞、中亞、非洲和我國(guó)也有廣泛栽培，紫花苜蓿、黃花苜蓿和南苜蓿在我國(guó)被作為藥用。苜蓿全草、根在民間主要用于治療消化不良、肺熱咳嗽、黃疸、膀胱結(jié)石等癥。苜蓿屬植物含有的次生代謝產(chǎn)物主要為黃酮和皂苷類物質(zhì)，還含有葉蛋白、多糖、香豆素等活性成分。該屬植物及其提取物具有抗氧化、抗菌、護(hù)肝、降血壓、調(diào)血脂、降血糖、止痛鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及改善記憶力等多種生物活性。本實(shí)驗(yàn)通過大鼠Heyman’n腎小球腎炎模型，探討紫花苜蓿提取物對(duì)慢性腎小球腎炎的治療作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康Wistar大鼠60只，雌、雄各半，體重180g～210g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK-(吉)2008-0005。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥與試劑

紫花苜蓿提取物(黃色粉末，黃酮類成分含量約為10%，用時(shí)以水配成所需濃度。陜西瑞康生物工程有限公司，批號(hào)：1007，規(guī)格：10∶1)；腎炎康膠囊(長(zhǎng)春新宇制藥有限公司)；弗氏完全佐劑(北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限責(zé)任公司)。

1.3 儀器

GF-D800生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 腎皮質(zhì)弗氏完全佐劑混懸液的制備

取健康Wistar大鼠，脫椎處死，迅速摘取腎臟，用生理鹽水反復(fù)沖洗，切開腎臟，取腎皮質(zhì)3g，加生理鹽水，冰浴條件下勻漿，將勻漿液加生理鹽水至60mL，按1∶1比例加入弗氏完全佐劑，制成腎皮質(zhì)弗氏完全佐劑混懸液120mL備用。

2.2 Heyman’n腎小球腎炎模型的復(fù)制[1]

選取180g～210g健康Wistar大鼠，雌、雄各半。其中，10只大鼠作為正常對(duì)照組，其余大鼠經(jīng)腹腔注射腎皮質(zhì)弗氏完全佐劑混懸液1.5mL/只。大鼠每間隔2周按同樣方法、同劑量注射1次，共注射5次。末次注射后24h，將大鼠放入代謝籠中，收集尿液，雙縮脲法測(cè)尿蛋白含量，尿蛋白含量升高(尿蛋白定量>0.25g/L)大鼠為模型成功指標(biāo)。

2.3 給藥方法及劑量

選成模大鼠40只，按尿蛋白含量和體重分組，分別為模型組、腎炎康膠囊0.46g/kg組、紫花苜蓿提取物高劑量4g/kg組和低劑量2g/kg組，每組10只。正常對(duì)照組及模型組給同體積水，受試動(dòng)物每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥21d，給藥體積均為20mL/kg。

2.4 觀察指標(biāo)及尿蛋白檢測(cè)

分別于成模后(給藥前)、末次給藥后1h將大鼠放入代謝籠內(nèi)收集尿液，雙縮脲法測(cè)定尿蛋白含量；尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)檢測(cè)：末次給藥后由大鼠腹主動(dòng)脈取血6mL，2mL自然沉降后，3000r/min離心10min，取上層血清用于檢測(cè)；摘取腎臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢測(cè)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 紫花苜蓿提取物對(duì)尿蛋白、尿素氮、肌酐的影響

模型組大鼠尿蛋白含量明顯高于空白對(duì)照組，表明腎小球腎炎模型形成。紫花苜蓿提取物連續(xù)給藥21d后，高劑量組尿蛋白含量均明顯低于模型組(P<0.05)，表明紫花苜蓿提取物明顯降低Heyman’n腎炎模型大鼠尿蛋白含量；模型組大鼠尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)同正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明該指標(biāo)在本次造模過程中對(duì)于血清生化學(xué)指標(biāo)BUN、CRE無明顯影響。結(jié)果見表1。

表1紫花苜蓿提取物對(duì)慢性腎炎大鼠尿蛋白和血清生化學(xué)的影響

Table 1Purple alfalfa extract of chronic nephritis in rats urine protein and the effects of serum biochemistry

注：同模型組比較，*．P<0.05；**．P<0.01。

Note:Compared with model group，*．P<0.05；**．P<0.01．

3.2 紫花苜蓿提取物對(duì)Heyman’n腎炎大鼠腎臟病理組織學(xué)的影響

肉眼觀察可見，正常對(duì)照組大鼠腎臟呈暗紅色，組織新鮮，無異常現(xiàn)象；模型組大鼠腎臟顏色為黃色，表面粗糙，無血色；紫花苜蓿提取物各劑量組大鼠腎臟顏色呈黃色至暗紅色之間，但顏色較模型組明顯趨于好轉(zhuǎn)。光學(xué)顯微鏡下觀察可見，正常組腎組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球在腎皮質(zhì)區(qū)分布較均勻，腎小球囊清晰，基底膜厚度正常，內(nèi)膜細(xì)胞排列整齊大小較一致，血管球正常形態(tài)，腎小管形態(tài)正常；模型組腎組織結(jié)構(gòu)大體正常，腎小球在皮質(zhì)區(qū)分布較均勻，部分略增大，腎小球囊內(nèi)可見蛋白樣物質(zhì)紅細(xì)胞，腎小球囊上皮細(xì)胞可見少數(shù)上皮增生凸起，部分血管球的血管呈擴(kuò)張狀態(tài)，血管內(nèi)皮細(xì)胞略增大(3例較明顯)，腎小管形態(tài)基本正常，管腔內(nèi)可見蛋白樣物質(zhì)，腎間質(zhì)可見白細(xì)胞；紫花苜蓿提取物高劑量組腎組織結(jié)構(gòu)大體正常，腎小球在皮質(zhì)區(qū)分布較均勻，部分略增大，腎小球囊內(nèi)可見蛋白樣物質(zhì)(較模型組明顯減少)，腎小球囊上皮細(xì)胞與正常對(duì)照組基本一致，未見明顯改變，血管球大部分較正常，部分(1例)可見血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞略增大；紫花苜蓿提取物低劑量組腎組織結(jié)構(gòu)大體正常，腎小球在皮質(zhì)區(qū)分布較均勻，部分略增大，腎小球囊內(nèi)可見蛋白樣物質(zhì)(較模型組減少)，腎小球囊上皮細(xì)胞與正常對(duì)照組基本一致，未見明顯改變，血管球大部分較正常，其中有2例間質(zhì)中白細(xì)胞較多。模型組病理組織學(xué)觀察表明，大鼠慢性腎炎模型基本成立；紫花苜蓿提取物各給藥組與模型組比較其病理組織學(xué)改變均有不同程度地明顯減輕。表明紫花苜蓿提取物對(duì)慢性腎炎大鼠具有治療作用。

4 討論

Heyman’n腎炎的臨床過程和病理類型與人類膜性腎病十分接近，該動(dòng)物模型分為主動(dòng)型Heyman’n腎炎和被動(dòng)型Heyman’n腎炎，該腎炎發(fā)病機(jī)制是由于多種細(xì)胞因子、補(bǔ)體激活、膜攻擊復(fù)合物形成、炎癥細(xì)胞以及炎性介質(zhì)增加而引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致腎小球基底膜損傷。

本實(shí)驗(yàn)采用的是主動(dòng)型Heyman’n腎炎模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠經(jīng)腹腔注射腎皮質(zhì)弗氏完全佐劑混懸液5次后尿蛋白含量明顯高于空白對(duì)照組，病理組織學(xué)可見腎小球囊內(nèi)有蛋白樣物質(zhì)紅細(xì)胞，腎小球囊上皮細(xì)胞可見少數(shù)上皮增生凸起，部分血管球的血管呈擴(kuò)張狀態(tài)，血管內(nèi)皮細(xì)胞略增大，腎小管形態(tài)基本正常，管腔內(nèi)可見蛋白樣物質(zhì)，腎間質(zhì)可見白細(xì)胞，表明Heyman’n大鼠腎炎模型形成。紫花苜蓿提取物給藥21d后，高劑量組、低劑量組可明顯降低大鼠尿蛋白含量，腎臟病理組織學(xué)亦可見腎小球囊內(nèi)蛋白樣物質(zhì)較模型組明顯減少，腎小球囊上皮細(xì)胞與正常對(duì)照組基本一致，未見明顯改變；血管球大部分較正常，部分可見血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞略增大，提示紫花苜蓿提取物對(duì)慢性腎炎大鼠具有治療作用看，同時(shí)明顯降低尿蛋白含量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫花苜蓿提取物對(duì)慢性腎炎大鼠腎臟具有保護(hù)作用，但慢性腎炎發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，其保護(hù)作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步探討。

[1]徐淑云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1227.