李 紅， 施嘉琛， 高文暉（北京市疾病預(yù)防控制中心， 北京 100013）

大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇直接測定與計(jì)算結(jié)果的比較

李 紅， 施嘉琛， 高文暉
（北京市疾病預(yù)防控制中心， 北京 100013）

目的 比較直接測定與公式計(jì)算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）結(jié)果是否存在差異。 方法 用直接一步法檢測大鼠血清中LDL-C； 根據(jù)Friedewald公式，通過總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量計(jì)算LDL-C，并將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。 結(jié)果 直接測定大鼠血清和公式計(jì)算LDL-C結(jié)果差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）， 兩種結(jié)果相關(guān)性良好（相關(guān)系數(shù)為0.976 0）。結(jié)論 在進(jìn)行相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，因血樣采集或?qū)嶒?yàn)室檢測條件有限時(shí)，可使用Friedewald公式計(jì)算LDL-C。

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）； Friedewald公式計(jì)算法； 大鼠血清； 血脂

血脂常規(guī)檢測包括血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的測定。血脂測定結(jié)果的異常與人類健康息息相關(guān)，其中高TC血癥就是冠心病的危險(xiǎn)因素之一，TG的升高表明體內(nèi)存在代謝異常，HDL-C水平與冠心病呈負(fù)相關(guān)，而LDL-C的異常更是造成體內(nèi)動(dòng)脈硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險(xiǎn)因素。

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是指動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的沉積，平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進(jìn)行性病理過程。AS是心腦血管系統(tǒng)中最常見的疾病，嚴(yán)重危害人類的健康。通過對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立高血脂模型，進(jìn)行各種降脂研究來改善脂代謝異常［1-9］。提供準(zhǔn)確的血脂檢測數(shù)據(jù)是研究的基礎(chǔ)，在動(dòng)物血樣采集、實(shí)驗(yàn)室檢測條件以及項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)發(fā)生問題時(shí)，LDL-C的直接測定是否可以改為使用公式計(jì)算，本文主要是比較直接測定與公式計(jì)算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇結(jié)果是否存在差異提供支持?jǐn)?shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

全自動(dòng)生化分析儀日立- 7600P模塊（日立高新技術(shù)有限公司， 日本）。

1.2 試劑、血脂復(fù)合校準(zhǔn)品和質(zhì)控血清

TC， 膽固醇氧化酶法； TG， 去游離甘油法； HDL-C 和LDL-C使用一步法，均使用雙試劑。血脂試劑、四項(xiàng)復(fù)合校準(zhǔn)品，以及質(zhì)控血清是由和光（和光純藥工業(yè)株式會(huì)社，日本）提供。血脂復(fù)合校準(zhǔn)品TC、TG、HDL-C和LDL-C使用計(jì)量單位mmol/L的濃度。

1.3 大鼠血樣

6～8 周齡清潔級Wistar大鼠70只（雌雄各半），由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 ［SCXK-（軍）2012-0004］。戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，室溫分離血清。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

在日立7600生化分析儀P模塊上同時(shí)檢測70例大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C，樣品編號1、2放質(zhì)控血清，3～72編號為大鼠血樣，73、74號為質(zhì)控血清。打開通訊實(shí)時(shí)監(jiān)測將數(shù)據(jù)傳入實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)。按照法定計(jì)量單位mmol/L，F(xiàn)riedewald公式計(jì)算法，LDL-C=TC-（HDL-C）-TG/ 2.2。在實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)LIMS（Laboratory Information Management System，LIMS）設(shè)置計(jì)算項(xiàng)目直接計(jì)算LDL-C輸出結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)輸出的所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直接使用SPSS16.0軟件包進(jìn)行t檢驗(yàn)和相關(guān)回歸分析統(tǒng)計(jì)處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清血脂檢測結(jié)果

TC=1.91±0.32 mmol/L， TG=0.62±0.16 mmol/L，HDL-C = 0.87±0.14 mmol/L，LDL-C = 0.77± 0.36 mmol/L。

2.2 計(jì)算結(jié)果

根據(jù)公式計(jì)算，大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇為0.761±0.311 mmol/L，與實(shí)測結(jié)果（0.77± 0.36 mmol/L）差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.356， P=0.179）。

2.3 測定值與計(jì)算值的相關(guān)性

大鼠血清LDL-C直接測定與公式計(jì)算的結(jié)果線性回歸方程y=0.854 4X+0.099 2，r2為0.954 6，相關(guān)系數(shù)r為0.976 0。

3 討論

大鼠血清LDL-C直接測定與公式計(jì)算兩種結(jié)果差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）EP9-A2文件的要求r≥0.975（或r2≥0.95）［10］，兩種結(jié)果有良好的相關(guān)性。這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致［11～14］。

血脂檢測中TC和TG有完整的參考系統(tǒng)、決定性方法和參考方法。TC和TG決定性方法都是用同位素稀釋-質(zhì)譜法； TC參考方法為正己烷抽提L-B反應(yīng)顯色法（ALBK法）； TG參考方法為二氯甲烷抽提，變色酸顯色法； TC常規(guī)方法為酶法（CODPAP法）； TG常規(guī)方法為酶法（GPO-PAP法）。HDL-C 和LDL-C沒有決定性方法，只有參考方法，參考方法是超速離心結(jié)合選擇性沉淀法［15］。LDL-C使用間接計(jì)算法，是Friedewald于1972年發(fā)明的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)式。運(yùn)用時(shí)有一定條件， 空腹血清不含乳糜微粒， TG濃度在4.60 mmol/L以下， Ⅲ型高脂血癥除外。血清TG 含量2.26 mmol/L以下， 計(jì)算的LDL-C與其實(shí)測值符合為90%， TG在2.26～4.50 mmol/L時(shí)，符合率是72%，TG在4.50～6.80 mmol/L，符合率只有39%±10%［16］。大鼠血清TG含量通常比人血清含量（TG=0.62±0.16 mmol/L）低，正好在實(shí)際測定值與計(jì)算值符合率90%的組內(nèi)。大鼠血清LDL-C直接測定與公式計(jì)算兩種結(jié)果得到了相關(guān)性良好和差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)論。

對于檢測血脂標(biāo)本采集和處理，測定人血樣血脂時(shí)，在清晨空腹采血。因此建議采集大鼠血液時(shí)禁食采血。同時(shí)建議使用血清標(biāo)本進(jìn)行分析，肝素抗凝的血漿不影響血脂分析，EDTA抗凝血漿TC和TG含量比血清大約低3%［15］。血清密封4 ℃冰箱中可穩(wěn)定4 d，確保血脂分析前的質(zhì)量控制。

動(dòng)物血樣不易采集，一方面是采血部位問題，另一方面是采血量。各實(shí)驗(yàn)室采集大鼠標(biāo)本部位差異很大，采用斷頭、麻醉采集腹主動(dòng)脈、眼內(nèi)眥動(dòng)脈等。大鼠血樣采集部位的不同也會(huì)導(dǎo)致某些項(xiàng)目檢測結(jié)果的差異［17，18］，另外分析試劑和儀器也是保證質(zhì)量的關(guān)鍵［19，20］。日常工作中多使用常規(guī)方法檢測批量標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)中樣品編號1、2放質(zhì)控血清，3～72編號為大鼠血樣，73、74號為質(zhì)控血清，這樣的編號順序目的是用質(zhì)控血清監(jiān)控大鼠血樣全部檢測過程。在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評價(jià)活動(dòng)中獲得合格的成績［21］，與衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所、美國疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的常規(guī)方法分析和參考物質(zhì)比對都獲得滿意結(jié)果［22］。某些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室不具有生化分析的檢測能力，可能使用手工或半自動(dòng)分析設(shè)備。項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)緊張是另一可能遇到的困難，當(dāng)不能直接測定LDL-C時(shí)，在確保TC、TG、HDL-C檢測準(zhǔn)確的前提下，可用Friedewald公式計(jì)算低密度脂蛋白膽固醇。

［1］ 李海燕， 黎家敏， 李靖瀟， 等. 高糖高脂飼料聯(lián)合地塞米松誘發(fā)樹鼬血糖、血脂異常［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，2010， 30（3）:197-200.

［2］ 林秋實(shí)， 陳吉棣. 山楂及山楂黃酮預(yù)防大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的分子機(jī)制研究［J］. 營養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2000， 22 （2）:131-136.

［3］ 于娟， 那順巴雅爾， 楊海英， 等. 苜蓿提取物的降血脂功能實(shí)驗(yàn)［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2008， 28 （3）:171-173.

［4］ 俞筱琦， 施志沖， 鄭勇英， 等. 微生態(tài)類制劑調(diào)節(jié)血脂和潤腸通便作用［J］. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 2001， 21（2）:109-112.

［5］ 崔康康， 姬鳳彩， 王志琴， 等. 新疆昆侖雪菊水提液對大鼠血脂的影響［J］. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 36（5）:366-370.

［6］ 李翼飛， 趙琰， 屈會(huì)化， 等. 精制清開靈對高脂血癥大鼠血脂的影響［J］. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 36（1）:38-41.

［7］ 沈龍海， 安泳潼， 張瑱. 幾種高血脂癥動(dòng)物模型的比較［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2012， 32（2）:129-132.

［8］ 馬毅， 曾軍平， 徐麗， 等. 黃連素聯(lián)合二甲雙胍對實(shí)驗(yàn)性高脂血癥的降血脂作用［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2014， 34 （3）:228-231.

［9］ 路瑛麗， 張漓， 馮連世， 等. 高脂飲食大鼠高住高練模型的建立［J］. 中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志， 2012， 31（5）:438-442.

［10］ The National Committee for Clinical Laboratory Standards. EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples； Approved Guideline［S］. 2nd Edition. USA: NCCLS， 2002.

［11］ 許紅霞. 低密度脂蛋白勻相法測定值與F 公式計(jì)算值的比較［J］. 中國民康醫(yī)學(xué)， 2014， 26（7）:57-58.

［12］ 石應(yīng)元， 董明國. 血清低密度脂蛋白膽固醇直接測定法與Friedewald 公式計(jì)算法的對比分析［J］. 數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2009， 22（4）:396-397.

［13］ 王德友， 李興武， 程佩萍， 等. 血清LDL-C 均相法與Friedewald 公式計(jì)算法相關(guān)性分析［J］. 中華全科醫(yī)學(xué)， 2013，11（11）:1781-1783.

［14］ 呂楊， 董矜. 血清低密度脂蛋白膽固醇Friedwald計(jì)算法與均相法測定結(jié)果比較［J］. 海南醫(yī)學(xué)， 2015， 26（1）:64-67.

［15］ 葉應(yīng)嫵， 王毓三， 申子瑜. 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］. 第三版. 南京: 東南大學(xué)出版社， 2006:474.

［16］ 周新， 涂植光. 臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)［M］. 3版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社， 2003:27-29.

［17］ 李紅， 施嘉琛， 楊奕， 等. 大鼠不同部位采血血清肌酸激酶及其同工酶檢測結(jié)果［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2014， 34 （1）:68-70.

［18］ 李紅， 丁曉靜， 施嘉琛. 大鼠不同部位采集血液標(biāo)本生化檢測的質(zhì)量控制［J］. 毒理學(xué)雜志， 2013， 27（6）:457-458.

［19］ 李紅， 丁曉靜， 施嘉琛. 不同實(shí)驗(yàn)方法和試劑對大鼠血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果的影響［J］. 醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制， 2014， 30（5）: 490-492.

［20］ 李紅， 施嘉琛， 丁曉靜， 等. 生化分析儀的兩個(gè)模塊檢測大鼠血清生化結(jié)果的比較［J］. 醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制， 2014， 30（10）: 1063-1065.

［21］ 李紅， 尹杰， 施嘉琛， 等. 參加室間質(zhì)量評價(jià)提高毒理學(xué)生化檢測質(zhì)量［J］. 醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制， 2015， 30（8）:827-830.

［22］ 張堅(jiān)， 李紅， 滿青青， 等. 中國居民營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查中血脂檢測的質(zhì)量控制［J］. 中國慢性病預(yù)防與控制， 2008，16（5）:445-447.

Q95-33

B

1674-5817（2016）01-0054-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.011

2015-06-23

李 紅（1968-）， 女， 主管檢驗(yàn)師， 主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com